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1、常见临床标本的细菌学检常见临床标本的细菌学检验验二、标本采集的一般原则1、应在病程的一定阶段（一般为发病早期）尽可能在施实抗生素疗法、化学方法、血清学疗法之前采集标本。2、方法要恰当,标本应来自真正的感染部位，避免其它微生物特别是正常微生物的污染。3、所有采集的标本均应置于无菌容器中（灭菌不能使用消毒剂）加入适当保存液 。4、标本应尽快接种（最好是床边接种），若必须传送时，应根据培养目的作保温、冷藏、厌氧运送。防止污染及扩散。5、检样不宜过少，否则易干燥死亡。（六）胆汁：1、行十二指肠引流水收集“胆汁乙”10-15ml。胆汁甲胆总管（）胆汁乙胆素（柠黄色）胆汁丙肝胆管（金黄色）胆汁丁十二指肠（
2、）（七）穿刺液：1：原则上由临床医生先穿刺获得。2：采样量：胸水，腹水：5-10ml 3：如需抗凝：3.8%枸橼酸钠。1：10（八）尿液：1、一般用导尿.5-10ml，也可用中段尿.（应消注明），留中段尿应冲洗尿道口/外阴部（1：1000高锰酸钾，2%红汞.1：1000新洁尔灭，先消毒液冲洗，再无菌纱布或干棉球拭干）。2、作结核杆菌培养，留取24h尿，将沉淀部分送检。3、肾盂尿，应标明右、左，每侧分3份留联（导尿管插入输尿管。）4、通常宜取清晨第一次尿。5、采集后应立即送检，接种，一般不得超过1h，冰箱保存，不过6h。四、常见临床标本鉴定程序 染色镜检 变浊、色、质 BA 菌落 染色镜检l1血
3、液酚红葡萄糖肉汤 有菌落l 无改变BAl 报告：无菌生长 无菌落l 无菌落l BAl 有菌落染色镜检l 变浊、色、质BA菌落染色镜检l2穿刺液 血肉汤 有菌落l 无改变BAl 报告：无菌生长 无菌落l 染色 3，拭子（咽、脓）BA菌落分类、编号、染色镜检染色镜检注：接种血平板时，拭子作原划线、接种环划开4、痰BA菌落分类、编号、染色TB培养罗氏斜面（先消化处理）4%NaOH 6%H2SO45、尿液BA（直径=9.0cm，接种量0.01ml）注：将标本充分划开集菌（3000n/min 15）沉渣革兰氏染色BA 无菌落报告：无菌生长有菌落染色镜检菌落计数报告：检出*菌 *个/ml10万/ml感染6
4、、粪便（含肛拭子）SS、MaC（强弱各1个）无可疑菌落 报告：无致病菌生长可疑菌落（透明/半、无酸色）增菌（一般不进行）T.T增菌液（四硫磺酸盐肉汤）M.M增菌液(MgCL2孔雀绿肉汤)S.F增菌液（亚硫酸盐肉汤）沙门氏菌煌绿增菌液亚硒酸盐增液沙志G.N志贺氏菌碱性蛋白胨水霍乱弧菌革兰氏染色球菌 G+杆菌:根据菌落特征,细菌染色性,形态排列选择恰当生化反应,免疫学反应及动物试验报告G-杆菌KIA菌落描述:颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度根据KIA结果选择适当生化反应项目+/+I M Vi C 七叶+-/+I MAN SUC C U PA_ _ _
5、 _I项“+”非沙门氏菌 +I项“+”非志贺氏菌 +变+普-/-I 葡 C 不动杆菌 绿脓杆菌+/-一般不会出现，可考虑接种不当，空 气污染根据生化反应结果，结合相应血清学实验 报告结果五、空气细菌计数l将直径9.0cm/普通琼脂平板/血琼脂平板按五点法/三点法打开盖暴露20，盖好37 24h计数菌落数，称出平均每个板菌落数N奥梅梁斯基法则：100cm2 510L A t *10L At100*50XX个/M3=*1000=39.32N N *10 At100*550000N At（49.0；20）结果报告应注明“普通琼脂平板培养”/“血琼脂平板培养”肠杆菌科各属KIA结果 斜面 底层 产气
6、H2S 动力埃希氏菌属 A/K A +/-（+）/-志贺氏菌属 K A -沙门氏菌属 K A +/-d/+枸橼酸盐菌属 d A +d +克雷伯氏菌属 A A +-肠杆菌属 A A +-+欧文氏菌属 K/A A -/+/-+/-沙雷氏菌属 K/A A +/-/d 哈夫尼亚菌属 K/A A +-+/-爱得华氏菌属 K A +/d +/-+斜面 低层 产气 H2S 动力变形杆菌属 K A +/-+普罗菲登斯菌属 K A +/-+摩根氏菌属 K A （+）-+耶尔森氏菌属 K/d A d/-肥杆菌属 K A -致病性杆菌属 K A -+克沃尔氏菌属 A A +-+/（+）拉思氏菌属 A A （+）-西
7、地西菌属 K/d A （+）/+-塔特母氏菌属 -A -注：A 产酸；K 产碱；+90-100%菌株阳性；（+）76-89%菌株阳性；d 26-75%菌株阳性；-0-10%菌株菌阳性七、肠杆菌微量快速鉴定l一、机理：不同种细菌有不同酶系。首 先获得待测菌的纯培养物，制成悬液，将其示为酶 予成酶 l 酶+低物+显色剂（或其他添加剂）观察现象二、装置：反应板16孔内含16和底物等径真空，低温干燥，密封保存备用。12 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 H2S N PD I LD OD M U VP E ONPG SKA AR AD 1N SO序号 实验名称 英文缩
8、写 阴性 阳性 1 H2S H2S 无色 棕色、黑色 2 硝酸盐还原 N 淡黄/白色 粉红 3 苯丙胺酸 P 白色 绿色 4 吲哚 I 白色 粉红序号 实验名称 英文缩写 阴性 阳性5 赖胺酸 LD 黄色 紫兰色6 乌胺酸 OD 黄色 桔色 7 丙二酸盐 M 黄缘色 湖兰色8 尿素 U 黄色 粉红9 VP VP 白色 粉红10 七叶苷 E 白色 棕黑色 11 ONPG ONPG 白色 黄色12 蔗糖 S 紫色 黄色13 阿拉伯糖 A 紫色 黄色14 侧金盏花醇 AD 紫色 黄色15 肌醇 1N 紫色 黄色1 6 山梨醇 SO 紫色 黄色 1 2 3 4 5 6 7 8H2S N PD I LD OD M U 4 2 1 4 2 1 4 2-+-+-+0 5 29 10 11 12 13 14 15 16VP E ONPG SAK AR AD 1N SO1 4 2 1 4 2 1 4-+-1 0 0细菌编码052100 查编码鉴定手册得摩根氏变形杆菌操作步骤：取3-4个同细菌菌落用 4mlNS制成悬液，每孔加0.2ml，加盖。35 4h 观察结果（某些项目要加入相应试剂）。