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1、微生物的培养幻灯片现在学习的是第1页，共30页细菌主要是以二分裂的方式进细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如右图）行增殖（如右图）2.2.细菌的繁殖细菌的繁殖3.3.细菌的细菌的菌落菌落.定义：定义：单个或者少数细菌单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做结构的子细胞群体，叫做菌落菌落。.特征：特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。透明度等。.功能：功能：每种细菌在一定条件下所形成的菌落，每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以可以作为菌
2、种鉴定的重要依据作为菌种鉴定的重要依据。现在学习的是第2页，共30页几种菌落及其形态现在学习的是第3页，共30页几种菌落及其形态现在学习的是第4页，共30页二、培养基二、培养基 培养基（培养液）培养基（培养液）是是按照微生物对营养物质的不按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供微生物生长繁殖使用的营养同需求，配制出供微生物生长繁殖使用的营养基质。基质。1.1.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(参考教材附录内容参考教材附录内容)2.2.培养基的种类和用途培养基的种类和用途3.3.不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、氮
3、源氮源、无机盐无机盐等等营养物质，另外还需要满足微生物生长对营养物质，另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质特殊营养物质,例如例如:生长因子生长因子 (即细菌生长必即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶基酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等等的要求。的要求。现在学习的是第5页，共30页划分划分标标准准培养基种培养基种类类特点特点用途用途物理性物理性质质化学成分化学成分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基用途用途鉴别鉴别培养基培养基一、培养基的种类、用途一、培养基的种类、用途不
4、加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如琼脂加凝固剂，如琼脂工业生产工业生产观察微生物的运动、分观察微生物的运动、分类鉴定类鉴定微生物分离、鉴定、活微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质含化学成分不明确的天然物质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定在培养基中加入某种化学物在培养基中加入某种化学物质质,以抑制不需要的微生物的生长以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定培养、分离出特定微生物微生物在培养基中加入某种指示剂或化学在培养基中加入某种指示剂或化学药品药品,用以鉴别不同种类的微生物
5、用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生鉴别不同种类微生物物选择选择培养基培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基现在学习的是第6页，共30页分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞几种选择培养基几种选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基backbackbackback现在学习的是第7页，共30页血清中含
6、有：血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种金属离子；多种金属离子；激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋白不明成分不明成分人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。现在学习的是第8页，共30页微生物需要的五大类营养要素物质是：微生物需要的五大类营养要素物质是：.微生物需要的营养物质及功能微生物需要的营养物
7、质及功能1.1.碳源碳源 2.2.氮源氮源 3.3.生长因子生长因子 4.4.无机盐无机盐 5.5.水水：凡是能为微生物提供所需碳元素的：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。营养物质。无机碳源：无机碳源：COCO2 2；NaHCONaHCO3 3等等有机碳源：有机碳源：糖类糖类、脂肪酸、花生粉饼、脂肪酸、花生粉饼、石油等石油等构成细胞物质和一些代谢产物构成细胞物质和一些代谢产物异养微生物的能源异养微生物的能源.概念概念.来源：来源：.作用：作用：1.1.微生物的碳源微生物的碳源现在学习的是第9页，共30页无机氮源：无机氮源：无机氮源：无机氮源：N N N N2 2 2 2、NHNH4 4+
8、、NONONONO3 3-、NHNHNHNH3 3 3 3等。等。有机氮源：有机氮源：有机氮源：有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供N N N N元素的营养物质。元素的营养物质。元素的营养物质。元素的营养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含N N N N的代谢产物。的代谢产物。的代谢产物。的代谢产物。2.2.微生物的氮源微生物的氮源.概念：概
9、念：概念：概念：.来源：来源：来源：来源：.作用：作用：作用：作用：3.3.生长因子生长因子.常见的生长因子：常见的生长因子：常见的生长因子：常见的生长因子：.概念：概念：概念：概念：.作用：作用：作用：作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。现在学习的是第10页，共30页.培养基培养基 （三）培养基配置
10、原则（三）培养基配置原则1）目的要明确）目的要明确2)营养要协调营养要协调3）PH要适宜要适宜现在学习的是第11页，共30页.无菌技术无菌技术(注意注意)1.1.1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。的方法。的方法。的方法。消毒定义：消毒定义：利用温和的化学或物理方法，杀死利用温和的化学或物理方法，杀死部分部分微微微微生物的过程。生物的过程。生物的过程。生物的过
11、程。2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 灭菌的定义：灭菌的定义：以强烈的化学试剂或物理方法消灭以强烈的化学试剂或物理方法消灭以强烈的化学试剂或物理方法消灭以强烈的化学试剂或物理方法消灭所有所有所有所有微生物，包括所微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌完全无菌完全无菌完全无菌之过程。之过程。之过程。之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重
12、要灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。的技术。的技术。的技术。现在学习的是第12页，共30页煮沸消毒法：煮沸消毒法：100100煮沸煮沸5-6min5-6min。巴氏消毒法：巴氏消毒法：70-7570-75下煮下煮30min30min或或 8080下煮下煮15min15min。化学药剂消毒法：用化学药剂消毒法：用75%75%酒精、新洁尔灭酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。紫外线消毒：紫外照射紫外线消毒：紫外照射30min30min，房间、，房间、仪器设备仪器设备（喷洒石碳酸和煤酚皂）（喷洒石碳酸和煤酚皂）.消毒的方法：消毒的方法：3.
13、3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法现在学习的是第13页，共30页灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌：干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h。高压蒸气灭菌：高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.灭菌的方法：灭菌的方法：现在学习的是第14页，共30页消毒方法：（1 1）日常生活经常用到的是）日常生活经常用到的是 消毒法；消毒法；100煮沸煮沸5-6min（2 2）对一些不耐高温的液体，则使用）对一些不耐高温的液体，则使用 消毒法消毒法70-75 下煮下煮30min或或 80 下煮下煮15min（3
14、 3）对接种室、接种箱或超净工作台）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒首先喷洒 等溶液以增强消毒效果，等溶液以增强消毒效果，然后使用然后使用 进行物理消毒。进行物理消毒。（4 4）实验操作者的双手使用）实验操作者的双手使用 进行消毒；进行消毒；（5 5）饮水水源用）饮水水源用 进行消毒。进行消毒。现在学习的是第15页，共30页消毒方法：（1 1）日常生活经常用到的是）日常生活经常用到的是 煮沸煮沸 消毒法；消毒法；100煮煮沸沸5-6min（2 2）对一些不耐高温的液体，则使用）对一些不耐高温的液体，则使用 巴氏巴氏 消毒法消毒法70-75 下煮下煮30min或或 80 下煮下煮15min（
15、3 3）对接种室、接种箱或超净工作台）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒首先喷洒 石炭酸或煤酚皂石炭酸或煤酚皂 等溶液以增强消毒效果，等溶液以增强消毒效果，然后使用然后使用 紫外线紫外线 进行物理消毒。进行物理消毒。（4 4）实验操作者的双手使用）实验操作者的双手使用 75%酒精酒精 进行消毒；进行消毒；（5 5）饮水水源用）饮水水源用 氯气氯气 进行消毒。进行消毒。现在学习的是第16页，共30页灭菌方法：灭菌方法：（1 1）接种环、接种针、试管口等使用）接种环、接种针、试管口等使用 灭菌法；灭菌法；（2 2）玻璃器皿、金属用具等使用）玻璃器皿、金属用具等使用 灭菌法，所用器械是灭菌法，所用
16、器械是 干热灭菌箱干热灭菌箱 ；（3 3）培养基、无菌水等使用）培养基、无菌水等使用 灭菌法，所用器械是灭菌法，所用器械是 高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅 。现在学习的是第17页，共30页灭菌方法：灭菌方法：（1 1）接种环、接种针、试管口等使用）接种环、接种针、试管口等使用 灼烧灼烧 灭菌法；灭菌法；（2 2）玻璃器皿、金属用具等使用）玻璃器皿、金属用具等使用 干热干热 灭菌法，所用器械是灭菌法，所用器械是 干热灭菌箱干热灭菌箱 ；（3 3）培养基、无菌水等使用）培养基、无菌水等使用 高压蒸汽高压蒸汽 灭菌法，所用器械是灭菌法，所用器械是 高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅 。现在学习的是第18页，
17、共30页现在学习的是第19页，共30页现在学习的是第20页，共30页二二.实验操作实验操作(以培养大肠杆菌为例以培养大肠杆菌为例).制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基1.1.计算计算2.2.称量称量3.3.溶化溶化4.4.灭菌灭菌:将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa100kPa、温度为、温度为121121，灭菌，灭菌151530min30min。5 5.倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附近倒左右时，在酒精灯附近倒平板。平板。2d2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种后观察平板，无杂菌污染才可用来接
18、种。现在学习的是第21页，共30页倒倒平平板板操操作作现在学习的是第22页，共30页.纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法。微生物的接种的微生物的接种的常用接种方法有常用接种方法有：1.1.平板划线的操作方法平板划线的操作方法平板划线的操作平板划线的操作现在学习的是第23页，共30页现在学习的是第24页，共30页一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的菌二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。菌落。现在学习的是第25页，共30页现在学习的是第26页，共30页2.2.稀释涂布平板稀释涂布平板的操作方法的操作方法现在学习的是第27页，共30页现在学习的是第28页，共30页现在学习的是第29页，共30页4.4.菌种的保存菌种的保存接种到固体斜面培养接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于基，菌落长成后置于44冰箱保存。冰箱保存。3.3.微生物的恒温培养微生物的恒温培养.长期保存：长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法.临时保藏：临时保藏：现在学习的是第30页，共30页