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1、实验四实验四:酶的特性酶的特性实验目的：加深对酶的性质的认识。实验内容：1.温度对酶活力的影响2.pH对酶活力的影响3.酶的激活及抑制剂4.酶的专一性温度对酶活力的影响温度对酶活力的影响一、原理：一、原理：酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为3740，植物酶的最适温度为5060。酶对温度的稳定性与其存在形式有关。由些酶的干燥制剂，虽加热到100，其活性并无明显改变，但在100的溶液中却很快地完全失去活性。低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。二、器材：二、器材：1)试管及试管架2)恒温水浴3)冰浴4)沸水浴三、试剂和材料：三、试剂和材料：1)含
2、0.2淀粉的0.3NaCl溶液150ml，需新鲜配制 2)稀释200倍的唾液50ml：用蒸馏水漱口，以清除事物残渣，再含一口蒸馏水，半分钟后使其流入量筒并稀释200倍，混匀备用。3)KI碘溶液50ml：将KI20g及碘10g溶于100ml水中。使用前稀释10倍。四、操作方法：四、操作方法：淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被唾呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水
3、解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。判断。取取三支试管，编号后按下表加入试剂：三支试管，编号后按下表加入试剂：管号管号123淀粉溶液淀粉溶液（ml）1.51.51.5稀释唾液稀释唾液（ml）11煮沸过的稀释煮沸过的稀释唾液（唾液（ml）1 摇匀摇匀后，将后，将1号、号、3号两试管放入号两试管放入37 恒恒温水浴中，温水浴中，2 2号试管放入冰中，号试管放入冰中，10min10min后去后去处，（将处，（将2 2号管内液体分为两半）用号管内液体分为两半）用KIKI碘碘溶液来检验溶液来检验1 1、2 2、3 3管内淀粉被唾液淀粉酶管内淀粉
4、被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果，将水解的程度。记录并解释结果，将2 2号管剩号管剩下的一半溶液放入下的一半溶液放入3737水浴中继续保温水浴中继续保温10min10min后，再用碘液实验，结果如何？后，再用碘液实验，结果如何？pH对酶活性的影响对酶活性的影响一、原理一、原理 酶的活力受环境酶的活力受环境pH的影响极为显著。不同酶的最适的影响极为显著。不同酶的最适pH值值不同。本实验观不同。本实验观察察pH对对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适pH约为约为6.8。二、器材二、器材1)试管及试管架试管及试管架2)吸管吸管3)滴管滴管4)50ml锥形
5、瓶锥形瓶5)恒温水浴恒温水浴三、试剂和材料三、试剂和材料1)新配制的溶于新配制的溶于0.3NaCl的的0.5淀粉溶液淀粉溶液 250ml2)稀释稀释200倍的新鲜唾液倍的新鲜唾液 100ml3)0.2mol/L磷酸氢二钠溶液磷酸氢二钠溶液 600ml4)0.1mol/L柠檬酸溶液柠檬酸溶液 400ml5)KI碘溶液碘溶液 50ml6)pH试纸：试纸：pH=5、pH=5.8、pH=6.8、pH=8四种四种四、操作方法：四、操作方法：取四个标有号码的取四个标有号码的50ml锥形瓶。用吸管按下表添锥形瓶。用吸管按下表添加加0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和磷酸氢二钠溶液和0.1柠檬酸溶液以制备柠檬酸溶
6、液以制备pH5.08.0的四种缓冲液。的四种缓冲液。从四个锥形瓶中各取缓冲液从四个锥形瓶中各取缓冲液3ml，分别注入分别注入4支带支带有号码的试管中，随后于每个试管中添加有号码的试管中，随后于每个试管中添加0.5淀粉淀粉溶液溶液2ml和稀释和稀释200倍的唾液倍的唾液2ml。向各试管中加入稀向各试管中加入稀释唾液的时间间隔各为释唾液的时间间隔各为1min。将各试管内容物混匀，将各试管内容物混匀，并依次置于并依次置于37 恒温水浴中保温。恒温水浴中保温。第四管加入唾液第四管加入唾液2min后，每隔后，每隔1min由第由第3管取出一管取出一滴混和液，置于白瓷板上，加滴混和液，置于白瓷板上，加1小滴
7、小滴KI碘溶液，检碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混和液变为棕黄色时，向所验淀粉的水解程度。待混和液变为棕黄色时，向所有试管依次添加有试管依次添加12滴滴KI碘溶液。添加碘溶液。添加KI碘溶碘溶液的时间间隔从第一管起，亦均为液的时间间隔从第一管起，亦均为1min。观察各试管内容物呈现的颜色，分析观察各试管内容物呈现的颜色，分析pH对唾液对唾液淀粉酶活性的影响。淀粉酶活性的影响。锥形瓶锥形瓶号码号码0.2mol/L磷酸氢二磷酸氢二钠（钠（ml）0.1 mol/L柠柠檬酸（檬酸（ml）pH15.154.855.026.053.955.837.722.286.849.720.288.0唾液淀粉酶的活化
8、和抑制唾液淀粉酶的活化和抑制一、原理一、原理 酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。的活化剂，铜离子为其抑制剂。二、器材：二、器材：1)恒温水浴恒温水浴2)试管及试管架试管及试管架三、试剂和材料：三、试剂和材料：1)0.1的淀粉溶液的淀粉溶液 150ml2)稀释稀释200倍的新鲜唾液倍的新鲜唾液 150ml3)1NaCl溶液溶液 50ml4)1硫酸铜溶液硫酸铜溶液 50ml5)1硫酸钠溶液硫酸钠溶液 50ml6)KI碘溶液碘溶液 100ml 四、操作方法：四、操作方法：管号管号12340.1的淀粉溶液（的
9、淀粉溶液（ml）1.51.51.51.5稀释唾液（稀释唾液（ml）0.50.50.50.51硫酸铜溶液（硫酸铜溶液（ml）0.51NaCl溶液（溶液（ml）0.51硫酸钠溶液（硫酸钠溶液（ml）0.5蒸馏水（蒸馏水（ml）0.537 恒温水浴、保温恒温水浴、保温10minKI碘溶液（滴）碘溶液（滴）23232323现象现象注：保温时间可根据各人唾液淀粉酶活力调整解释说明，说明本实验第3管的意义酶的酶的专一性专一性一、原理一、原理 酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶的作用为例，来说明酶的专粉酶和蔗糖酶的作用为例，来说明酶的专一性。一性。淀粉和蔗糖无还
10、原性，唾液淀粉酶水解淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成由还原性的麦芽糖，但不能催化淀粉生成由还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉的还原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉的水解。用水解。用Benedict试剂检查糖的还原性。试剂检查糖的还原性。二、器材：二、器材：1)恒温水浴恒温水浴2)沸水浴沸水浴3)试管及试管架试管及试管架三、试剂和材料：三、试剂和材料：1)2蔗糖溶液蔗糖溶液 150ml2)溶于溶于0.3NaCl的的1淀粉溶液（需新鲜配制）淀粉溶液（需新鲜配制）150ml3)稀释稀释200倍的
11、新鲜唾液倍的新鲜唾液 100ml4)蔗糖酶溶液蔗糖酶溶液 100ml 将啤酒厂的鲜酵母用水洗涤将啤酒厂的鲜酵母用水洗涤23次（离心），然后放在滤纸上自然次（离心），然后放在滤纸上自然干燥。取干酵母干燥。取干酵母100g，置于乳钵内，添加适量蒸馏水及少量细沙，置于乳钵内，添加适量蒸馏水及少量细沙，用力研磨，提取约用力研磨，提取约1h，再加蒸馏水使总体积约为原体积的再加蒸馏水使总体积约为原体积的10倍。离倍。离心，将上清液保存于冰箱中备用。心，将上清液保存于冰箱中备用。5)Benedict氏氏试剂试剂 200ml 无水硫酸铜无水硫酸铜1.74g溶于溶于100ml热水中，冷却后稀释至热水中，冷却后稀
12、释至150ml。取柠檬取柠檬酸钠酸钠173g，无水碳酸钠无水碳酸钠100g和和600ml水共热，溶解后冷却并加水至水共热，溶解后冷却并加水至850ml。再将冷却的再将冷却的150ml硫酸铜溶液倾入。本试剂可长久保存。硫酸铜溶液倾入。本试剂可长久保存。四、操作方法：四、操作方法：1.淀粉酶的专一性：管号管号1234561淀粉溶液（滴）淀粉溶液（滴）4442蔗糖溶液（滴）蔗糖溶液（滴）444稀释唾液（稀释唾液（ml）11煮沸过的稀释唾液煮沸过的稀释唾液（ml）11蒸馏水（蒸馏水（ml）1137 恒温水浴恒温水浴15minBenedict试剂（试剂（ml）111111沸水浴沸水浴23min现象现象
13、解释实验结果（提示：唾液除含淀粉酶外还含有少量麦芽糖酶）解释实验结果（提示：唾液除含淀粉酶外还含有少量麦芽糖酶）2.蔗糖酶的专一性：蔗糖酶的专一性：管号管号1234561淀粉溶液（滴）淀粉溶液（滴）4442蔗糖溶液（滴）蔗糖溶液（滴）444蔗糖酶溶液（蔗糖酶溶液（ml）11煮沸过的蔗糖酶溶液煮沸过的蔗糖酶溶液（ml）11蒸馏水（蒸馏水（ml）1137 恒温水浴恒温水浴15minBenedict试剂（试剂（ml）111111沸水浴沸水浴23min现象现象 解释实验结果解释实验结果 实验建议实验建议 1、因各人的唾液淀粉酶活性有所差异，若某一碘液检验结果为全部变为淡黄色，或无一变为淡黄色，则需增大或减少唾液稀释倍数，或者改变酶作用时间。2、配制缓冲液时，吸量要准确。pH为5.0、5.8、6.8、8.0。3、检验离子对酶活性影响时，切勿吸错或污染了试剂