《课题一微生物的实验室培养.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《课题一微生物的实验室培养.ppt（65页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、课题一微生物的一微生物的实验室培养室培养现在学习的是第1页，共65页课题课题1 1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用现在学习的是第2页，共65页微生物包括哪五类：微生物包括哪五类：病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物基础知识微生物基础知识现在学习的是第3页，共65页（一）（一）细菌细菌细菌：细菌：单细胞不分枝的原核微生物单细胞不分枝的原核微生物。细菌细胞细菌细胞微小而透明微小而透明，通常用适当染料，通常用适当染料染染色色后显微镜观察后显微镜观察图图1
2、-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌 B.杆菌杆菌 C.弧菌弧菌现在学习的是第4页，共65页细菌细胞由外向里依次有鞭毛鞭毛、菌菌（纤）毛纤）毛、荚膜荚膜、细胞壁细胞壁、细胞膜、细胞膜、细胞质细胞质，细胞质细胞质中又有液泡、储中又有液泡、储存性颗粒、核质存性颗粒、核质等等。细菌的构造细菌的构造图图图图1-3 1-3 细菌的结构细菌的结构细菌的结构细菌的结构现在学习的是第5页，共65页细胞壁细胞壁n n结构特点：坚韧且有弹性结构特点：坚韧且有弹性n细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？n 固定细胞外形；固定细胞外形；w w 保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；保
3、护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；w w 阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞；使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。伤伤寒寒杆杆菌菌细细胞胞壁壁中中含含毒毒素素现在学习的是第6页，共65页 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽芽孢孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强
4、的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌发，形成一个细菌.现在学习的是第7页，共65页菌落：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做的子细胞群体，叫做菌落菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。现在
5、学习的是第8页，共65页菌落细菌的菌落特征因细菌的菌落特征因种而异种而异 现在学习的是第9页，共65页（二）（二）放线菌放线菌1 1、结构：、结构：单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）现在学习的是第10页，共65页链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/32/3是是由放线菌产生的由放线菌产生的 应用:现在学习的是第11页，共65页（三）病毒1 病毒的结构病毒的结构现在学习的是第12页，共65页病毒病毒 现在学习的是第1
6、3页，共65页SARS病毒、病毒、禽流感病毒禽流感病毒现在学习的是第14页，共65页朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）现在学习的是第15页，共65页2、病毒的增殖：现在学习的是第16页，共65页（四）真菌（四）真菌现在学习的是第17页，共65页如图是酵母菌电子显微镜下如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构的形态结构酵母菌和霉菌青霉青霉现在学习的是第18页，共65页生殖生殖直立菌丝直立菌丝 营养菌丝营养菌丝腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖现在学习的是第19页，共65页一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成培养基（培养液）是由人工方法配制而成的
7、，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1 1）按物理状态来分：培养基可分为）按物理状态来分：培养基可分为固体培养固体培养基基、液体培养基液体培养基和和半固体培养基半固体培养基。其中固体培养。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定等。基用于菌种分离、鉴定等。（2 2）按功能来分，可分为）按功能来分，可分为选择培养基选择培养基和和鉴别培养鉴别培养基基。（3 3）按成分来分，可分为）按成分来分，可分为天然培养基天然培养基和和合成培养合成培养基基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途现在学习的是第20页，共65页培养基的种类培养基的种类液体培养基半固体培养基
8、固体培养基据物理性质分天然培养基合成培养基据化学成分分选择培养基鉴别培养基据用途分常用于工业生产常用于观察微生物的运动、鉴定菌种用于微生物的分离、计数常用于工业生产常用于分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。例如，在培养基中加入青霉素，以抑制细菌、放线菌的生长，从而分离到酵母菌和霉菌。又如，在培养基中加入高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长。根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的微生物。例如，在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌
9、：如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。现在学习的是第21页，共65页标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离,鉴定,计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生，产降低成本目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离现在学习的是第22页，共65页固体培养基：菌落固体培养基：菌落现在学习的是第23页，共65页液体培养基：液体培养
10、基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长现在学习的是第24页，共65页半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)(是否运动是否运动)现在学习的是第25页，共65页选择培养基选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物现在学习的是第26页，共65页大肠杆菌呈大肠杆菌呈大肠杆菌呈大
11、肠杆菌呈 黑色中心黑色中心黑色中心黑色中心 ,有金属光泽有金属光泽有金属光泽有金属光泽大肠杆菌在大肠杆菌在大肠杆菌在大肠杆菌在伊红美蓝伊红美蓝伊红美蓝伊红美蓝培养基上典型特征培养基上典型特征培养基上典型特征培养基上典型特征 鉴定培养基：鉴定培养基：鉴定所培养生物的类型鉴定所培养生物的类型现在学习的是第27页，共65页2、培养基配制原则：（1）目的要明确目的要明确：根据微生物的种类、培养目的：根据微生物的种类、培养目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对培养物质的需求不同。培养物质的需求不同。（2）营养要协调营养要协调：注意各种营养物质的浓度和：注
12、意各种营养物质的浓度和比例。比例。（3）pH要适宜要适宜：各种微生物适宜生长的：各种微生物适宜生长的pH范围不同。范围不同。细菌细菌pH为：为：6.5-7.5；放线菌放线菌pH为：为：7.5-8.5；真菌真菌pH为：为：5.0-6.0。现在学习的是第28页，共65页3、培养基的营养构成、培养基的营养构成 不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳碳源源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐等营养物质，另外还等营养物质，另外还需要满足微生物生长对需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质特殊营养物质,例如例如:生长因子生长因子(即细菌生长必需，而自身不即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物
13、能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。等的要求。现在学习的是第29页，共65页碳源、氮源、生长因子的比较碳源、氮源、生长因子的比较来 源常用原料功 能碳源CO2、NaHCO3、糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等糖类构成细胞物质和一些代谢产物，有些还是异养做生物的主要能源物质氮源N2、NH3、铵盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏和蛋白胨等铵盐、硝酸盐等合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物生长因子维生素、氨基酸、碱基酶、核酸等的组成成分现在学习的是第30页，共65页（二）无菌技术（二）无菌技术1.1.无菌技术
14、的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。成功地培养微生物的关键。无菌技术包括：无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒清洁和消毒；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近 旁进行；旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与）避免已灭菌处理的材料用具与
15、周围物品周围物品 相接触。相接触。现在学习的是第31页，共65页（）（）消毒定义：消毒定义：指使用较为指使用较为温和温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部内部一部分一部分对人体有害的微生物对人体有害的微生物。（。（不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子）2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 使用使用强烈强烈的理化因素杀死物体内外的理化因素杀死物体内外所有的所有的微生物，微生物，包括包括芽孢和孢子芽孢和孢子，而达到，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普
16、通也是最重要的技术。（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：现在学习的是第32页，共65页比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能消毒与灭菌的比较消毒与灭菌的比较现在学习的是第33页，共65页1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒毒;氯气消毒水源氯气消毒水
17、源4 4、紫外线消毒紫外线消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法现在学习的是第34页，共65页1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌接种环、接种针、试管口接种环、接种针、试管口2 2、干热灭菌：干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min.15-30min.(2)灭菌的方法：灭菌的方法：现在学习的是第35页，共65页 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最，它可以杀灭所有的生
18、物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。坏。有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。而空气中的其他微生物不能通过。培养微生物的培养皿是由培养微生物的培养
19、皿是由正反两平面板互扣而成正反两平面板互扣而成，这种器具是专为，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。防止空气中微生物的污染而设计的。现在学习的是第36页，共65页1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实
20、验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需要消毒。现在学习的是第37页，共65页3.3.微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存现在学习的是第38页
21、，共65页三、实验操作三、实验操作（一一.）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）现在学习的是第39页，共65页1 1计算、称量计算、称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步骤现在学习的是第40页，共65
22、页 8 8灭菌灭菌:将将5050mlml培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为入高压蒸气灭菌锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将将培培养皿养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2 2h h。9 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2 2
23、d d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.10 10无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培养的温室中培养24482448小时，以小时，以检查灭菌是否彻底。检查灭菌是否彻底。现在学习的是第41页，共65页倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术现在学习的是第42页，共65页 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能用来倒平板。你用左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？什么办法来估计培养基的温度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶可以用手触摸盛有培养基的锥
24、形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。现在学习的是第43页，共65页3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后
25、，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。不要用这个平板培养微生物。现在学习的是第44页，共65页（二）、纯化大肠杆菌（二）、纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法平板划线法和和
26、稀释涂布平板法稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后在数次画线后,可以分离到可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体胞群体,这就是这就是菌落菌落.微生物的接种技术微生物的接种技术微生物的接种技术微生物的接种技术现在学习的是第45页，共65页菌落：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的
27、，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。现在学习的是第46页，共65页菌落细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种而异 现在学习的是第47页，共65页霉菌的菌落特霉菌的菌落特征征因种而异因种而异菌落现在学习的是第48页，共65页接种环接种环接种针接种针现在学习的是第49页，共65页现在学习的是第50页，共65页 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作结束时，仍然需要灼
28、烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，便得到菌落。
29、划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。避免细菌污染环境和感染操作者。现在学习的是第51页，共65页 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使
30、细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。现在学习的是第52页，共65页现在学习的是第53页，共65页涂布器涂布器现在学习的是第54页，共65页现在学习的是第55页，共65页 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2 2步应如步应如何进行无菌操作？何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯
31、与培。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。要在酒精灯火焰周围等等。现在学习的是第56页，共65页微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养现在学习的是第57页，共65页四、课题成果评价四、课题成果评价（一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的
32、，否则需要重新制备。的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，(在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐)则说则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，(在某培养基上出现了在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。种特征
33、不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。)则说明接种过程中，无菌则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。学态度与习惯。现在学习的是
34、第58页，共65页微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养现在学习的是第59页，共65页31培养未接种培养基的作用是培养未接种培养基的作用是对照对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。32在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。33培养培养12h和和24h后的菌落大小后的菌落大小不同不同（相同、不同）；菌落分布位置（相同、不同）；菌落分布位置相同相同（相同、不同）（相同、不同）。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不
35、动，但菌落。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。数增多。34在某培养基上出现了在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。种特征不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。n结果分析与评价结果分析与评价n课题延伸课题延伸（P20）现在学习的是第60页，共65页菌种的保存菌种的保存1 1、临时保藏法、临时保藏法对象：对象：温度：温度：缺点：缺点：2 2、甘油管藏法：、甘油管藏法：对象：对象：温度：温度：频繁使用的菌种频繁使用的菌种 44（冰箱）（冰箱）容易被污染或容易被污染或产生变异产生变异 长期保存的菌种长期保存的菌
36、种 -20-20（冷冻箱）（冷冻箱）现在学习的是第61页，共65页本课题知识小结本课题知识小结:现在学习的是第62页，共65页【典例解析典例解析】例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于的具体情况分析。对于A
37、 A、B B选项，它的表达是不完整的。有的碳源选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于源，如蛋白胨。对于C C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而作为自养
38、型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提供无机盐。对则只能提供无机盐。对于于D D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3NH3可为可为硝化细菌提供能量和氮源。硝化细菌提供能量和氮源。答案：答案：D现在学习的是第63页，共65页例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确不正确不正确的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案：答案：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。
39、解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A说的是说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是A A正确的；正确的；B B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C C是正确的，因为与是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭
40、菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。就会把所接菌种也杀死。现在学习的是第64页，共65页编号成分含量粉状硫10g（NH4）2SO40.4gK2HPO44.0gMgSO49.25gFeSO40.5gCaCl20.5gH2O100ml例例3 3右表是某微生物培右表是某微生物培养基成分，请据此回答：养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养）右表培养基可培养的微生物类型的微生物类型是是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，可如不想浪费此培养基，可再加入再加入 .自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 现在学习的是第65页，共65页