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1、主要内容第一节第一节第一节第一节 色谱分离与保留作用色谱分离与保留作用色谱分离与保留作用色谱分离与保留作用 第二节第二节第二节第二节 有关色谱保留的基本术语及参数有关色谱保留的基本术语及参数有关色谱保留的基本术语及参数有关色谱保留的基本术语及参数 第三节第三节第三节第三节 塔板理论塔板理论塔板理论塔板理论第四节第四节第四节第四节 速率理论速率理论速率理论速率理论 第五节第五节第五节第五节 色谱峰展宽的柱外因素色谱峰展宽的柱外因素色谱峰展宽的柱外因素色谱峰展宽的柱外因素 第1页/共24页主要内容第六节第六节第六节第六节 分离度及影响因素分离度及影响因素分离度及影响因素分离度及影响因素 第七节第七
2、节第七节第七节 系统适应性试验系统适应性试验系统适应性试验系统适应性试验 第八节第八节第八节第八节 测定法测定法测定法测定法 第九节第九节第九节第九节 色谱吸附或分配等温线色谱吸附或分配等温线色谱吸附或分配等温线色谱吸附或分配等温线 第2页/共24页第六节分离度及影响因素第3页/共24页分离度的定义分离度的定义 1影响分离度的因素影响分离度的因素 2改善分离的一般原则改善分离的一般原则 3第4页/共24页一、分离度的定义分离度分离度分离度分离度分离度（分离度（resolution，缩写为，缩写为R）又称作分辨率，用以衡量相邻峰又称作分辨率，用以衡量相邻峰的分离情况，是把柱效率和溶剂的分离情况，
3、是把柱效率和溶剂效率综合到一起的参数。效率综合到一起的参数。第5页/共24页一、分离度的定义分离度由下式计算：第6页/共24页R=1：分离程度：分离程度98%（又称（又称4分离）分离）R=1.25：达：达99.2%的分离的分离 R=1.5：达：达99.7%（又称（又称6分离）分离）对于两个等面积峰对于两个等面积峰第7页/共24页中华人民共和国药典要求“除另有规定，分离度应大于1.5”。在实际工作中，有时R=1.25 时也被认可，因为GC与HPLC的误差为1。第8页/共24页二、影响分离度的因素 分离度不仅取决于两组分的保留时间，也取决于其对应色谱峰的宽度。相同的分离度在高效或低效色谱系统中均可
4、达到，因为影响分离度R大小的因素可以用下式表示：第9页/共24页n 为色谱柱的理论塔板数；为相对保留值比（即分配系数比或容量因子比），即=k2/k1，k1、k2 分别为两待分离组分的容量因子；1，即 k2 k1；k 为相邻两组分中保留时间长的组分的容量因子，即 k2。称为称为分离度方程分离度方程。第10页/共24页柱效项主要与理论塔板数相关，柱选择项与柱容柱效项主要与理论塔板数相关，柱选择项与柱容量项相互关联。量项相互关联。在在气相色谱气相色谱中，柱选择项和柱中，柱选择项和柱容量项虽然都与色谱柱的性质容量项虽然都与色谱柱的性质相关，但柱选择项主要受色谱相关，但柱选择项主要受色谱柱性质影响，柱容
5、量项主要受柱性质影响，柱容量项主要受柱温左右。柱温左右。在在液相色谱液相色谱中柱选择项和柱容中柱选择项和柱容量项也都与色谱柱及流动相的量项也都与色谱柱及流动相的性质相关，但柱选择项主要取性质相关，但柱选择项主要取决于流动相的种类。决于流动相的种类。柱效项柱效项 柱选择项柱选择项 柱容量项柱容量项 第11页/共24页k 变小，谱带流出较早，分离度变差；k变大，分离度增加。但是当 k=56 时，对分离度的贡献已基本上达到最大，再增加对分离度已无多大贡献。第12页/共24页在填充柱气相色谱中，柱效低，因而为了达到预期的分离度，选择性是最重要的因素，因此，在填充柱气相色谱中，需提供许多种性质不同的固定
6、相供选择。在高效毛细管气相色谱中，只需使用几种固定相就可分离复杂的混合物。第13页/共24页1.增加增加t R，即相邻组分保留时间的差值，即相邻组分保留时间的差值 三、改善分离的一般原则 2.减小谱带宽度（峰宽）减小谱带宽度（峰宽）W 第14页/共24页三、改善分离的一般原则1 1、增加、增加 （1）增加柱长）增加柱长（2）增加固定相的量）增加固定相的量（3）选择分离因子较大的色谱条件）选择分离因子较大的色谱条件降低柱温降低柱温选择不同的固定相（填充柱选择不同的固定相（填充柱GC中常用）中常用）选择不同的流动相（选择不同的流动相（HPLC中常用）中常用）第15页/共24页（1）增加色谱柱长 对
7、于长度不同的同一种色谱柱：式中，式中，L1、L2分别为两根色谱柱的长度。可见，分别为两根色谱柱的长度。可见，增加色谱柱的长度，理论塔板数将会增加，从增加色谱柱的长度，理论塔板数将会增加，从而可提高分离度。而可提高分离度。第16页/共24页（2）增加固定相的量 增加固定相的量，则 k 增加，柱容量项增加，分离度增加。第17页/共24页（3）选择分离因子较大的色谱条件 降低柱温（气相色谱中常用在GC中）：在GC中，对分离因子而言:式中，Tc 为柱温，Tb1 和 Tb2 分别为组分1、2的沸点，c 为常数，R 为热力学常数。可见，柱温降低，分离因子增加，柱选择项增加，分离度增加。第18页/共24页（
8、3）选择分离因子较大的色谱条件 选择不同的固定相：填充柱气相色谱中常用。选择不同的流动相：高效液相色谱中常用。第19页/共24页第20页/共24页三、改善分离的一般原则2、减小谱带宽度（峰宽）W 提高柱效，减小塔板高度：使用颗粒更细的填料，更小心、均匀的填充色谱柱。减小色谱系统的死体积：如在填充经典的制备柱时，经常采用湿法装柱。柱子装好后一般要在流动相流动的情况下给出足够的时间让固定相沉降，等固定相不再沉降后才能上样品。减小进样量：防止色谱柱超载。第21页/共24页主要内容第一节第一节第一节第一节 色谱分离与保留作用色谱分离与保留作用色谱分离与保留作用色谱分离与保留作用 第二节第二节第二节第二
9、节 有关色谱保留的基本术语及参数有关色谱保留的基本术语及参数有关色谱保留的基本术语及参数有关色谱保留的基本术语及参数 第三节第三节第三节第三节 塔板理论塔板理论塔板理论塔板理论第四节第四节第四节第四节 速率理论速率理论速率理论速率理论 第五节第五节第五节第五节 色谱峰展宽的柱外因素色谱峰展宽的柱外因素色谱峰展宽的柱外因素色谱峰展宽的柱外因素 第22页/共24页主要内容第六节第六节第六节第六节 分离度及影响因素分离度及影响因素分离度及影响因素分离度及影响因素 第七节第七节第七节第七节 系统适应性试验系统适应性试验系统适应性试验系统适应性试验 第八节第八节第八节第八节 测定法测定法测定法测定法 第九节第九节第九节第九节 色谱吸附或分配等温线色谱吸附或分配等温线色谱吸附或分配等温线色谱吸附或分配等温线 第23页/共24页感谢您的观看！第24页/共24页