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1、第第3636讲微生物的培养与应用讲微生物的培养与应用考情分析备考导航考情分析备考导航考考纲纲解解读读全国卷五年考全国卷五年考题统计题统计最新考最新考纲纲核心内容核心内容微生物的分离和微生物的分离和培养培养1.1.无菌技无菌技术术2.2.平板划平板划线线法和稀法和稀释释涂布平板涂布平板法接种微生物法接种微生物20152015全国全国卷卷T39;T39;20142014全国全国卷卷T39;T39;20132013全国全国卷卷T39;T39;20112011全国卷全国卷T39T39培养基培养基对对微生物微生物的的选择选择作用作用1.1.利用利用选择选择培养基培养基筛选筛选微生物微生物的方法的方法2.
2、2.常用微生物的常用微生物的计计数方法数方法:显显微微镜镜直接直接计计数和稀数和稀释释涂布平板涂布平板法法20152015全国全国卷卷T39(2);T39(2);20142014全国全国卷卷T39;T39;20112011全国卷全国卷T39(1)(3)T39(1)(3)考点一微生物的实验室培养考点一微生物的实验室培养知识梳理知识梳理 自主学习自主学习 夯实基础夯实基础1.1.培养基培养基(1)(1)概念概念:人们按照微生物对人们按照微生物对 的不同需求的不同需求,配制出供其生配制出供其生长繁殖的长繁殖的 。营养物质营养物质营养基质营养基质(2)(2)成分成分:(3)(3)分类分类:按照物理性质
3、可以分为按照物理性质可以分为 和固体培养基。和固体培养基。液体培养基液体培养基2.2.无菌技术无菌技术(1)(1)含义含义:培养微生物的操作中培养微生物的操作中,所有所有 的方法的方法。(2)(2)关键关键:防止外来杂菌的污染。防止外来杂菌的污染。(3)(3)无菌技术的方法、类型和对象无菌技术的方法、类型和对象 连一连连一连 防止杂菌污染防止杂菌污染3.3.大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养(1)(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基过程制备牛肉膏蛋白胨固体培养基过程:计算计算 溶化溶化灭菌灭菌倒倒平板。平板。(2)(2)纯化大肠杆菌的原理纯化大肠杆菌的原理:在培养基上将细菌稀释或分散成在培养基上
4、将细菌稀释或分散成 ,形成单个菌落形成单个菌落,此菌落是由一个细胞繁殖而来的子细胞群体。此菌落是由一个细胞繁殖而来的子细胞群体。(3)(3)微生物的常用接种方法微生物的常用接种方法:和稀释涂布平板法和稀释涂布平板法,接种过接种过程仍然是程仍然是 操作。操作。称量称量单个细胞单个细胞平板划线法平板划线法无菌无菌重点透析重点透析 剖析考点剖析考点 拓展深化拓展深化1.1.微生物的纯化培养微生物的纯化培养方法方法平板划平板划线线法法稀稀释释涂布平板法涂布平板法注意注意事事项项(1)(1)接种接种环环的灼的灼烧烧第一次划第一次划线线前前:杀杀死接种死接种环环上的上的微生物微生物,避免避免污污染培养物染
5、培养物每次划每次划线线前前:杀杀死残留菌种死残留菌种,保保证证每次划每次划线线菌种来自上次划菌种来自上次划线线末端末端划划线结线结束后束后:杀杀死残留菌种死残留菌种,避免避免污污染染环环境和感染操作者境和感染操作者(2)(2)灼灼烧烧接种接种环环之后之后,要冷却后再要冷却后再进进行操作行操作,以免温度太高以免温度太高杀杀死菌种死菌种(3)(3)划划线时线时最后一区域不要与第一最后一区域不要与第一区域相区域相连连(4)(4)划划线线用力要大小适当用力要大小适当,防止用力防止用力过过大将培养基划破大将培养基划破(1)(1)稀稀释释操作操作时时:每支每支试试管及其中的管及其中的9 9 mLmL水、移
6、液管等均需水、移液管等均需灭灭菌菌;操作操作时时,试试管口和移液管管口和移液管应应在离火焰在离火焰 1 12 cm 2 cm 处处(2)(2)涂布平板涂布平板时时涂布器用体涂布器用体积积分数分数为为70%70%酒精消酒精消毒毒,取出取出时时,让让多余酒精在多余酒精在烧烧杯中滴杯中滴尽尽,然后将沾有少量酒精的涂布器然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃在酒精灯火焰上引燃不要将不要将过热过热的涂布器放在盛放酒的涂布器放在盛放酒精的精的烧烧杯中杯中,以免引燃其中的酒精以免引燃其中的酒精酒精灯与培养皿距离要合适酒精灯与培养皿距离要合适,移移液管管液管管头头不要接触任何物体不要接触任何物体2.2.
7、消毒和灭菌的辨析消毒和灭菌的辨析条件条件结结果果常用方法常用方法应应用范用范围围消毒消毒较为较为温和温和的物理或的物理或化学方法化学方法仅杀仅杀死物体死物体表面或内部表面或内部的部分的部分对对人人体有害的微体有害的微生物生物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温的液体不耐高温的液体化学化学药剂药剂消毒法消毒法用酒精擦拭双手用酒精擦拭双手,用用氯氯气消毒水源气消毒水源灭灭菌菌强强烈的理烈的理化因素化因素杀杀死物体内死物体内外所有的微外所有的微生物生物,包括芽包括芽孢孢和和孢孢子子灼灼烧灭烧灭菌法菌法接种工具接种工具干干热灭热灭菌法菌法玻璃器皿、金属玻璃器皿、金属工具工具
8、高高压压蒸汽蒸汽灭灭菌法菌法培养基及容器的培养基及容器的灭灭菌菌题组例练题组例练 分类例练分类例练 提炼方法提炼方法1.(20151.(2015江西景德镇三检江西景德镇三检)无菌操作是微生物接种技术的关键无菌操作是微生物接种技术的关键;传统发酵传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中过程中,均要无菌操作。回答下列相关问题均要无菌操作。回答下列相关问题:(1)(1)消毒和灭菌是两个不同的概念消毒和灭菌是两个不同的概念,灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅
9、指杀死一部分对人体有害的病原菌而对丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理。皮肤皮肤饮用水饮用水牛奶牛奶注射器注射器培养皿培养皿接种环接种环培养基培养基果汁果汁酱油酱油手术刀手术刀A.A.B.B.C.C.D.D.以上全部以上全部(2)(2)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整,接种前要进行接种前要进行,在整个微生物的分离和培养中在整个微生物的分离和培养中,一定一定要注意在无菌条件下进行。要注意在无菌条件下进行。(3)(3)在
10、微生物的实验室培养中在微生物的实验室培养中,获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。下图是利用的入侵。下图是利用法进行大肠杆菌接种法进行大肠杆菌接种,把聚集的菌把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。为达到这一目的种逐步稀释分散到培养基的表面。为达到这一目的,操作上应注意操作上应注意:每次划线前要每次划线前要;冷却后从上一区划线末端开始划冷却后从上一区划线末端开始划;首尾区首尾区。(4)(4)培养大肠杆菌时培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对固体培在接种前需要检测培养基是否被污染。对固体培养基应采用的检测方法是养基应采用的检测方法是 ,观察培
11、养基上是否观察培养基上是否有菌落产生。有菌落产生。(5)(5)有位同学在家制作泡菜时有位同学在家制作泡菜时,为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素霉素,结果发酵失败结果发酵失败,原因可能是原因可能是 。解析解析:(1)(1)对于活体或高温导致其营养成分破坏的物质对于活体或高温导致其营养成分破坏的物质,采用消毒处理采用消毒处理,除此之外可采用灭菌处理。除此之外可采用灭菌处理。应采用消毒应采用消毒,应采用应采用灭菌灭菌,故选故选A A。(2)(2)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整pH,pH,培养基接培养基
12、接种前要进行高压蒸汽灭菌种前要进行高压蒸汽灭菌,再进行倒平板。再进行倒平板。(3)(3)微生物实验室培养的关键在于防止杂菌污染微生物实验室培养的关键在于防止杂菌污染,本题是采用平板划线本题是采用平板划线法接种法接种,需要注意的是连续划线时需要注意的是连续划线时,每次划线前要灼烧接种环每次划线前要灼烧接种环,同时划线同时划线结束首尾不能相连。结束首尾不能相连。(5)(5)制作泡菜时制作泡菜时,向泡菜坛中加入青霉素向泡菜坛中加入青霉素,由于青霉素具有杀菌作用由于青霉素具有杀菌作用(包包括乳酸菌括乳酸菌),),因此发酵失败。因此发酵失败。答案答案:(1)A(1)A(2)pH(2)pH高压蒸汽灭菌高压
13、蒸汽灭菌(3)(3)平板划线平板划线灼烧接种环灼烧接种环不连接不连接(不重叠不重叠)(4)(4)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当时间将未接种的培养基在适宜的温度下放置适当时间(5)(5)青霉素杀死了乳酸菌青霉素杀死了乳酸菌2.(20152.(2015四川眉山模拟四川眉山模拟)为验证某种中药牙膏是否像其广告宣传的一样为验证某种中药牙膏是否像其广告宣传的一样具有较强的抑菌功效具有较强的抑菌功效,某生物兴趣小组的同学设计了如下实验某生物兴趣小组的同学设计了如下实验(符合无符合无菌操作要求菌操作要求)。用无菌水漱口用无菌水漱口,向漱口液中加入适量的该中药牙膏向漱口液中加入适量的该中药牙膏;配制牛
14、肉膏蛋白胨固体培养基配制牛肉膏蛋白胨固体培养基;将上述样品接种到培养基上将上述样品接种到培养基上,在适宜条件下进行培养在适宜条件下进行培养;一段时间后一段时间后,对培养结果进行观察并进行菌落计数对培养结果进行观察并进行菌落计数请分析上述实验过程并回答下列问题。请分析上述实验过程并回答下列问题。(1)(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是:计算、称量、溶化、计算、称量、溶化、灭菌、灭菌、;培养基在分装前往往要采用培养基在分装前往往要采用法灭菌。法灭菌。(2)(2)本实验样品接种时最好采用本实验样品接种时最好采用法。培养一段时间后法。培养一段时间后,培养
15、培养基表面长出菌落基表面长出菌落,每一个标准菌落来源于样品中的每一个标准菌落来源于样品中的。(3)(3)本实验设计中的一个明显错误是本实验设计中的一个明显错误是,请加以改正请加以改正 。(4)(4)证明所用培养基已经彻底灭菌的方法是证明所用培养基已经彻底灭菌的方法是 。解析解析:本题考查微生物的培养和实验设计相关知识本题考查微生物的培养和实验设计相关知识。(1)(1)配制培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板配制培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板,培养基通培养基通常会用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。常会用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(2)(2)因为要对菌落进行计数所以应采用稀释涂布平板法
16、因为要对菌落进行计数所以应采用稀释涂布平板法,一个标准菌落一个标准菌落应是来自一个活菌繁殖而来的。应是来自一个活菌繁殖而来的。(3)(3)该实验中未设置对照实验该实验中未设置对照实验,这是不符合实验要求的这是不符合实验要求的,实验结果的说服实验结果的说服力也不强。因此应将漱口液均分成两份力也不强。因此应将漱口液均分成两份,一份加牙膏一份加牙膏,一份不加牙膏一份不加牙膏,且且在相同的条件下接种培养在相同的条件下接种培养,观察实验结果并比较得出结论。观察实验结果并比较得出结论。(4)(4)要验证培养基是否灭菌彻底应设置一个空白对照要验证培养基是否灭菌彻底应设置一个空白对照,即将未接种的培即将未接种
17、的培养基放在适宜的条件下培养养基放在适宜的条件下培养,若无菌落出现若无菌落出现,则证明培养基灭菌彻底。则证明培养基灭菌彻底。答案答案:(1)(1)倒平板高压蒸汽灭菌倒平板高压蒸汽灭菌(2)(2)稀释涂布平板一个活菌稀释涂布平板一个活菌(或一个细胞或一个细胞)(3)(3)未设置对照实验应将漱口液均分成两份未设置对照实验应将漱口液均分成两份,一份加牙膏一份加牙膏,一份不加一份不加牙膏牙膏,且在相同的条件下接种培养且在相同的条件下接种培养(4)(4)将未接种的培养基放在适宜的条件下培养一段时间将未接种的培养基放在适宜的条件下培养一段时间,若无菌落出现若无菌落出现,则证明培养基灭菌彻底则证明培养基灭菌
18、彻底考点二微生物的分离与计数考点二微生物的分离与计数知识梳理知识梳理 自主学习自主学习 夯实基础夯实基础1.1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数稀释涂布平板法稀释涂布平板法 样品稀释样品稀释 酚红酚红 2.2.分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离重点透析重点透析 剖析考点剖析考点 拓展深化拓展深化1.1.筛选微生物的两个实例比较筛选微生物的两个实例比较比比较较项项目目土壤中分解尿土壤中分解尿素的素的细细菌的分离菌的分离分解分解纤维纤维素的微生物的分素的微生物的分离离方法方法利用以尿素利用以尿素为为唯一氮源的唯一氮源的选择选择培养基培养基进进行行选择选
19、择培养培养利用利用纤维纤维素素为为唯一碳源的唯一碳源的选择选择培养基培养基进进行行选择选择培养培养原原理理只有分解尿素的只有分解尿素的细细菌能菌能够够合成合成脲脲酶酶,才能在以尿素才能在以尿素为为唯一氮源的培养基上生唯一氮源的培养基上生长长因因为为培养基中含有丰富的培养基中含有丰富的纤维纤维素素,因此能因此能够够分解分解纤纤维维素的微生物具有更多的素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖生存机会而大量繁殖鉴鉴定定在培养基中加入酚在培养基中加入酚红红指示指示剂剂,指示指示剂变红说剂变红说明尿素明尿素被分解被分解,从而从而说说明菌落中明菌落中的菌体的菌体为为分解尿素的分解尿素的细细菌菌刚刚果果红红染
20、色法染色法,菌落周菌落周围围出出现红现红色消失的透明圈色消失的透明圈,该该菌落菌落为为分解分解纤维纤维素的微素的微生物菌落生物菌落2.2.测定微生物数量的常用方法测定微生物数量的常用方法(1)(1)显微镜直接计数法显微镜直接计数法原理原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量的样品中微生物的数量。方法方法:用计数板计数用计数板计数。缺点缺点:不能区分死菌与活菌不能区分死菌与活菌。(2)(2)间接计数法间接计数法(活菌计数法活菌计数法)原理原理:当样品的稀释度足够高时当样品的稀释度足够高时,培养基表面生
21、长的一个菌落培养基表面生长的一个菌落,来源于来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品就能推测出样品中大约含有多少活菌中大约含有多少活菌。计算公式计算公式:每克样品中的菌株数每克样品中的菌株数=(=(C CV)V)M,M,其中其中,C,C代表某一稀释度下代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数平板上生长的平均菌落数,V,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M(mL),M代表稀释倍数代表稀释倍数。操作操作:设置重复组设置重复组,增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准增强实验的说服力
22、与准确性。同时为了保证结果准确确,一般选择菌落数在一般选择菌落数在3030300300的平板进行计数。的平板进行计数。【清错破疑清错破疑】正确理解正确理解“选择菌落在选择菌落在3030300300的平板的平板”计数计数(1)(1)只得到只得到1 1个菌落数在个菌落数在3030300300的平板是错误的。原因是不符合实验的的平板是错误的。原因是不符合实验的重复原则重复原则,易受到偶然因素的影响。易受到偶然因素的影响。(2)(2)并不是只要得到并不是只要得到3 3个个“菌落数在菌落数在3030300300的平板的平板”即可即可,而应该是涂布而应该是涂布的同一稀释度的平板符合的同一稀释度的平板符合“
23、菌落数在菌落数在3030300300的平板的平板”且无较大差异且无较大差异,才才能按照计算公式进行计算能按照计算公式进行计算,如得到如得到3 3个平板菌落数分别为个平板菌落数分别为230,30,240,230,30,240,虽虽然菌落数均在然菌落数均在“3030300300”之间之间,但但“3030”与与“230230”“”“240240”差异太大差异太大,应重新实验找出原因。应重新实验找出原因。题组例练题组例练 分类例练分类例练 提炼方法提炼方法1.(20151.(2015全国全国卷卷)已知微生物已知微生物A A可以产生油脂可以产生油脂,微生物微生物B B可以产生脂肪酶。可以产生脂肪酶。脂肪
24、酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题:(1)(1)显微观察时显微观察时,微生物微生物A A菌体中的油脂通常可用菌体中的油脂通常可用 染色。微生物染色。微生物A A产生的油脂不易挥发产生的油脂不易挥发,可选用可选用 (填填“萃取法萃取法”或或“水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法”)”)从菌体中提取。从菌体中提取。(2)(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B B的单菌落的单菌落,可从含有油料可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样作物种子腐烂物的土壤中取样,并应选用以并应选用以 为碳源的固体培养为碳源的固体培养基
25、进行培养基进行培养。(3)(3)若要测定培养液中微生物若要测定培养液中微生物B B的菌体数的菌体数,可在显微镜下用可在显微镜下用直接计数直接计数;若要测定其活菌数量若要测定其活菌数量,可选用可选用法进行计数。法进行计数。(4)(4)为了确定微生物为了确定微生物B B产生的脂肪酶的最适温度产生的脂肪酶的最适温度,某同学测得相同时间内某同学测得相同时间内,在在35 35、40 40、45 45 温度下降解温度下降解10 g10 g油脂所需酶量依次为油脂所需酶量依次为4 mg4 mg、1 mg1 mg、6 6 mg,mg,则上述三个温度中则上述三个温度中,条件下该酶活力最小。为了进一步确条件下该酶活
26、力最小。为了进一步确定该酶的最适温度定该酶的最适温度,应围绕应围绕设计后续实验设计后续实验。解析解析:(1)(1)脂肪可用苏丹脂肪可用苏丹染液染液(或苏丹或苏丹染液染液)进行染色。对于不易挥发进行染色。对于不易挥发的物质可用萃取法加以提取。的物质可用萃取法加以提取。(2)(2)能产生脂肪酶的微生物能产生脂肪酶的微生物B B可存在于含有油可存在于含有油料作物种子的腐烂物的土壤料作物种子的腐烂物的土壤,为了选择培养为了选择培养,固体培养基上应以油脂作为唯固体培养基上应以油脂作为唯一碳源。一碳源。(3)(3)测定培养液中的微生物的菌体数测定培养液中的微生物的菌体数,可在显微镜下用血细胞计数可在显微镜
27、下用血细胞计数板直接计数板直接计数;而要测定活菌数而要测定活菌数,则可利用稀释涂布平板法进行计数则可利用稀释涂布平板法进行计数,(4),(4)相同相同时间降解相等质量油脂所需酶量最多的温度下时间降解相等质量油脂所需酶量最多的温度下,其酶活力最小其酶活力最小,即即45 45 下下酶活力最小。三个温度下酶活力最大的温度是酶活力最小。三个温度下酶活力最大的温度是40,40,但但40 40 不一定是该不一定是该酶的最适温度酶的最适温度,故应围绕故应围绕40 40 设计后续实验。设计后续实验。答案答案:(1)(1)苏丹苏丹(或苏丹或苏丹)萃取法萃取法(2)(2)油脂油脂(3)(3)血细胞计数板稀释涂布平
28、板血细胞计数板稀释涂布平板(4)45(4)4540402.(20152.(2015江西南昌二模江西南昌二模)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题下列问题:(1)(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶,该酶是由该酶是由3 3种组分组成种组分组成的复合酶的复合酶,其中的葡萄糖苷酶可将其中的葡萄糖苷酶可将分解成分解成。(2)(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)(CR)时时,CR,CR可与纤维素形成可与纤维素形成.色复合物。用含有色复合物。用含有CRCR的该种培养基
29、培养纤维素分解菌时的该种培养基培养纤维素分解菌时,培养基上会出培养基上会出现以该菌的菌落为中心的现以该菌的菌落为中心的。(3)(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落,某同学设某同学设计了甲、乙两种培养基计了甲、乙两种培养基(成分见下表成分见下表):):注注:“+”:“+”表示有表示有,“-”,“-”表示无。表示无。酵母膏酵母膏 无机无机盐盐淀粉淀粉纤维纤维素素粉粉琼琼脂脂CRCR溶液溶液水水培养基甲培养基甲+-+培养基乙培养基乙+-+据表判断据表判断,培养基甲培养基甲 (填填“能能”或或“不能不能”)用于分离和鉴别纤用于分离和
30、鉴别纤维素分解菌维素分解菌,原因是原因是;培养基乙培养基乙(填填“能能”或或“不能不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌用于分离和鉴别纤维素分解菌,原因是原因是 。解析解析:(1)(1)纤维素酶由纤维素酶由3 3种组分组成的复合酶种组分组成的复合酶,即即C C1 1酶、酶、C Cx x酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶,其中前两种酶使纤维素分解为纤维二糖其中前两种酶使纤维素分解为纤维二糖,葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。葡萄糖。(2)(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)(CR)时时,CR,CR可与纤维素形成红色复可与纤维素形成红色复合
31、物合物,用含有用含有CRCR的该种培养基培养纤维素分解菌时的该种培养基培养纤维素分解菌时,培养基上会出现以该培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈。菌的菌落为中心的透明圈。(3)(3)根据表格中的相关信息甲不能用于分离纤维素分解菌根据表格中的相关信息甲不能用于分离纤维素分解菌,因为其中没有因为其中没有琼脂琼脂,液体培养基不能分离得到单菌落。培养基乙不能用于分离纤维素分液体培养基不能分离得到单菌落。培养基乙不能用于分离纤维素分解菌解菌,因为培养基中没有纤维素因为培养基中没有纤维素,无法形成红色复合物无法形成红色复合物,无法筛选。无法筛选。答案答案:(1)(1)纤维二糖葡萄糖纤维二糖葡萄糖(2)
32、(2)红透明圈红透明圈(3)(3)不能液体培养基不能分离单菌落不能乙培养基中没有纤维素不能液体培养基不能分离单菌落不能乙培养基中没有纤维素,不会形成不会形成CR-CR-纤维素红色复合物纤维素红色复合物3.(20143.(2014全国全国卷卷)为了调查某河流的水质状况为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量水样中的细菌含量,并进行了细菌分离等工作。回答下列问题并进行了细菌分离等工作。回答下列问题:(1)(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板
33、先行培养了一段时间随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间,这样做的目的是这样做的目的是;然后然后,将将1 1 mLmL水样稀释水样稀释100100倍倍,在在3 3个平板上用涂布法分别接入个平板上用涂布法分别接入0.1 0.1 mLmL稀释稀释液液;经适当培养后经适当培养后,3,3个平板上的菌落数分别为个平板上的菌落数分别为3939、3838和和3737。据此可得出每。据此可得出每升水样中的活菌数为升水样中的活菌数为 。(2)(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时,接种环通过接种环通过灭菌灭菌,在第二次及以后的划线时在第二次及以后的划
34、线时,总是从上一次划线的末端开始划线。这总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是样做的目的是 。(3)(3)示意图示意图A A和和B B中中,表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。的结果。(4)(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀,一部分进行静置培一部分进行静置培养养,另一部分进行振荡培养。结果发现另一部分进行振荡培养。结果发现:振荡培养的细菌比静置培养的细振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是菌生长速度快。分析其原因是:振荡培养能提高培养液中振荡培养能提高培养液中 的含量
35、的含量,同时可使菌体与培养液充分接触同时可使菌体与培养液充分接触,提高提高的利用率。的利用率。解析解析:(1)(1)为了检测培养基平板灭菌是否合格为了检测培养基平板灭菌是否合格,可在涂布接种前可在涂布接种前,随机取若随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间。干灭菌后的空白平板先行培养一段时间。0.1 0.1 mLmL 稀释液中平均有稀释液中平均有3838个活个活菌菌,可推测每升水样中的活菌数可推测每升水样中的活菌数=38101001 000=3.810=38101001 000=3.8107 7。(2)(2)接种接种环、接种针或其他金属用具直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧环、接种针或其他金属
36、用具直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧,可以迅可以迅速彻底地灭菌。在第二次及以后的划线时速彻底地灭菌。在第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始总是从上一次划线的末端开始划线划线,其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(3)(3)比较两图比较两图可以看出可以看出,A,A是用平板划线法接种培养后得到的结果是用平板划线法接种培养后得到的结果,B,B是用稀释涂布平板是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。法接种培养后得到的结果。(4)(4)由于振荡培养可以提高培养液中溶解氧的由于振荡培养可以提高培养液中溶解氧的含量含量,还可以使菌体与培养液
37、充分接触还可以使菌体与培养液充分接触,提高营养物质的利用率提高营养物质的利用率,因此振荡因此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。答案答案:(1)(1)检测培养基平板灭菌是否合格检测培养基平板灭菌是否合格3.83.810107 7(2)(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(3)B(4)(4)溶解氧营养物质溶解氧营养物质构建知识网络强化答题语句构建知识网络强化答题语句【建网络图建网络图】填充填充:，灭菌灭菌平板划线法平板划线法选择培养基选择培养基间接计数法间接计数法(活菌计数法活菌计数法)【要语强
38、记要语强记】1.1.无菌操作技术包括消毒和灭菌无菌操作技术包括消毒和灭菌,消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化学药剂消毒和紫外线消毒等学药剂消毒和紫外线消毒等;灭菌包括灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸灭菌包括灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。汽灭菌。2.2.培养基的制备包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板等步骤培养基的制备包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板等步骤,倒平倒平板的目的是防止培养皿盖上的水滴滴入培养基造成污染。板的目的是防止培养皿盖上的水滴滴入培养基造成污染。3.3.大肠杆菌的纯化方法包括平板划线法和稀释涂布平板法。平板划大肠杆菌的纯化方法包括平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法要求多次划线线法要求多次划线,稀释涂布平板法要求菌液要充分地稀释。稀释涂布平板法要求菌液要充分地稀释。4.4.微生物的计数要求制作多个平板微生物的计数要求制作多个平板,且每个平板上能长出且每个平板上能长出 30 30300 300 个菌落的方可作为计数依据个菌落的方可作为计数依据。5.5.尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基,前者所用前者所用的培养基中尿素是唯一的氮源的培养基中尿素是唯一的氮源,后者所用的培养基中纤维素是唯一的后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。碳源。