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1、学习微生物培养的基本技学习微生物培养的基本技术术第1页，共24页，编辑于2022年，星期五 学习微生物培养的学习微生物培养的学习微生物培养的学习微生物培养的基本技术基本技术基本技术基本技术第2页，共24页，编辑于2022年，星期五实验原理实验原理1.配制培养基时要注意原料的选择和调配制培养基时要注意原料的选择和调 节节适宜的适宜的PH2.配制好的培养基必须经过灭菌，灭菌是指配制好的培养基必须经过灭菌，灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物细胞、芽孢杀死一定环境中的所有微生物细胞、芽孢和孢子。和孢子。3.对不同的材料，应当采取不同的灭菌方法：对不同的材料，应当采取不同的灭菌方法：培养基一般采用高压蒸
2、汽灭菌法，而接种培养基一般采用高压蒸汽灭菌法，而接种环则用火焰灼烧法环则用火焰灼烧法第3页，共24页，编辑于2022年，星期五方法步骤：方法步骤：一、细菌的培养技术：一、细菌的培养技术：1、培养基的配制：、培养基的配制：1、称量、称量2、溶化、溶化 3、调、调PH 4、培养基的、培养基的分装分装5、加棉塞、加棉塞6、包扎、包扎加入材料（蛋白胨、牛肉膏、琼脂等）加加入材料（蛋白胨、牛肉膏、琼脂等）加热溶化热溶化 1mol/L的的NaOH溶液，溶液，PH试纸，试纸，7476棉塞能防止杂菌污染，保证通气良棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好。不能太松、不难太紧，好。不能太松、不难太紧，2/3在在管内管内
3、 第4页，共24页，编辑于2022年，星期五2、灭菌、灭菌开锅加水开锅加水放入待灭菌的材料：管口向上，竖放，不能太挤放入待灭菌的材料：管口向上，竖放，不能太挤加盖加盖排出锅内冷空气：达排出锅内冷空气：达49Kpa时，排气两次时，排气两次维持：维持：98 Kpa，20min排气：锅内压力降为排气：锅内压力降为0时，才能排气时，才能排气第7页，共24页，编辑于2022年，星期五3、搁置斜面、搁置斜面将锅内试管等取出，在冷却至将锅内试管等取出，在冷却至50时，搁置时，搁置斜面，斜面长度不能超过试管总长度的斜面，斜面长度不能超过试管总长度的1/2第8页，共24页，编辑于2022年，星期五4、接种、接种
4、洗净双手，用酒精擦拭洗净双手，用酒精擦拭等手上酒精挥发以后，点燃酒精灯等手上酒精挥发以后，点燃酒精灯接种接种左手夹住菌种试管和接种斜面试管，拧松左手夹住菌种试管和接种斜面试管，拧松棉塞棉塞第9页，共24页，编辑于2022年，星期五接种环灼烧灭菌接种环灼烧灭菌右手无名指和小指夹住棉塞（不能放下），右手无名指和小指夹住棉塞（不能放下），灼烧管口一周灼烧管口一周第10页，共24页，编辑于2022年，星期五接种环伸入试管内，在末长菌的部位冷却，接种环伸入试管内，在末长菌的部位冷却，后挑取少量菌体，立即抽出后挑取少量菌体，立即抽出第11页，共24页，编辑于2022年，星期五在火焰旁迅速将接种环由斜面底部
5、向外轻轻在火焰旁迅速将接种环由斜面底部向外轻轻 画蛇形细线画蛇形细线第12页，共24页，编辑于2022年，星期五抽出接种环，再用火焰灼烧管口，并在火焰抽出接种环，再用火焰灼烧管口，并在火焰 上方将棉塞塞上上方将棉塞塞上熄灭酒精灯熄灭酒精灯填写标签填写标签第13页，共24页，编辑于2022年，星期五5、培养、培养25 C 57天天37 C 24小时小时第14页，共24页，编辑于2022年，星期五1不同微生物生长所要求的最适温度不同。请就测不同微生物生长所要求的最适温度不同。请就测定大肠杆菌生长最适温度的实验回答下列问题：定大肠杆菌生长最适温度的实验回答下列问题：(1)配制的相应培养基可属于配制的
6、相应培养基可属于 。A天然培养基天然培养基 B半固体培养基半固体培养基 C液体培养基液体培养基 D伊红一美蓝选择培养基伊红一美蓝选择培养基课堂练习课堂练习AC第15页，共24页，编辑于2022年，星期五(2)依次按称量、溶化、调依次按称量、溶化、调pH、分装、分装(每管每管5ml)、包扎的顺序，完成培养、包扎的顺序，完成培养基的配制，再用基的配制，再用 （方法）（方法）灭菌后，取灭菌后，取8支试管，分别标明支试管，分别标明20、28、37、45四种温度，每种温度四种温度，每种温度2管。管。加棉塞加棉塞 高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌法(3)向每管中接人处于向每管中接人处于 期的大肠杆期的大肠杆菌菌
7、液菌菌液0lml，混匀。在相应温度下培养，混匀。在相应温度下培养24h。对数对数(4)测定结果显示，测定结果显示，45下的菌体最少，因为下的菌体最少，因为细胞内的细胞内的 等发生了不可逆的等发生了不可逆的破坏。破坏。蛋白质和核酸蛋白质和核酸 第16页，共24页，编辑于2022年，星期五（2008理综天津卷）理综天津卷）31、（、（16分）分）莠去津是一种含氮的有机化合物，它是广泛使用的除莠去津是一种含氮的有机化合物，它是广泛使用的除草剂之一。草剂之一。莠去津的作用机理之一是阻断光反应中的电子传莠去津的作用机理之一是阻断光反应中的电子传递过程，影响递过程，影响NADP形成形成，进而影响，进而影响
8、在在中进行光合作用的暗反中进行光合作用的暗反应过程，最终抑制杂草生长。应过程，最终抑制杂草生长。NADPH 叶绿体基质叶绿体基质 第17页，共24页，编辑于2022年，星期五从使用莠去津农田中，选到了能遗传的耐莠去津杂草，从使用莠去津农田中，选到了能遗传的耐莠去津杂草，将它与敏感莠去津植株杂交，结坚果见下表：将它与敏感莠去津植株杂交，结坚果见下表：杂交交亲本本后代中耐后代中耐药型型植株比例（植株比例（%）后代中敏感型后代中敏感型植株比例（植株比例（%）耐耐药型型敏敏感型感型1000敏感型敏感型耐耐药型型0100由表推断，控制该耐药性状的基因位于由表推断，控制该耐药性状的基因位于。细胞质中细胞质
9、中第18页，共24页，编辑于2022年，星期五某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。题。（1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了提供了_和和_。除此之外，培养基还必须含。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是有的基本成分是_和和_。（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_ 。氮源氮源 碳源
10、碳源 无机盐无机盐 水水 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌第19页，共24页，编辑于2022年，星期五（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于种了湖水样品的平板置于_ _ 中培养，培养中培养，培养的温度设定在的温度设定在37。要使该实验所得结果可靠，还应。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种该同时在另一平板上接种_作为对照进行实验。作为对照进行实验。（4）培养）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有不同的菌落，这说明湖水样品中有_种细菌。种细菌。一般说来，
11、菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越度越_。恒温培养箱恒温培养箱 无菌水无菌水 多多 高高 第20页，共24页，编辑于2022年，星期五（5）如果提高培养基中）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛的浓度，可以用于筛选耐选耐_细菌，这种培养基被称为细菌，这种培养基被称为_ 。盐盐 选择性培养基选择性培养基第21页，共24页，编辑于2022年，星期五16在光亮处用一种培养液分别培养绿藻和酵母在光亮处用一种培养液分别培养绿藻和酵母菌，其结果如右图，造成这种结果的原因是培养菌，其结果如右图，造成这种结果的原因是培养液中液中A缺少无机盐缺少无机盐B含氧
12、量太高含氧量太高C缺少有机养分缺少有机养分D不含二氧化碳不含二氧化碳C第22页，共24页，编辑于2022年，星期五17右图是细菌的生长速度曲线，根据曲线回答下右图是细菌的生长速度曲线，根据曲线回答下列问题：列问题：(1)活细菌数量最多时对应的是曲线中的活细菌数量最多时对应的是曲线中的 段。段。总菌数目总菌数目(包括死菌和活菌包括死菌和活菌)最多的时期对应曲线最多的时期对应曲线中的中的 段。段。(2)3段中生长速度下降的原因是段中生长速度下降的原因是 。3 4营养物质的消耗；有害代谢产物的积累，营养物质的消耗；有害代谢产物的积累，Ph值变化值变化(3)调整期出现的原因是细菌接种到新的培养基上调整
13、期出现的原因是细菌接种到新的培养基上后，需要重新合成必需的酶，辅酶或某些必需中间后，需要重新合成必需的酶，辅酶或某些必需中间代谢产物，以适应新环境，这种调节方式属代谢产物，以适应新环境，这种调节方式属 。酶合成的调节酶合成的调节(4)处于对数期的微生物，代谢旺盛，生长迅速，如处于对数期的微生物，代谢旺盛，生长迅速，如果用作菌种，可在短时间内得到大量微生物，以缩短果用作菌种，可在短时间内得到大量微生物，以缩短发酵周期，曲线中属于这一时期的是发酵周期，曲线中属于这一时期的是 段。段。2 第23页，共24页，编辑于2022年，星期五3（重庆）下列有关大肠杆菌的叙述，正确的是（重庆）下列有关大肠杆菌的叙述，正确的是 A大肠杆菌以复制方式进行繁殖，其拟核是一个大肠杆菌以复制方式进行繁殖，其拟核是一个环状环状DNA分子分子 B在含葡萄糖和乳糖的培养基上，大肠杆菌首先在含葡萄糖和乳糖的培养基上，大肠杆菌首先利用乳糖作碳源利用乳糖作碳源 C用大肠杆菌工程菌生产干扰素时应及时添加用大肠杆菌工程菌生产干扰素时应及时添加核酸等生长因子核酸等生长因子 D处于对数期的大肠杆菌常作为生产用的菌种处于对数期的大肠杆菌常作为生产用的菌种和科研的材料和科研的材料D第24页，共24页，编辑于2022年，星期五