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1、微生物的培养和应用微生物的培养和应用第1页，共68页，编辑于2022年，星期六一、微生物培养基的配制一、微生物培养基的配制 1 1、培养基定义：培养基（培养液）是为培养基（培养液）是为人工培养微生人工培养微生物而制备物而制备的，提供适合微生物生长、繁的，提供适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。殖或积累代谢产物的营养基质。思考：微生物细胞的元素组成是什么？思考：微生物细胞的元素组成是什么？第2页，共68页，编辑于2022年，星期六22类型类型（1 1）按物理状态分：固体培养基固体培养基、液体培液体培养基、半固体培养基养基、半固体培养基。区别：区别：加入琼脂的量决定培养基的形态。加入琼脂
2、的量决定培养基的形态。熔点：熔点：9696度度凝固点：凝固点：4040度度注意：一般细菌不能利用琼脂。注意：一般细菌不能利用琼脂。应用微生物分离、鉴定、计数和应用微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面菌种保存等方面 第3页，共68页，编辑于2022年，星期六 微生物在微生物在固体固体培养基表面生长培养基表面生长,可以形成肉可以形成肉眼可见的菌落眼可见的菌落用途：纯化、计数、鉴定用途：纯化、计数、鉴定第4页，共68页，编辑于2022年，星期六液体培养基：工业生产液体培养基：工业生产表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长第5页，共68页，编辑于2022年，星期六半固体培养基：观察
3、运动半固体培养基：观察运动无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)第6页，共68页，编辑于2022年，星期六例、下列叙述不正确的是例、下列叙述不正确的是 A A 培养基是为微生物的生长繁殖提供营培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质养的基质 B B 液体培养基和固体培养基所含的最基液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同本物质不相同 C C 微生物在固体培养基上生长时，可微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌以形成肉眼可见的单个细菌B.C.第7页，共68页，编辑于2022年，星期六（2）按成分分：天然培养基、合成天然培养基、合成 培养基和半合成培养基。培养基和半合成培养基。
4、依据：成分是否明确：成分是否明确判断下列培养基按成分属于何种培养基？判断下列培养基按成分属于何种培养基？牛肉膏、蛋白胨培养基牛肉膏、蛋白胨培养基 葡萄糖铵盐培养基葡萄糖铵盐培养基 马铃薯蔗糖培养基马铃薯蔗糖培养基第8页，共68页，编辑于2022年，星期六（3）按功能分：基础培养基、选择培养基和基础培养基、选择培养基和鉴别培养基。鉴别培养基。基础培养基：含有微生物生长所需的基本物质。基础培养基：含有微生物生长所需的基本物质。选择培养基：培养基选择培养基：培养基加入加入某种物质或某种物质或缺少缺少某种营养物质某种营养物质而而抑制不需要的微生物生长抑制不需要的微生物生长，促进需要微生物生长。，促进需
5、要微生物生长。举例说明：举例说明：加链霉素培养基作用加链霉素培养基作用 加青霉素培养基作用加青霉素培养基作用 无氮培养基作用无氮培养基作用鉴别培养基：区别微生物鉴别培养基：区别微生物 伊红伊红美蓝美蓝 产气杆菌菌落大、灰棕色产气杆菌菌落大、灰棕色 大肠杆菌菌落小、绿色金属光泽大肠杆菌菌落小、绿色金属光泽抗生素，抑制细菌第9页，共68页，编辑于2022年，星期六按功能状态分按功能状态分选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基基础培养基基础培养基种类种类用途用途例例选择培选择培养基养基鉴别培鉴别培养基养基从众多微生物从众多微生物中分离中分离所需所需的的微生物微生物鉴别不同种类鉴别不同种类的微生物的
6、微生物加入青霉素分离得加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌到酵母菌和霉菌伊红伊红美篮培养基使美篮培养基使大肠杆菌的菌落呈深大肠杆菌的菌落呈深紫色，可以鉴别大肠紫色，可以鉴别大肠杆菌杆菌第10页，共68页，编辑于2022年，星期六几种选择培养基：加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的不加氮源的无氮无氮培养基培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物第11页，共68页，编辑于2022年，星期六微生物
7、生长需要条件微生物生长需要条件 1 1、夏天为什么食物容易腐败？、夏天为什么食物容易腐败？如何处理可以防止腐败？如何处理可以防止腐败？2 2、为什么真空包装的食品不容易腐败？、为什么真空包装的食品不容易腐败？3 3、醋酸是否具有杀菌作用？、醋酸是否具有杀菌作用？以上反应了微生物生长受到哪些条件影响？以上反应了微生物生长受到哪些条件影响？细菌细菌303037 37 霉菌霉菌252528 28 放线菌放线菌25252828 1 12d 34d 57d2d 34d 57d大肠杆菌大肠杆菌 乳酸菌乳酸菌 破伤风杆菌破伤风杆菌 大多数细菌为好氧型大多数细菌为好氧型霉菌霉菌 5.05.06.0 6.0 细
8、菌细菌6.56.57.5 7.5 放线菌放线菌 7.57.58.58.5第12页，共68页，编辑于2022年，星期六微生物的类群原生生物：原生生物：原核生物原核生物:真菌真菌:病毒病毒:如酵母菌、霉菌如酵母菌、霉菌单细胞的动植物单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物无细胞结构无细胞结构真核细胞真核细胞细菌、蓝藻等细菌、蓝藻等原核细胞原核细胞第13页，共68页，编辑于2022年，星期六3.3.培养基营养成分：培养基营养成分：不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳碳源源、和
9、、和氮源、氮源、无机盐无机盐等营养物质。等营养物质。讨论：讨论：为什么大多数培养基为什么大多数培养基 都含有这四类物质？都含有这四类物质？（1 1）基本成分：）基本成分：第14页，共68页，编辑于2022年，星期六碳源碳源无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：COCO2 2、COCO3 32 2-、HCOHCO3 3-牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源氮源无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：NHNH4 4、NONO3 3-牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等酵母膏、尿素等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物第15页，共68页，编辑于
10、2022年，星期六1000mL1000mL牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方培养基组分培养基组分提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏 5.0g碳源、氮源、磷酸盐和维生素碳源、氮源、磷酸盐和维生素蛋白胨蛋白胨 10.0g 氮源和维生素氮源和维生素NaCl 5.0g 无机盐无机盐H2 2O 定容至定容至1000ml 氢元素、氧元素氢元素、氧元素（2 2）特殊营养：）特殊营养：细菌生长必需，而往往自身不能合成的化合细菌生长必需，而往往自身不能合成的化合物，如维生素、某些氨基酸、碱基等物，如维生素、某些氨基酸、碱基等（3 3）p
11、HpH、氧气等要求、氧气等要求第16页，共68页，编辑于2022年，星期六 碳源碳源可作为碳源的物质有可作为碳源的物质有:a.a.含碳无机物含碳无机物:b.b.含碳有机物：含碳有机物：蛋白质蛋白质脂肪酸脂肪酸不同微生物所利用的碳源不同不同微生物所利用的碳源不同a.异养型微生物的碳源为异养型微生物的碳源为b.自养型微生物的碳源为自养型微生物的碳源为碳酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、二氧化碳碳酸氢盐、二氧化碳糖类（主要）糖类（主要）含碳有机物（有机碳）含碳有机物（有机碳）含碳无机物（无机碳）含碳无机物（无机碳）第17页，共68页，编辑于2022年，星期六氮源可作为氮源的物质有可作为氮源的物质有:a.a.含
12、氮无机物：含氮无机物：b.b.含氮有机物：含氮有机物：蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏尿素尿素氮气氮气氨气氨气硝酸盐硝酸盐铵盐铵盐第18页，共68页，编辑于2022年，星期六二、无菌操作二、无菌操作1 1、获得纯净培养物的关键：、获得纯净培养物的关键：2 2、无菌操作、无菌操作 防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵第19页，共68页，编辑于2022年，星期六1 1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是 A A 光合细菌光合细菌 B B 根瘤菌根瘤菌 C C 硝化细菌硝化细菌 D D 乳酸菌乳酸菌2 2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源、培养大肠杆菌的培养
13、基中，必需含有的碳源和氮源是和氮源是 A A 糖、有机酸等糖、有机酸等 B B 二氧化碳、碳酸盐二氧化碳、碳酸盐 C C 蛋白质蛋白质 D D 无机氮化物无机氮化物A.CA.C第20页，共68页，编辑于2022年，星期六二二.无菌技术（思考）无菌技术（思考）1.什么是无菌技术？包括哪些方面？什么是无菌技术？包括哪些方面？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？染外，还有什么目的？3.消毒和灭菌有何不同？消毒和灭菌有何不同？4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？常用的消毒和灭菌方法有哪些？5 5哪些地方有菌可能导致
14、菌体感染？哪些地方有菌可能导致菌体感染？操作者操作者 培养基、接种工具、器皿培养基、接种工具、器皿 空间空间无菌技术：无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有泛指培养微生物操作中，所有防防 止杂止杂菌污染菌污染的方法。的方法。无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。第21页，共68页，编辑于2022年，星期六1 1、灭菌和消毒、灭菌和消毒 1.）灭菌灭菌：强烈的因素杀死所有微生物，包括芽孢和：强烈的因素杀死所有微生物，包括芽孢和孢子。孢子。思考：哪些因素可以灭菌、消毒？思考：哪些因素可以灭菌、消毒？物理物理高温、紫外线高温、紫外线 化学化学酒精、氯气、
15、石碳酸酒精、氯气、石碳酸 2.2.）消毒消毒：温和的因素杀死一部分对人体有害的：温和的因素杀死一部分对人体有害的微生物。微生物。举例：煮沸举例：煮沸 问题：一段时间后为什么会腐败？问题：一段时间后为什么会腐败？不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子 第22页，共68页，编辑于2022年，星期六3）.常用的常用的消毒消毒方法：方法：煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法4）常用的常用的灭菌灭菌方法：方法：灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌：100kPa 121 15-30min牛奶牛奶 接种室、接种箱或超净工作台接种室、接种
16、箱或超净工作台 接种工具，接种环、接种针或其他金属用具接种工具，接种环、接种针或其他金属用具 玻璃器皿（吸管、培养皿）玻璃器皿（吸管、培养皿）第23页，共68页，编辑于2022年，星期六思考：以下应当用何种方法灭菌、消毒？思考：以下应当用何种方法灭菌、消毒？操作者操作者 培养基培养基 接种工具接种工具 器皿器皿 空间空间 牛奶牛奶手用酒精消毒手用酒精消毒高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌灼烧灼烧干热灭菌干热灭菌紫外线紫外线巴氏消毒巴氏消毒70707575度度30min 8030min 80度度15min15min第24页，共68页，编辑于2022年，星期六a.a.灼烧灭菌 微生物的接种工具微生物的接种工
17、具 (接种环、接种针接种环、接种针)或或其他金属用具直接在其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼火焰的充分燃烧层灼烧烧第25页，共68页，编辑于2022年，星期六b.干热灭菌 160160170 170；1 12h2h能耐高温的需要保持能耐高温的需要保持干燥的物品干燥的物品(玻璃器玻璃器皿皿)c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121 100kPa 121 15-30min15-30min通常用于培养基的灭菌通常用于培养基的灭菌第26页，共68页，编辑于2022年，星期六总结：无菌技术 1 1、实验操作空间、操作者、衣着和手要、实验操作空间、操作者、衣着和手要 和和 。2 2、将用于微生物培养的器皿
18、、接种工具和培养基等进行、将用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等进行 。3 3、为了避免周围环境中微生物污染，实验操作应在、为了避免周围环境中微生物污染，实验操作应在 附近进行。附近进行。4 4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。围物品相接触。清洁清洁灭菌灭菌酒精灯酒精灯消毒消毒第27页，共68页，编辑于2022年，星期六例：下列关于腐乳制作的描述中，错误的例：下列关于腐乳制作的描述中，错误的是是A A在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的微生物参与的微生物参与B B含水量大于含水量大于85%
19、85%的豆腐利于保持湿度，适的豆腐利于保持湿度，适宜制作腐乳宜制作腐乳C C加盐和加酒都能抑制微生物的生长加盐和加酒都能抑制微生物的生长D D密封瓶口前最好将瓶口通过火焰以防杂密封瓶口前最好将瓶口通过火焰以防杂菌污染菌污染第28页，共68页，编辑于2022年，星期六六、培养基的配制六、培养基的配制（一）、细菌培养基的配制（一）、细菌培养基的配制1.1.计算计算:100ml:100ml蒸馏水中各物质的量。蒸馏水中各物质的量。2.2.称量：注意牛肉膏的粘稠度大。称量：注意牛肉膏的粘稠度大。3.3.溶化：溶化：牛肉膏连同称量纸一同放入牛肉膏连同称量纸一同放入 不断搅拌不断搅拌4.4.调节调节pH:7
20、.07.2pH:7.07.2 思考：判断该培养基的作用是什么？思考：判断该培养基的作用是什么？第29页，共68页，编辑于2022年，星期六第30页，共68页，编辑于2022年，星期六第31页，共68页，编辑于2022年，星期六5.5.分装：分装：培养基高度培养基高度1/51/5 不要污染试管口不要污染试管口 棉塞塞紧棉塞塞紧第32页，共68页，编辑于2022年，星期六6 6、包扎、包扎第33页，共68页，编辑于2022年，星期六7.7.灭菌：灭菌：思考：灭菌的温度、压力、时间分别是多少？思考：灭菌的温度、压力、时间分别是多少？8.8.搁置斜面搁置斜面/倒平板倒平板 第34页，共68页，编辑于2
21、022年，星期六图中哪些措施是防止杂菌污染的？图中哪些措施是防止杂菌污染的？第35页，共68页，编辑于2022年，星期六培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到5050度左右时，才度左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？的温度？刚刚不烫手。刚刚不烫手。为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？防止瓶口附近的微生物污染培养基防止瓶口附近的微生物污染培养基第36页，共68页，编辑于2022年，星期六平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？使培养基表面的水更好的挥发，防止皿盖上水珠使培养
22、基表面的水更好的挥发，防止皿盖上水珠落入培养基落入培养基在倒平板的过程中，不小心将培养基溅在皿盖与皿在倒平板的过程中，不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？什么？空气中的微生物会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，空气中的微生物会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，最好不要用该培养基培养微生物。最好不要用该培养基培养微生物。第37页，共68页，编辑于2022年，星期六六、接种技术六、接种技术 无菌无菌条件下将微生物条件下将微生物接入培养基接入培养基的操作的操作过程称为接种。过程称为接种。1 1、接种工具、接种工具第3
23、8页，共68页，编辑于2022年，星期六常用的接种方法常用的接种方法斜面划线法斜面划线法第39页，共68页，编辑于2022年，星期六第40页，共68页，编辑于2022年，星期六问题：上述结果反应了什么情况？问题：上述结果反应了什么情况？问题：可对菌液如何处理？问题：可对菌液如何处理？第41页，共68页，编辑于2022年，星期六稀释稀释涂布涂布平板法平板法VSVS稀释稀释混合混合平板法平板法第42页，共68页，编辑于2022年，星期六菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏：、临时保藏：接种到固体斜面培养接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于基，菌落长成后置于44冰箱保存。冰箱保存。2 2、长期保存
24、：甘、长期保存：甘油冷冻管藏法油冷冻管藏法第43页，共68页，编辑于2022年，星期六 从哪里可以获得微生物呢？从哪里可以获得微生物呢？微生物的大本营：土壤微生物的大本营：土壤 从众多微生物中分离某种微生物有什么方法？从众多微生物中分离某种微生物有什么方法？根据微生物所需营养物质、氧气、根据微生物所需营养物质、氧气、pHpH不同利用不同利用选择性培养基选择。选择性培养基选择。对微生物进行分离的培养基是？对微生物进行分离的培养基是？固体培养基固体培养基 固体培养基上不同菌的区别是什么？固体培养基上不同菌的区别是什么？菌落菌落 菌落作用：分类、鉴定的依据菌落作用：分类、鉴定的依据七、微生物的分离、
25、数量测定七、微生物的分离、数量测定第44页，共68页，编辑于2022年，星期六菌落菌落细菌的菌落特征因细菌的菌落特征因种而异种而异菌苔：菌落连成片菌苔：菌落连成片 第45页，共68页，编辑于2022年，星期六 主题：分离土壤中分解尿素的微生物主题：分离土壤中分解尿素的微生物1 1、原理：、原理：分离：以尿素为唯一氮源的选择性培养分离：以尿素为唯一氮源的选择性培养基进行选择。基进行选择。计数：稀释倒平板法计数：稀释倒平板法第46页，共68页，编辑于2022年，星期六第47页，共68页，编辑于2022年，星期六2 2、实验步骤：、实验步骤：第48页，共68页，编辑于2022年，星期六第49页，共6
26、8页，编辑于2022年，星期六第50页，共68页，编辑于2022年，星期六第51页，共68页，编辑于2022年，星期六问题：统计细菌和统计分解尿素所用的细菌的稀释倍数相同吗问题：统计细菌和统计分解尿素所用的细菌的稀释倍数相同吗？细菌：细菌：4 4、5 5、6 6 放线菌：放线菌：3 3、4 4、5 5 真菌真菌 2 2、3 3、4 4问题：统计的菌落数往往比活菌实际数目偏低？问题：统计的菌落数往往比活菌实际数目偏低？每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数=C=C（菌落数）（菌落数）*M M （稀释倍数）（稀释倍数）/V/V（涂布体积）（涂布体积）第52页，共68页，编辑于2022年，星期六本课题
27、知识小结本课题知识小结:第53页，共68页，编辑于2022年，星期六做什么准备？做什么准备？点燃酒精灯点燃酒精灯斜面向上斜面向上第54页，共68页，编辑于2022年，星期六斜面用什么接种？斜面用什么接种？接种环如何灭菌？接种环如何灭菌？第55页，共68页，编辑于2022年，星期六取棉塞（不放到桌面？）取棉塞（不放到桌面？）试管口灭菌试管口灭菌第56页，共68页，编辑于2022年，星期六挑取少量菌体挑取少量菌体第57页，共68页，编辑于2022年，星期六轻轻划轻轻划“S S”，不要划破培养基，不要划破培养基试管口通过火焰，塞紧试管试管口通过火焰，塞紧试管放在放在3737度培养度培养24h24h第
28、58页，共68页，编辑于2022年，星期六平板划线的具体操作：平板划线的具体操作：A.A.从试管中取菌从试管中取菌第59页，共68页，编辑于2022年，星期六第60页，共68页，编辑于2022年，星期六第61页，共68页，编辑于2022年，星期六问题：每次划线后要灼烧接种环，问题：每次划线后要灼烧接种环，目的是什么？目的是什么？灭菌灭菌问题：每次划线的起点有什么问题：每次划线的起点有什么特点？特点？第62页，共68页，编辑于2022年，星期六第63页，共68页，编辑于2022年，星期六微生物的恒温培养微生物的恒温培养第64页，共68页，编辑于2022年，星期六第65页，共68页，编辑于2022年，星期六思考：如何将菌液由思考：如何将菌液由1 1倍稀释成倍稀释成1010-6-6？注意事项：使用的水有何要求？注意事项：使用的水有何要求？用移取菌液的移液管是否要灭菌？用移取菌液的移液管是否要灭菌？（1 1）稀释）稀释第66页，共68页，编辑于2022年，星期六2.2.涂布平板法涂布平板法第67页，共68页，编辑于2022年，星期六第68页，共68页，编辑于2022年，星期六