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1、课题微生物的实验室培养 现在学习的是第1页，共45页放线菌放线菌现在学习的是第2页，共45页真菌真菌青霉菌青霉菌现在学习的是第3页，共45页黑曲霉黑曲霉酵母菌酵母菌现在学习的是第4页，共45页想一想想一想 这些肉眼看不到的微生物是怎样获得呢？这些肉眼看不到的微生物是怎样获得呢？现在学习的是第5页，共45页课题课题1微生物的实验室培养微生物的实验室培养专题专题2 微生物的培养与应用微生物的培养与应用现在学习的是第6页，共45页一、培养基一、培养基1、培养基的定义：、培养基的定义：培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养物质。
2、配置出供其生长繁殖的营养物质。现在学习的是第7页，共45页2、培养基分类：、培养基分类：（1）液体培养基：配置成的液体状态的基质。）液体培养基：配置成的液体状态的基质。现在学习的是第8页，共45页（2）固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂）固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂琼脂配制成的固体状态的基质。琼脂配制成的固体状态的基质。2、培养基的分类：、培养基的分类：现在学习的是第9页，共45页你知道固体培养基的来历吗？为了能直接观察培养物的形态及生长情况，科学家希望为了能直接观察培养物的形态及生长情况，科学家希望能将微生物培养在固体表面上，就像微生物生长在橘子皮或能将微生物培养在固体表面上，就像
3、微生物生长在橘子皮或土豆上一样。最初，德国医生罗伯特土豆上一样。最初，德国医生罗伯特科赫此试着用明胶作科赫此试着用明胶作培养基的凝固剂。培养基的凝固剂。但是，人们很快发现，明胶在但是，人们很快发现，明胶在20 以上以上就变软了，很难进行分离微生物的划线操作。而大多数细菌就变软了，很难进行分离微生物的划线操作。而大多数细菌的培养温度都不低于的培养温度都不低于25。科赫的同事。科赫的同事Walter Hesse发现琼发现琼脂比明胶更适合做培养基的凝固剂。这个改进的方法很快就脂比明胶更适合做培养基的凝固剂。这个改进的方法很快就被大家采纳。被大家采纳。现在学习的是第10页，共45页菌落：单个或少数细菌
4、在固体培养基上大量繁殖时，就会单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。现在学习的是第11页，共45页 培养基一般都含有培养基一般都含有碳源、氮源、无机盐碳源、氮源、无机盐(包括微量元包括微量元素素)、水、水。注意注意碳源碳源有机碳源（葡萄糖、果糖、蔗糖等）有机碳源（葡萄糖、果糖、蔗糖等）、无机碳源、无机碳源、无机碳源、无机碳源有机氮源有机氮源花生饼粉、黄豆饼粉、酵母粉、蛋白胨等花生饼粉、黄豆饼粉、酵母粉、蛋白胨等无机氮源无
5、机氮源氨水、铵盐和硝酸盐。氨水、铵盐和硝酸盐。归纳归纳现在学习的是第12页，共45页不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有_、_、和、和 _ _、_等营养物质，等营养物质，另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对_、_以及对以及对_,_,例如例如:培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加_，培养霉，培养霉菌时需将培养基的菌时需将培养基的pHpH调至调至_，培养细菌时需将，培养细菌时需将pHpH调调至至_，培养厌氧微生物时则需要提供，培养厌氧微生物时则需要提供_的的条件。条件。水水碳源碳源氮源氮源无机盐无机盐pHpH特殊营养物质特殊营养物质氧气的
6、要求氧气的要求维生素维生素酸性酸性 中性或微碱性中性或微碱性 无氧无氧现在学习的是第13页，共45页二、无菌技术二、无菌技术1、什么是无菌技术、什么是无菌技术 无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有有防止杂菌污染防止杂菌污染的方法。的方法。现在学习的是第14页，共45页注意事项注意事项p p对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。消毒。消毒。消毒。p p将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行将用于微生物
7、培养的器皿、接种用具和培养基等进行将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。灭菌。灭菌。灭菌。p p为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。焰附近进行。焰附近进行。焰附近进行。p p实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
8、的物品相接触。的物品相接触。的物品相接触。现在学习的是第15页，共45页无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效避免操答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。作者自身被微生物感染。现在学习的是第16页，共45页2、消毒与灭菌、消毒与灭菌 灭菌灭菌是指使用强烈的物理或化学因素杀死体是指使用强烈的物理或化学因素杀死体内外内外所有的微生物，包括芽孢和孢子所有的微生物，包括芽孢和孢子。消毒消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死是指使用较为温和的物理或化学方法杀死或除去部
9、分微生物，对于芽孢或孢子则不起作用。或除去部分微生物，对于芽孢或孢子则不起作用。现在学习的是第17页，共45页有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌环境适宜（如温度、水分适
10、宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌细菌、原生动物、真菌和植物等细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的产生的一种有繁殖或休眠作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。生殖细胞。能直接发育成新个体。现在学习的是第18页，共45页现在学习的是第19页，共45页比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒灭菌较为温和较为温和强烈强烈部分生活状态部分生活状态的微生物的微生物不能不能全部微生物全部微生物能能现在学习的是第20页，共45页1 1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100 100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75
11、 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气氯气消毒水源消毒水源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法现在学习的是第21页，共45页(1)(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法（1 1）日常日常生活经生活经常用常用到的是到的是 煮沸煮沸 消毒法；消毒法；（2 2）对一些）对一些不耐高温不耐高温的的液体液体，则使用，则使用 巴
12、氏巴氏 消消毒法毒法（3 3）对）对接种室接种室、接种箱接种箱或或超净工作台超净工作台首首先喷先喷洒洒 石炭酸或煤酚皂石炭酸或煤酚皂 等溶液以增强消毒效果，等溶液以增强消毒效果，然后使用然后使用 紫外线紫外线 进行物理消毒。进行物理消毒。（4 4）实验操作者的）实验操作者的双手双手使用使用 酒精酒精 进行消毒；进行消毒；（5 5）饮水水源饮水水源用用 氯气氯气 进行消毒。进行消毒。现在学习的是第22页，共45页1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、12
13、1 121 下维持下维持15-30min.15-30min.(2)(2)灭菌的方法：灭菌的方法：现在学习的是第23页，共45页（1 1）接种环、接种针、试管口等使用）接种环、接种针、试管口等使用 灼烧灼烧 灭菌法；灭菌法；（2 2）玻璃器皿、金属用具等使用）玻璃器皿、金属用具等使用 干热干热 灭菌法，所灭菌法，所用器械是用器械是 干热灭菌箱干热灭菌箱 ；（3 3）培养基、无菌水等使用）培养基、无菌水等使用 高压蒸汽高压蒸汽 灭菌法灭菌法，所，所用器械是用器械是 高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅 。现在学习的是第24页，共45页思考题思考题 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。请你判断以下材料
14、或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿 （2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3）实验操作者的双手实验操作者的双手答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒。）需要消毒。现在学习的是第25页，共45页三、实验安排三、实验安排 本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养，实验过程分为两个阶段：纯化培养，实验
15、过程分为两个阶段：纯化培养，实验过程分为两个阶段：纯化培养，实验过程分为两个阶段：1、制备培养基、制备培养基2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌现在学习的是第26页，共45页1、制备培养基、制备培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL（1）计算）计算 根据下列培养基配方比例，计算配置根据下列培养基配方比例，计算配置根据下列培养基配方比例，计算配置根据下列培养基配方比例，计算配置100mL100mL培培培培养基时，各成
16、分的用量。养基时，各成分的用量。养基时，各成分的用量。养基时，各成分的用量。现在学习的是第27页，共45页（2）称量）称量注意注意注意注意 牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称取时动作要牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖。迅速，称后要及时盖上瓶盖。蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏用玻璃棒挑取牛肉膏用玻璃棒挑取牛肉膏现在学习的是第28页，共45页（3）溶化）溶化加水加热熔化牛肉膏；加水加热熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化钠继加入蛋白胨和氯化钠继续加热；续加热；加入琼脂；加入琼脂；用蒸馏水定容到用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而整个过程不断用玻棒搅拌，目
17、的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。导致烧杯破裂。现在学习的是第29页，共45页（4）灭菌）灭菌 在压力为在压力为100kPa，温度为，温度为121条件条件下，灭菌下，灭菌15-30min。（5）倒平板）倒平板现在学习的是第30页，共45页倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术现在学习的是第31页，共45页 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。讨论讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么
18、办法来估计培养基才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？的温度？现在学习的是第32页，共45页2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上
19、的水珠落入培养基，造成污染。水珠落入培养基，造成污染。现在学习的是第33页，共45页 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。微生物。现在学习的是第34页，共45页2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌（1）平板划线法）平板划线法 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面平
20、板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到有一个细基的表面。在数次划线后培养，可以分离到有一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。现在学习的是第35页，共45页微生物的接种技术微生物的接种技术平平板板划划线线法法现在学习的是第36页，共45页培培养养基基表表面面的的单单菌菌落落现在学习的是第37页，共45页 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧要灼
21、烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？接种环吗？为什么？议一议议一议现在学习的是第38页，共45页 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种
22、的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。现在学习的是第39页，共45页 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始答：
23、划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。到由单个细菌繁殖而来的菌落。议一议议一议现在学习的是第40页，共45页（2）稀释涂布法）稀释涂布法 稀释涂布法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将稀释涂布法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。进行培养。现在学习的是第41页，共45页微生物的接种技术微生物的接
24、种技术稀稀释释涂涂布布平平板板法法现在学习的是第42页，共45页应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等吸管要在酒精灯火焰周围等等.现在学习的是第43页，共45页四、结果分析与评价四、结果分析与评价 培养培养12h12h与与24h24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同（一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温12d后无
25、菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录现在学习的是第44页，共45页 菌种的保存菌种的保存接种到固体斜面培养接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于基，菌落长成后置于44冰箱保存。冰箱保存。五、课题延伸五、课题延伸.长期保存：长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法.临时保藏：临时保藏：现在学习的是第45页，共45页