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1、知知识识梳梳理理考考点点突突破破分分层层限限时时跟跟踪踪练练三三十十七七营养物质营养物质 营养基质营养基质 水、碳源、氮源、无机盐水、碳源、氮源、无机盐 pH pH 氧气氧气 液体培养基液体培养基 防止杂菌污染防止杂菌污染 平板划线法平板划线法 连续划线连续划线 稀释涂布平板法稀释涂布平板法 梯度稀释梯度稀释 临时保藏临时保藏 甘油管藏甘油管藏 生存环境生存环境 尿素尿素 选择选择 特定种类特定种类 抑制或阻止抑制或阻止 稀释涂布平板法稀释涂布平板法 30300 表层表层 一定稀释范围一定稀释范围 (CV)M 菌落菌落 菌落菌落 酚红酚红 2NH3 C1酶酶、CX酶酶和葡萄糖苷和葡萄糖苷酶酶
2、复合酶复合酶 纤维二糖纤维二糖 葡萄糖葡萄糖 红色复合物红色复合物 纤维素纤维素 透明圈透明圈 纤维素纤维素 选择培养基选择培养基 梯度稀释梯度稀释 透明圈透明圈 条件条件结果结果常用方法常用方法应用范围应用范围消消毒毒较为较为温温和的物和的物理或化理或化学方法学方法仅杀仅杀死物体死物体表面或内部表面或内部的部分的部分对对人人体有害的微体有害的微生物生物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温的液体不耐高温的液体化学化学药剂药剂消消毒法毒法用酒精擦拭双手,用酒精擦拭双手,用用氯氯气消毒水源气消毒水源灭灭菌菌强强烈的烈的理化因理化因素素杀杀死物体内死物体内外所有的微外所有
3、的微生物,包括生物,包括芽芽孢孢和和孢孢子子灼灼烧灭烧灭菌法菌法接种工具接种工具干干热灭热灭菌法菌法玻璃器皿、金属玻璃器皿、金属工具工具高高压压蒸汽蒸汽灭灭菌法菌法培养基及容器的培养基及容器的灭灭菌菌方方法法平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法注注意意事事项项(1)接种接种环环的灼的灼烧烧第一次划第一次划线线前:前:杀杀死接种死接种环环上的微生物,避免上的微生物,避免污污染培养物染培养物之后每次划之后每次划线线前:前:杀杀死残留菌种,保死残留菌种,保证证每每次划次划线线菌种来自上次划菌种来自上次划线线末端末端划划线结线结束后:束后:杀杀死残留菌种,避免死残留菌种,避免污污染染环环境
4、和感染操作者境和感染操作者(2)灼灼烧烧接种接种环环之后,要冷却后再之后,要冷却后再进进行取种,行取种,以免温度太高以免温度太高杀杀死菌种死菌种(3)划划线时线时最后一区域不要与第一区域相最后一区域不要与第一区域相连连(4)划划线线用力要大小适当,防止用力用力要大小适当,防止用力过过大将培大将培养基划破养基划破(1)稀稀释释操作操作时时:每支:每支试试管及其中管及其中的的9 mL水、移液管等均需水、移液管等均需灭灭菌;菌;操作操作时时,试试管口和移液管管口和移液管应应在离在离火焰火焰1 cm2 cm处处(2)涂布平板涂布平板时时涂布器用体涂布器用体积积分数分数为为70%酒精酒精消毒,取出消毒,
5、取出时时,让让多余酒精在多余酒精在烧烧杯中滴尽,然后将沾有少量酒精杯中滴尽,然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃的涂布器在酒精灯火焰上引燃不要将不要将过热过热的涂布器放在盛放的涂布器放在盛放酒精的酒精的烧烧杯中,以免引燃其中的杯中,以免引燃其中的酒精酒精目目的的在培养基上形成由在培养基上形成由单单个菌种繁殖而来的子个菌种繁殖而来的子细细胞群体胞群体菌落菌落培培养养平板冷凝后倒置培养,使培养基表面的水分更好地平板冷凝后倒置培养,使培养基表面的水分更好地挥发挥发,防止皿盖上水珠落入,防止皿盖上水珠落入培养基造成培养基造成污污染染比较项目比较项目间接计数法间接计数法(稀释涂布平板稀释涂布平板
6、法法)直接计数法直接计数法(显微计数显微计数法法)原理原理当当样样品的稀品的稀释释度足度足够够高高时时,培养基表面生培养基表面生长长的一个菌的一个菌落,来源于落,来源于样样品稀品稀释释液中液中的一个活菌,通的一个活菌,通过统计过统计平平板上的菌落数,就能推板上的菌落数,就能推测测出出样样品中大品中大约约含有多少活含有多少活菌菌利用特定利用特定细细菌菌计计数板数板或血或血细细胞胞计计数板,在数板,在显显微微镜镜下下计计算一定容算一定容积积的的样样品中微生物的品中微生物的数量数量公式公式每克每克样样品中的菌落数:品中的菌落数:(CV)M C:某稀:某稀释释度下平板上生度下平板上生长长的平的平均菌落
7、数;均菌落数;V:涂布:涂布平板平板时时所用的稀所用的稀释释液液的体的体积积(mL);M:稀:稀释释倍数倍数每毫升原液所含每毫升原液所含细细菌菌数:每小格平均数:每小格平均细细菌菌数数40010 000稀稀释释倍数倍数缺点缺点当两个或多个菌体当两个或多个菌体连连在一起在一起时时,平板上,平板上观观察到的只是一个菌落察到的只是一个菌落不能区分不能区分细细胞死活胞死活结果结果比比实际值实际值偏小偏小比比实际值实际值偏大偏大比较比较项目项目对照对照重复重复目的目的排除非排除非测试测试因素因素对对实验结实验结果的影响果的影响排除偶然因素排除偶然因素对对实验结实验结果的影响果的影响实例实例空白空白对对照
8、:确定培照:确定培养基制作是否合格养基制作是否合格同一稀同一稀释释度涂布度涂布至少至少3个平板个平板比较项目比较项目土壤中分解尿素的细菌土壤中分解尿素的细菌的分离的分离分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离方法方法利用以尿素利用以尿素为为唯一氮源唯一氮源的的选择选择培养基培养基进进行行选择选择培养培养利用富含利用富含纤维纤维素的素的选择选择培养培养基基进进行行选择选择培养培养原理原理只有分解尿素的只有分解尿素的细细菌能菌能够够合成合成脲脲酶酶,才能在以,才能在以尿素尿素为为唯一氮源的培养唯一氮源的培养基上生基上生长长因因为为培养基中含有丰富的培养基中含有丰富的纤纤维维素,因此能素,因此能够够分解分解纤维纤维素素的微生物具有更多的生存机的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖会而大量繁殖鉴定鉴定在培养基中加入酚在培养基中加入酚红红指指示示剂剂,指示,指示剂变红说剂变红说明明菌落中的菌体菌落中的菌体为为分解尿分解尿素的素的细细菌菌刚刚果果红红染色法,菌落周染色法,菌落周围围出出现现不不变红变红的透明圈的菌落的透明圈的菌落为为分解分解纤维纤维素的微生物的菌落素的微生物的菌落酵母膏酵母膏无机无机盐盐淀粉淀粉纤维纤维素粉素粉琼琼脂脂CR溶液溶液水水培养培养基甲基甲培养培养基乙基乙分层限时跟踪练(三十七)分层限时跟踪练(三十七)