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1、关于课题微生物的实验室培养第一张，PPT共五十六页，创作于2022年6月放线菌放线菌第二张，PPT共五十六页，创作于2022年6月真菌真菌青霉菌青霉菌第三张，PPT共五十六页，创作于2022年6月黑曲霉黑曲霉酵母菌酵母菌第四张，PPT共五十六页，创作于2022年6月 微生物微生物是一般肉眼看不见或看不清的微小生物，个体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。微生物包括细菌、病毒、真菌、和少数藻类等。（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。）第五张，PPT共五十六页，创作于2022年6月想一想想一想 这些肉眼看不到的微生物是怎样获得呢？这些
2、肉眼看不到的微生物是怎样获得呢？第六张，PPT共五十六页，创作于2022年6月课题课题1微生物的实验室培养微生物的实验室培养专题专题2 微生物的培养与应用微生物的培养与应用第七张，PPT共五十六页，创作于2022年6月你知道固体培养基的来历吗？为了能直接观察培养物的形态及生长情况，科学家为了能直接观察培养物的形态及生长情况，科学家希望能将微生物培养在固体表面上，就像微生物生长在希望能将微生物培养在固体表面上，就像微生物生长在橘子皮或土豆上一样。最初，德国医生罗伯特橘子皮或土豆上一样。最初，德国医生罗伯特科赫此科赫此试着用明胶作培养基的凝固剂。试着用明胶作培养基的凝固剂。但是，人们很快发现，但是
3、，人们很快发现，明胶在明胶在20 以上就变软了，很难进行分离微生物的划以上就变软了，很难进行分离微生物的划线操作。而大多数细菌的培养温度都不低于线操作。而大多数细菌的培养温度都不低于25。科。科赫的同事赫的同事Walter Hesse发现琼脂比明胶更适合做培养基发现琼脂比明胶更适合做培养基的凝固剂。这个改进的方法很快就被大家采纳。的凝固剂。这个改进的方法很快就被大家采纳。第八张，PPT共五十六页，创作于2022年6月标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多微生物的分离、计数等半固体培养基加入琼脂较少观察微生物运动、鉴定菌种、保藏菌种等液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化
4、学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生产目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物选择培养基添加（或缺少）某种化学物质 培养、分离出特定的微生物第九张，PPT共五十六页，创作于2022年6月思考：1 1、固体和液体培养基的区别？固体培养基和、固体和液体培养基的区别？固体培养基和液体培养基你认为哪个更适合工业生产？为什液体培养基你认为哪个更适合工业生产？为什么？么？液体培养基；微生物与培养基中营养物液体培养基；微生物与培养基中营养物质接触充分，快速生长繁殖和产生大量质接触充分，快速生长繁殖和产生大量
5、代谢产物代谢产物第十张，PPT共五十六页，创作于2022年6月选择培养基加入加入青霉素青霉素的培养基的培养基:分离分离酵母菌、霉菌等真菌酵母菌、霉菌等真菌加入加入高浓度食盐高浓度食盐的培养基的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源不加氮源的无氮培养基的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳不加含碳有机物的无碳培养基有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞可抑制细菌、放线菌细胞壁主要成分肽聚糖的合成其细胞壁是由纤维素、几丁质、葡聚糖组成第十
6、一张，PPT共五十六页，创作于2022年6月牛肉膏（Beef Extract）又称牛肉浸膏，是采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。现在，市场上出现了一些熟食店、面馆为牟利而用牛肉膏将猪肉“变”牛肉的现象 第十二张，PPT共五十六页，创作于2022年6月蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨，而大豆蛋白胨等则是植物性物性蛋白胨，而大豆蛋白胨等则是植物性蛋白胨。蛋白胨。动物性来源的蛋白胨还有：蚕蛹蛋白
7、胨、动物性来源的蛋白胨还有：蚕蛹蛋白胨、血液蛋白胨等。血液蛋白胨等。蛋白质分解产物，如将牛肉、酪蛋白、牛奶蛋白质分解产物，如将牛肉、酪蛋白、牛奶粉、白明胶、大豆蛋白、丝蛋血粉、白明胶、大豆蛋白、丝蛋血纤维蛋白等为原料，经不完全的水解工艺所纤维蛋白等为原料，经不完全的水解工艺所得的产物。市售产品以淡黄至棕黄色粉剂为得的产物。市售产品以淡黄至棕黄色粉剂为主。其分子量介于月示和肽之间，约主。其分子量介于月示和肽之间，约2000左左右。不同来源的蛋白质和不同的水解条件，右。不同来源的蛋白质和不同的水解条件，其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物
8、。可溶于水，过热不一个复杂的多肽混合物。可溶于水，过热不凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。也有用作啤酒等产品的稳定剂。鲜骨蛋白胨鲜骨蛋白胨 采用新鲜骨为原料，经发酵喷雾干燥而成。采用新鲜骨为原料，经发酵喷雾干燥而成。广泛用于黄原胶、食品添加剂、医广泛用于黄原胶、食品添加剂、医药中间体、生物制品等发酵产品中药中间体、生物制品等发酵产品中第十三张，PPT共五十六页，创作于20
9、22年6月菌落菌落:单个或少数细单个或少数细菌在固体培养菌在固体培养基上大量繁殖基上大量繁殖时，就会形成时，就会形成一个肉眼可见一个肉眼可见的，具有一定的，具有一定形态结构的子形态结构的子细胞群体，叫细胞群体，叫菌落菌落。菌落是鉴定菌菌落是鉴定菌种的重要依据。种的重要依据。第十四张，PPT共五十六页，创作于2022年6月观察菌落特征。如：粗糙与光滑程度观察菌落特征。如：粗糙与光滑程度2 2、记得不用显微镜如何区分、记得不用显微镜如何区分S S型细菌和型细菌和R R型细菌吗型细菌吗？第十五张，PPT共五十六页，创作于2022年6月二、无菌技术二、无菌技术1、什么是无菌技术、什么是无菌技术 无菌技
10、术泛指在培养微生物的操作中，所有无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染防止杂菌污染的方法。的方法。第十六张，PPT共五十六页，创作于2022年6月思思维维激激活活 用用酒酒精精擦擦拭拭实实验验者者手手臂臂属属消消毒毒还还是是灭灭菌菌？70%与与95%的的酒酒精精，哪哪一种效果更好？为什么？一种效果更好？为什么？提提示示酒酒精精擦擦拭拭属属化化学学消消毒毒，酒酒精精消消毒毒时时，70%的的酒酒精精杀杀菌菌效效果果最最好好。原原因因是是：浓浓度度过过高高，使使菌菌体体表表面面蛋蛋白白质质凝凝固固成成一一层层保保护护膜膜，乙乙醇醇分分子子不不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。能渗入其中；
11、浓度过低，杀菌力减弱。消消毒和灭菌的区别毒和灭菌的区别条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌第十七张，PPT共五十六页，创作于2022年6月有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力抗力。例如，有
12、的细菌的芽孢，煮沸。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌孢又可以萌发，形成一个细菌细菌、原生动物、真菌和植物细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作等产生的一种有繁殖或休眠作用的用的生殖细胞生殖细胞。能直接发育成。能直接发育成新个体。新个体。第十八张，PPT共五十六页，创作于2022年6月第十九张，PPT共五十六页，创作于2022年6月比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭
13、消毒灭菌较为温和较为温和强烈强烈部分生活状态部分生活状态的微生物的微生物不能不能全部微生物全部微生物能能第二十张，PPT共五十六页，创作于2022年6月1 1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100 100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒氯气消毒水源水源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用
14、的消毒与灭菌的方法第二十一张，PPT共五十六页，创作于2022年6月1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min.15-30min.(2)(2)灭菌的方法：灭菌的方法：第二十二张，PPT共五十六页，创作于2022年6月三、实验安排三、实验安排 本实验采用本实验采用本实验采用本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆
15、菌的纯化培养的纯化培养的纯化培养的纯化培养，实验过程分为两个阶段：，实验过程分为两个阶段：，实验过程分为两个阶段：，实验过程分为两个阶段：1、制备培养基、制备培养基2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌第二十三张，PPT共五十六页，创作于2022年6月1、制备培养基、制备培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL（1）计算）计算 根据下列培养基配方比例，计算配置根据下列培养基配方比例，计算配置根据下列培养基配方比例，计算配置根据下列培养基配方比例
16、，计算配置100mL100mL培培培培养基时，各成分的用量。养基时，各成分的用量。养基时，各成分的用量。养基时，各成分的用量。第二十四张，PPT共五十六页，创作于2022年6月（2）称量）称量注意注意注意注意 牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称取时动牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖。作要迅速，称后要及时盖上瓶盖。蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏用玻璃棒挑取牛肉膏用玻璃棒挑取牛肉膏第二十五张，PPT共五十六页，创作于2022年6月（3）溶化）溶化加水加热熔化牛肉膏；加水加热熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化钠继续加入蛋白胨和氯化钠继续加热；加热；加入琼脂；加入琼脂；用蒸馏水定容到用蒸馏
17、水定容到100mL。整个。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。杯破裂。第二十六张，PPT共五十六页，创作于2022年6月（5）灭菌）灭菌 在压力为在压力为100kPa，温度为，温度为121条件下，条件下，灭菌灭菌15-30min。（6）倒平板）倒平板（4）调节）调节PH第二十七张，PPT共五十六页，创作于2022年6月倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术第二十八张，PPT共五十六页，创作于2022年6月 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就感觉锥形瓶
18、的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。可以进行倒平板了。讨论讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？培养基的温度？第二十九张，PPT共五十六页，创作于2022年6月2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，
19、凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既防防止皿盖上的水珠落入培养基止皿盖上的水珠落入培养基,又又可以避免培养基中的水分过可以避免培养基中的水分过快地挥发。快地挥发。第三十张，PPT共五十六页，创作于2022年6月 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个之间的培养基上滋生，因此
20、最好不要用这个平板培养微生物。平板培养微生物。第三十一张，PPT共五十六页，创作于2022年6月（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面.在数次划线后在数次划线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体可见的子细胞群体,这就是菌落这就是菌落.第三十二张，PPT共五十六页，创作于2022年6月平
21、板划线操作平板划线操作1.将接种环放在火焰上将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红灼烧，直到接种环烧红2.在火焰旁冷却接种环、在火焰旁冷却接种环、并打开棉塞并打开棉塞第三十三张，PPT共五十六页，创作于2022年6月3.将试管口通过火焰。将试管口通过火焰。5.将试管口通过火焰，并塞上将试管口通过火焰，并塞上棉花。棉花。4.将已冷却的接种环伸入菌液中，将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。沾取一环菌液。不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。第三十四张，PPT共五十六页，创作于2022年6月一旦划破，会造成划线不均匀，难以一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；达到分离单菌落的
22、目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。长，会形成一个条状的菌落。6.左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。划破培养基。第三十五张，PPT共五十六页，创作于2022年6月8.将平板倒将平板倒置，放入培置，放入培养箱中培养。养箱中培养。7.灼烧接种环，待灼烧接种环，待其冷却后，从第一其冷却后，从第一区域划线的末
23、端开区域划线的末端开始往第二区域内划始往第二区域内划线。重复以上操作。线。重复以上操作。在三、四、五区域在三、四、五区域内划线。注意不要内划线。注意不要将最后一区域的划将最后一区域的划线与第一区域相连。线与第一区域相连。第三十六张，PPT共五十六页，创作于2022年6月1.接种环接种环只蘸一次菌液只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置但要在培养基不同位置连续划线多次连续划线多次.2.划线划线首尾不能相接首尾不能相接3.划线后划线后,培养皿培养皿倒置培养倒置培养划线分离法注意事项划线分离法注意事项:其他画线分离图：其他画线分离图：第三十七张，PPT共五十六页，创作于2022年6月不同的平板划线法不同
24、的平板划线法第三十八张，PPT共五十六页，创作于2022年6月培培养养基基表表面面的的单单菌菌落落第三十九张，PPT共五十六页，创作于2022年6月1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的种环是为了杀死上次划线结
25、束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。讨论：讨论：第四十张，PPT共五十六页，创作于2022年6月2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再
26、进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第四十一张，PPT共五十六页，创作于2022年6月6 6支试管
27、，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液菌液微量微量 移液器移液器第四十二张，PPT共五十六页，创作于2022年6月稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：b.b.涂布平板：涂布平板：不超过不超过0.1ml0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1 1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照滴滴灼灼冷冷涂涂稀稀释释10103 3倍倍稀稀释释10104 4倍倍稀稀释释10105 5倍倍第四十三张，PPT共五十
28、六页，创作于2022年6月第四十四张，PPT共五十六页，创作于2022年6月稀释涂布法稀释涂布法第四十五张，PPT共五十六页，创作于2022年6月 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第第2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？答：应从操作的各个细节保证答：应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。管要在酒精灯火
29、焰周围等。讨论讨论第四十六张，PPT共五十六页，创作于2022年6月结果分析与评价结果分析与评价 培养培养12h12h与与24h24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同（一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温12d后无菌落生长，说后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状大小基本一致，并符合大如果培养基上生长的菌落的颜色、形状大小基本一
30、致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录第四十七张，PPT共五十六页，创作于2022年6月微微生生物物的的培培养养基础基础知识知识实验操作实验操作结果分析与评价结果分析与评价培养基培养基定义：定义：分类：分类：人们按照微生物对营养物质的不同人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置
31、出供其生长繁殖的营养需求，配置出供其生长繁殖的营养物质物质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基无菌技术无菌技术培养微生物的操作中，所有防止培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法杂菌污染的方法定义：定义：消毒与灭菌消毒与灭菌常用灭菌方法常用灭菌方法制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌(平板划线法和稀释涂平板划线法和稀释涂布平板法）布平板法）课堂小结课堂小结第四十八张，PPT共五十六页，创作于2022年6月 1.干燥、真空包装、冷藏冷冻等。这些方法抑干燥、真空包装、冷藏冷冻等。这些方法抑制微生物生长需要的水、空气、适宜的温度等来阻制微生物生长需要的水
32、、空气、适宜的温度等来阻止其生长。止其生长。2.这三种培养技术都需要为培养物提供充足的营这三种培养技术都需要为培养物提供充足的营养，但无土栽培技术的操作并不需要保证无菌的条件，养，但无土栽培技术的操作并不需要保证无菌的条件，而其他两种技术都要求严格的无菌条件。而其他两种技术都要求严格的无菌条件。习题答案习题答案第四十九张，PPT共五十六页，创作于2022年6月 3.正是由于证明了微生物不正是由于证明了微生物不是自发产生的，微生物学才可能是自发产生的，微生物学才可能发展成为一门自立的学科；巴斯发展成为一门自立的学科；巴斯德实验中用到的加热灭菌的方法德实验中用到的加热灭菌的方法到这了有效的灭菌方法
33、的出现，到这了有效的灭菌方法的出现，而这一灭菌原理也适用于食品的而这一灭菌原理也适用于食品的保存。保存。第五十张，PPT共五十六页，创作于2022年6月【例例1】培培养养基基、培培养养皿皿、接接种种环环、实实验验操操作作者者的的双双手手、空空气气、牛牛奶奶所所采采用用的的灭灭菌菌、消消毒毒方方法依次是法依次是()。化化学学消消毒毒灼灼烧烧灭灭菌菌干干热热灭灭菌菌紫外线灭菌紫外线灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法巴氏消毒法A BC D深深度度剖剖析析培培养养基基用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌；培培养养皿皿能能耐耐高高温温，需需用用干干热热灭灭菌菌；接接种种环环可可用用灼灼烧烧灭灭菌菌达达到到迅
34、迅速速彻彻底底的的灭灭菌菌效效果果；实实验验操操作作者者的的双双手手可可用用化化学学药药剂剂进进行行消消毒毒，如如用用酒酒精精擦擦拭拭双双手手；空空气气可可用用紫紫外外线线消消毒毒；牛牛奶奶为为不不破破坏坏其其营营养养成成分分可可采采用用巴巴氏氏消消毒毒法。法。答案答案A第五十一张，PPT共五十六页，创作于2022年6月例例3 除除平平板板划划线线法法与与稀稀释释涂涂布布平平板板法法外外，还还有有哪哪些些接接种种方方法法？微微生生物物接接种种技技术术中中最最核核心心的的内内容容是什么？是什么？n提提示示微微生生物物接接种种方方法法还还有有斜斜面面接接种种及及穿穿刺刺接接种种等等方方法法，所所有
35、有微微生生物物接接种种方方法法中中最最核核心心的的内内容容是是“防防止止杂杂菌污染，保证培养物的纯度菌污染，保证培养物的纯度”。第五十二张，PPT共五十六页，创作于2022年6月【例例4】下下列列有有关关平平板板划划线线操操作作的的叙叙述述不不正正确确的是的是()。A第第一一步步灼灼烧烧接接种种环环是是为为了了避避免免接接种种环环上上可能存在的微生物污染培养物可能存在的微生物污染培养物B每每次次划划线线前前，灼灼烧烧接接种种环环是是为为了了杀杀死死上上次划线结束后，接种环上残留的菌种次划线结束后，接种环上残留的菌种C在在第第二二区区域域内内划划线线时时，接接种种环环上上的的菌菌种种直接来源于菌
36、液直接来源于菌液D划划线线结结束束后后，灼灼烧烧接接种种环环，能能及及时时杀杀死死接接种种环环上上残残留留的的菌菌种种，避避免免细细菌菌污污染染环环境境和和感感染操作者染操作者第五十三张，PPT共五十六页，创作于2022年6月解解析析平平板板划划线线操操作作中中，接接种种环环取取菌菌种种前前灼灼烧烧的的目目的的是是避避免免接接种种环环上上可可能能存存在在的的微微生生物物污污染染培培养养物物，以以后后每每次次划划线线前前灼灼烧烧接接种种环环是是为为了了杀杀死死上上次次划划线线后后残残留留的的菌菌种种。划划线线结结束束仍仍需需灼灼烧烧接接种种环环，是是为为了了能能及及时时杀杀死死接接种种环环上上残
37、残留留的的菌菌种种，避避免免细细菌菌污污染染环环境境和和感感染染操操作作者者。从从第第二二次次划划线线开开始始，每每次次划划线线时时接接种种环环上上的的菌菌种种直直接接来来源源于于上上次次划划线线的末端。的末端。答案答案C第五十四张，PPT共五十六页，创作于2022年6月【例例5】如如图图是是微微生生物物平平板板划划线线示示意意图图，划划线线的的顺顺序序为为12345。下列操作方法正确的是下列操作方法正确的是()。A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B划线操作须在火焰上进行划线操作须在火焰上进行C在在5区域中才可以得到所需菌落区域中才可以得到所需菌落D在在12
38、345区域中划线前后都要对接种环灭菌区域中划线前后都要对接种环灭菌深深度度剖剖析析本本题题考考查查平平板板划划线线的的操操作作方方法法。在在每每次次划划线线前前后后都都要要对对接接种种环环进进行行灭灭菌菌，接接种种环环的的灭灭菌菌方方法法应应是是在在火火焰焰上上灼灼烧烧，接接种种时时划划线线操操作作是是在在火火焰焰边边进进行行。在在5个个区区域域中中，只只要要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。答案答案D第五十五张，PPT共五十六页，创作于2022年6月（11年新课标卷）年新课标卷）39.【生物 选修1：生物技术实践】（15分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和 。无菌技术要求试验操作应在酒精灯 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。第五十六张，PPT共五十六页，创作于2022年6月