临床标本的细菌学检验.ppt

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1、1瑞金临床医学院检验系瑞金临床医学院检验系2病原学检查的主要任务病原学检查的主要任务1 1研究感染性疾病的病原体特征研究感染性疾病的病原体特征 传统感染性疾病的病原体研究传统感染性疾病的病原体研究 条件致病菌和耐药菌的研究条件致病菌和耐药菌的研究 临床感染优势菌的组成和变迁规律临床感染优势菌的组成和变迁规律 新出现病原体的研究新出现病原体的研究32 2提供快速、准确的病原学诊断提供快速、准确的病原学诊断 以分离培养为核心，微生物的分离鉴定以分离培养为核心，微生物的分离鉴定及确证实验为诊断依据的活菌检验及确证实验为诊断依据的活菌检验 非培养方法的快速检验非培养方法的快速检验 43.3.指导临床合

2、理使用抗生素指导临床合理使用抗生素对分离的病原体进行抗生素敏感试验对分离的病原体进行抗生素敏感试验参与临床，提出合理用药的建议参与临床，提出合理用药的建议54 4对医院感染进行监控对医院感染进行监控 NosocomialNosocomial infection infection： ：又称医院获得性感染（又称医院获得性感染（hospital acquired infectionhospital acquired infection），）， 指患者在入指患者在入院时不存在，也不处于潜伏期，而在医院内发生院时不存在，也不处于潜伏期，而在医院内发生的感染，包括医院内获得的而在出院后发病的感的感染，包

3、括医院内获得的而在出院后发病的感染。染。 广义的医院感染对象不仅指住院患者，还包括门广义的医院感染对象不仅指住院患者，还包括门诊病人、医院职工、探视人员与陪护人员等。诊病人、医院职工、探视人员与陪护人员等。医医患之间、病人之间、病人内源性感染、操作不当患之间、病人之间、病人内源性感染、操作不当引起的医源性感染。引起的医源性感染。6监控内容监控内容 基本原则与病原体感染类似，但更应注基本原则与病原体感染类似，但更应注意正常菌群的污染以及条件致病菌在医意正常菌群的污染以及条件致病菌在医院感染中的地位。院感染中的地位。 定期对医院环境进行病原体监测。定期对医院环境进行病原体监测。 定期对医疗器械的消

4、毒效果进行监测。定期对医疗器械的消毒效果进行监测。7血液（败血症）的细菌学检查血液（败血症）的细菌学检查 中枢神经系统感染的细菌学检查中枢神经系统感染的细菌学检查 呼吸系统感染的细菌学检查呼吸系统感染的细菌学检查 泌尿生殖道感染的细菌学检查泌尿生殖道感染的细菌学检查 胃肠道感染的细菌学检查胃肠道感染的细菌学检查外科感染的细菌学检查外科感染的细菌学检查8PreceduresPrecedures for bacterial detection for bacterial detectionspecimenspecimenStain of smearStain of smearCulture and

5、 isolationCulture and isolationEnriched cultureEnriched cultureAnaerobic cultivationAnaerobic cultivationCultivation with carbon dioxideCultivation with carbon dioxideObservation of colonial morphologyObservation of colonial morphologyPicking colonyPicking colonyStain of smearStain of smear microsco

6、pic detection microscopic detection Serological Serological identificationidentificationBiochemicalBiochemical identificationidentificationAntimicrobialAntimicrobial susceptibility testing susceptibility testingDetermination of pathogenic bacterial detectionDetermination of pathogenic bacterial dete

7、ction9临床标本采集基本原则临床标本采集基本原则1. 1. 尽早采集尽早采集标本采集的最适时机标本采集的最适时机: :尽量在抗菌药物使用尽量在抗菌药物使用前，临床症状和体征最明显的时候采集标前，临床症状和体征最明显的时候采集标本。本。 102. 无菌采集：无菌采集：减少或避免机体正常菌群及减少或避免机体正常菌群及其他杂菌污染。盛标本容器须经灭菌处其他杂菌污染。盛标本容器须经灭菌处理，但不得使用消毒剂。理，但不得使用消毒剂。113. 不同的采集方法和标本种类不同的采集方法和标本种类124. 保存和运送：标本采集后应立即送至实保存和运送：标本采集后应立即送至实验室。床边接种可提高病原菌检出率。

8、验室。床边接种可提高病原菌检出率。135. 安全采集安全采集14Step1. 接受每一份标本时都应该用肉眼或接受每一份标本时都应该用肉眼或 显微镜检查，以便评价其是否适合显微镜检查，以便评价其是否适合 进一步检查。进一步检查。临床标本检验程序临床标本检验程序15Step2. 明确标本来源、来源科室及检验明确标本来源、来源科室及检验 项目有助于对病原菌的正确诊断项目有助于对病原菌的正确诊断。requisitionrequisitionThe patientThe patient, ,s name and s name and hospital number.hospital number.Age

9、 and sex.Age and sex.Collection date and time.Collection date and time.Exact nature and source Exact nature and source of the specimen.of the specimen.Objective.Objective.1617Step3. 选择适合特定标本类型的初次培养选择适合特定标本类型的初次培养 基、孵育的温度和气体，以便有效基、孵育的温度和气体，以便有效 地发现潜在的致病菌。地发现潜在的致病菌。18192021Step4. 初次培养基上的分离物，可能存在初次培养基上

10、的分离物，可能存在 多种细菌：多种细菌： 区分正常菌群与致病菌区分正常菌群与致病菌 确定优势菌群确定优势菌群22化脓性链球菌菌落特征化脓性链球菌菌落特征（溶血）溶血）铜绿假单胞菌菌落特征（血琼脂平板）铜绿假单胞菌菌落特征（血琼脂平板）23涂涂 片片 检检 查查 快速快速 是是“指南针指南针” 对确诊报告提供参考意义对确诊报告提供参考意义 不要过分依赖、过分夸大它的作用不要过分依赖、过分夸大它的作用24 血液、分泌物、排泄物、穿刺液、脑脊液等标本和血液、分泌物、排泄物、穿刺液、脑脊液等标本和液体培养物可直接涂片镜检，有些细菌可做出初步诊断。液体培养物可直接涂片镜检，有些细菌可做出初步诊断。病病

11、种种标标 本本方方 法法结结 果果鼠鼠 疫疫痰，腺穿刺液痰，腺穿刺液GSGS，亚甲兰染色亚甲兰染色G-G-两极两极浓浓染，多形态染，多形态霍霍 乱乱水样便水样便GSGS，制动试验制动试验G-G-弧菌，流星样运动弧菌，流星样运动炭炭 疽疽痰，渗出物痰，渗出物GSGS，亚甲兰染色亚甲兰染色/ /串串珠试验珠试验G+G+大大杆菌杆菌，竹节状排列，有芽胞和，竹节状排列，有芽胞和荚膜荚膜白白 喉喉假膜，咽拭子假膜，咽拭子GSGS，亚甲兰染色亚甲兰染色G+G+棒状，异染颗粒棒状，异染颗粒/ /特殊排列特殊排列淋淋 病病尿道尿道/ /阴道分泌物阴道分泌物GSGSG-G-双球菌，位于脓细胞内双球菌，位于脓细胞

12、内/ /外外流流 脑脑脑脊液、瘀血癍脑脊液、瘀血癍GSGSG-G-双球菌，位于脓细胞内双球菌，位于脓细胞内/ /外外肺结核肺结核痰痰抗酸染色抗酸染色兰色背景中红色杆菌兰色背景中红色杆菌梅梅 毒毒病变渗出液病变渗出液暗视野暗视野白色折光活动的密螺旋体白色折光活动的密螺旋体25 26革兰阳性革兰阳性需氧需氧球菌鉴定球菌鉴定触酶触酶+凝固酶凝固酶DNADNA酶酶+葡萄球菌属葡萄球菌属-溶血现象溶血现象溶血溶血溶血溶血溶血溶血optochinoptochin胆汁七叶苷胆汁七叶苷6.56.5NaclNacl杆菌肽杆菌肽CAMPCAMP胆汁七叶苷胆汁七叶苷6.56.5NaclNacl-27革兰阴性杆菌鉴定

13、革兰阴性杆菌鉴定需氧菌需氧菌厌氧菌厌氧菌脆弱拟杆菌脆弱拟杆菌梭杆菌属梭杆菌属其他其他氧化酶氧化酶KIA,O/FKIA,O/FKIA,O/FKIA,O/F发酵菌发酵菌F F非发酵菌非发酵菌O/-O/-肠杆菌科肠杆菌科苯丙氨酸苯丙氨酸VPVP动力动力不动不动杆菌属杆菌属-+弧菌科弧菌科-+发酵菌发酵菌F F非发酵菌非发酵菌O/-O/-动力动力嗜麦芽嗜麦芽寡养单胞菌寡养单胞菌假单胞菌属假单胞菌属产碱杆菌属产碱杆菌属黄杆菌属黄杆菌属莫拉氏菌属莫拉氏菌属28 Step5. 在已鉴定的细菌中，确定哪一在已鉴定的细菌中，确定哪一 种要进行怎样的微生物敏感性种要进行怎样的微生物敏感性 试验。试验。29 医生、

14、护士、检验师医生、护士、检验师 正确采集正确采集 运送标本运送标本 微生物科微生物科 直接镜检、免疫学和分子生物检测、直接镜检、免疫学和分子生物检测、 病原体分离培养鉴定、药敏实验病原体分离培养鉴定、药敏实验 报告报告 结果结果 医生医生 明确诊断、合理用药明确诊断、合理用药30败血症的细菌学检查败血症的细菌学检查 血液标本的细菌培养是诊断败血症的基本方法。血液标本的细菌培养是诊断败血症的基本方法。 如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。 SepsisSepsis：The presence of pathogenic microorganisms

15、or The presence of pathogenic microorganisms or their toxins in tissues or in the blood. Systemic their toxins in tissues or in the blood. Systemic disease caused by the spread of the disease caused by the spread of the microorganisms via the circulating blood is microorganisms via the circulating b

16、lood is commonly called SEPTICEMIAcommonly called SEPTICEMIA. 一过性、间歇性、持续性一过性、间歇性、持续性31 血培养常见的病原菌主要有金黄色血培养常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球菌、链球菌（或表皮葡萄球菌、链球菌（A A，B B群群、肺炎链球菌等）、产单核细胞李、肺炎链球菌等）、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、伤寒及副斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌，伤寒沙门菌，大肠埃希菌、肺炎克大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌雷伯菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌属、属、厌氧菌和念珠菌等。厌氧菌和念珠菌等。32 血血标本采

17、集和运送：标本采集和运送： 1. 1. 采血指征采血指征: : 2. 2. 采血量采血量: : 成人采血成人采血量是量是8 810 ml ,10 ml ,儿童儿童1 1 5 ml5 ml血液和肉汤之比血液和肉汤之比为为1515110110。 3. 血培养次数和采血血培养次数和采血时间：时间： 4. 具体操作：具体操作： 5. 标本运送：标本运送：33菌血症时血液中的细菌并不多，通常仅菌血症时血液中的细菌并不多，通常仅101020 20 CFU/ml, CFU/ml, 故采血量大阳性率高。故采血量大阳性率高。采血培养应该尽量在使用抗菌药之前进行采血培养应该尽量在使用抗菌药之前进行, ,在在24

18、h 24 h 内采内采集集2 23 3 次做血培养次做血培养( (一次静脉采血注入到多个培养瓶中一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养应视为单份血培养) ) 。对间歇性寒战或发热，应在寒战或体温高峰到来之前对间歇性寒战或发热，应在寒战或体温高峰到来之前0.50.5 1 1h h采集血液，或于寒战或发烧后采集血液，或于寒战或发烧后1 1h h进行。进行。标本运送标本运送: : 采血后应该立即送检采血后应该立即送检, ,如不能立即送检如不能立即送检, ,需室需室温保存或置温保存或置35 35 37 37 孵箱中孵箱中, ,切勿冷藏。切勿冷藏。34 实验室检查：实验室检查：1.1.传统手工法

19、：传统手工法：2.2.自动化血培养检测系统：自动化血培养检测系统：35361 1. .目前引起败血症的病原菌多为耐药的金目前引起败血症的病原菌多为耐药的金葡菌和大肠埃希菌及其他一些葡菌和大肠埃希菌及其他一些G G- - 杆菌，杆菌，也有二种以上细菌也有二种以上细菌和真菌同时或交替引和真菌同时或交替引起的败血症。起的败血症。2 2. .对检出的常见细菌不能随便判定，其标对检出的常见细菌不能随便判定，其标准为：准为： 1 1）两次培养均出现同一种细菌（可排除）两次培养均出现同一种细菌（可排除污染）。污染）。 2 2）发病）发病2 2个星期后血中抗体滴度明显上个星期后血中抗体滴度明显上升。升。37

20、结果报告结果报告1. 1. 阳性结果报告阳性结果报告: (1) : (1) 初级报告初级报告 (2)(2) 最终报告最终报告2. 2. 阴性结果报告：阴性结果报告：38中枢神经系统感染的细菌学中枢神经系统感染的细菌学检查检查 脑脊液为一水样透明液体，存在于脑室脑脊液为一水样透明液体，存在于脑室和蛛网膜下腔内。在生理情况下，血液和蛛网膜下腔内。在生理情况下，血液和脑脊液之间有血脑屏障，阻碍各种微和脑脊液之间有血脑屏障，阻碍各种微生物通过血液进入中枢神经系统。正常生物通过血液进入中枢神经系统。正常人的脑脊液是绝对无菌的。在病理情况人的脑脊液是绝对无菌的。在病理情况下，血脑屏障受到破坏，病原微生物及

21、下，血脑屏障受到破坏，病原微生物及其产物进入脑脊液，引起中枢神经系统其产物进入脑脊液，引起中枢神经系统损害。此时在脑脊液中可培养检出病原损害。此时在脑脊液中可培养检出病原微生物微生物 。39 3 3个月至个月至5 5岁儿童细菌性脑膜炎的主要致病菌流感岁儿童细菌性脑膜炎的主要致病菌流感嗜血杆菌。新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌、嗜血杆菌。新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌、B B群群溶血性链球菌、溶血性链球菌、Lister Lister monocytogensmonocytogens和脑膜败和脑膜败血黄杆菌引起。血黄杆菌引起。 化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎脑膜炎奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、HaemophilusHae

22、mophilus influenzaeinfluenzae 、肺炎链球菌、肺炎链球菌 继发性脑膜炎继发性脑膜炎葡萄球菌（败血症和损伤等）葡萄球菌（败血症和损伤等） 链球菌（继发于耳鼻喉感染，尤以乳突炎和中耳链球菌（继发于耳鼻喉感染，尤以乳突炎和中耳炎多见）炎多见） 大肠埃希菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌、枸橼酸大肠埃希菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌、枸橼酸杆菌、不动杆菌和肠球菌等（脑部外伤、神经外杆菌、不动杆菌和肠球菌等（脑部外伤、神经外科手术和脊髓麻醉等引起）科手术和脊髓麻醉等引起）40 结核性脑膜炎结核性脑膜炎结核分枝杆菌结核分枝杆菌 真菌性脑膜炎真菌性脑膜炎新生隐球菌、白假丝新生隐球菌、白假丝酵

23、母菌酵母菌 大脑脓肿患者的脑脊液培养时，多达大脑脓肿患者的脑脊液培养时，多达85%85%可检出厌氧菌，有时可为厌氧菌和需氧可检出厌氧菌，有时可为厌氧菌和需氧菌混合感染。菌混合感染。41观察物观察物细菌性的细菌性的结核性的结核性的真菌性的真菌性的病毒性的病毒性的 优势白细优势白细胞类型胞类型分裂的多形核分裂的多形核嗜中性粒细胞嗜中性粒细胞单核细胞单核细胞单核细胞单核细胞单核细胞单核细胞糖糖很低很低5-20mg/100ml低低20-40mg/100ml低低20-40mg/ml正常正常65-70mg/ml蛋白蛋白增高增高增高增高增高增高感染早期感染早期轻度增高轻度增高涂片染色涂片染色革兰染色革兰染色

24、抗酸染色抗酸染色印度墨汁印度墨汁脑脑 膜膜 炎炎 类类 型型42 标本的采集和运送标本的采集和运送 腰椎或脑室穿刺，将脑脊液分别收集于腰椎或脑室穿刺，将脑脊液分别收集于3 3只无菌试管内，只无菌试管内， 1-2ml/ 1-2ml/管管 细菌学检查细菌学检查 化学和免疫学检查化学和免疫学检查 细胞计数和分类细胞计数和分类 标本采集后标本采集后置于无菌容器中立即送检，置于无菌容器中立即送检，不能保存于冰箱中。不能保存于冰箱中。43 实验室检查实验室检查 脑脊液离心沉淀，取其沉淀物接种于巧克力琼脑脊液离心沉淀，取其沉淀物接种于巧克力琼脂平板、血琼脂平板和厌氧琼脂平板，分别置脂平板、血琼脂平板和厌氧琼

25、脂平板，分别置需氧和厌氧环境中培养，对疑有真菌和结核分需氧和厌氧环境中培养，对疑有真菌和结核分枝杆菌感染的还应分别接种于相应专用培养基枝杆菌感染的还应分别接种于相应专用培养基上。孵育后根据菌落性状、生化反应作细菌学上。孵育后根据菌落性状、生化反应作细菌学鉴定。在细菌培养同时，取其沉淀物作涂片、鉴定。在细菌培养同时，取其沉淀物作涂片、染色、镜检，以早期诊断感染的病原。染色、镜检，以早期诊断感染的病原。44 新生隐球菌（负染色法检查是否有宽厚新生隐球菌（负染色法检查是否有宽厚荚膜的酵母菌作出确诊，非致病菌无荚荚膜的酵母菌作出确诊，非致病菌无荚膜）膜）45Cryptococcus Cryptococ

26、cus neoformansneoformans新生隐球菌新生隐球菌PASPAS染色染色46结果报告结果报告 培养培养4848小时，仍无菌生长者小时，仍无菌生长者报告报告“培养培养2 2天无细菌生长天无细菌生长”。查见细菌。查见细菌则报告菌名和药敏结果。则报告菌名和药敏结果。47呼吸系统感染的细菌学检查呼吸系统感染的细菌学检查 上呼吸道：从鼻部到喉部，包括口咽和鼻咽，以及相连的上呼吸道：从鼻部到喉部，包括口咽和鼻咽，以及相连的腔、窦和中耳。腔、窦和中耳。 咽炎、鼻咽炎、中耳炎、窦炎、会厌炎咽炎、鼻咽炎、中耳炎、窦炎、会厌炎 正常菌群：正常菌群： 绿色链球菌和肺炎链球菌绿色链球菌和肺炎链球菌 非

27、致病性奈瑟氏菌种非致病性奈瑟氏菌种 卡他布兰汉氏菌卡他布兰汉氏菌 金葡、表葡金葡、表葡 类白喉菌类白喉菌 嗜血杆菌种嗜血杆菌种 酵母菌（念珠菌种），数量有限酵母菌（念珠菌种），数量有限 各种严格的厌氧性阳性球菌和革兰氏阴性杆菌各种严格的厌氧性阳性球菌和革兰氏阴性杆菌 48 下呼吸道：包括气管、支气管和肺下呼吸道：包括气管、支气管和肺 气管炎、支气管炎、肺脓肿、肺炎气管炎、支气管炎、肺脓肿、肺炎49 正常人下呼吸道基本无菌，当机体全身正常人下呼吸道基本无菌，当机体全身或局部抵抗力减低时，上呼吸道的正常或局部抵抗力减低时，上呼吸道的正常菌群可侵入下呼吸道，也可因直接吸入菌群可侵入下呼吸道，也可因直

28、接吸入病原微生物或通过淋巴病原微生物或通过淋巴- -血循环导致感染血循环导致感染。下呼吸道标本主要为痰液和支气管分。下呼吸道标本主要为痰液和支气管分泌物，排出的痰液经过咽喉及口腔后，泌物，排出的痰液经过咽喉及口腔后，常混有上呼吸道的常居菌。常混有上呼吸道的常居菌。上呼吸道存上呼吸道存在正常菌群，在采集标本与结果分析时在正常菌群，在采集标本与结果分析时应予考虑应予考虑。 50呼吸道标本中常见分离菌呼吸道标本中常见分离菌革兰阳性菌革兰阳性菌 革兰阴性菌革兰阴性菌 草绿色链球菌、肺炎链球草绿色链球菌、肺炎链球菌、菌、 化脓性链球菌化脓性链球菌 表皮葡萄球菌、金黄色葡表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、其他

29、葡萄球菌萄球菌、其他葡萄球菌 真杆菌、丙酸杆菌、乳酸真杆菌、丙酸杆菌、乳酸杆菌杆菌 放线菌、奴卡菌、结核分放线菌、奴卡菌、结核分枝杆菌枝杆菌 白喉棒状杆菌、假丝酵母白喉棒状杆菌、假丝酵母菌菌 脑膜炎奈瑟菌、其他奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌、其他奈瑟菌 肺炎克雷伯菌及其他克雷伯菌肺炎克雷伯菌及其他克雷伯菌 沙雷菌、变形杆菌沙雷菌、变形杆菌 大肠埃希菌及其他肠杆菌科细大肠埃希菌及其他肠杆菌科细菌菌 百日咳鲍特菌、不动杆菌百日咳鲍特菌、不动杆菌 铜绿假单胞菌及其他假单胞菌铜绿假单胞菌及其他假单胞菌属细菌、嗜肺军团菌、流感嗜属细菌、嗜肺军团菌、流感嗜血杆菌、副流杆嗜血杆菌血杆菌、副流杆嗜血杆菌51上呼吸道感染上

30、呼吸道感染 细菌性咽炎和扁桃体炎细菌性咽炎和扁桃体炎化脓性链球菌化脓性链球菌 猩红热、皮肤红疹猩红热、皮肤红疹 风湿热、急性肾小球肾炎风湿热、急性肾小球肾炎 百日咳百日咳百日咳鲍特菌百日咳鲍特菌 白喉白喉白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌 鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、急性肾小球肾炎病人的临床诊断；还可检出化急性肾小球肾炎病人的临床诊断；还可检出化脓链球菌、奋森螺旋体、脑膜炎奈瑟菌、麻风脓链球菌、奋森螺旋体、脑膜炎奈瑟菌、麻风杆菌等以协助诊断；对白喉、百日咳或口腔念杆菌等以协助诊断；对白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的诊断有意义，应结合临床。珠菌感染的诊断有

31、意义，应结合临床。 52 上呼吸道标本的采集和运送：上呼吸道标本的采集和运送：病人朝亮光处坐立，用压舌板压下舌头，病人朝亮光处坐立，用压舌板压下舌头，无菌棉拭子擦拭扁桃体、咽喉壁及感染区无菌棉拭子擦拭扁桃体、咽喉壁及感染区域。不要接触舌或颊表面，最好同一处用域。不要接触舌或颊表面，最好同一处用两个拭子擦拭。两个拭子擦拭。 53下呼吸道感染下呼吸道感染1.1.咳嗽咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常见的症状咳嗽咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常见的症状，咳嗽的性质与痰的性状如脓或铁锈样痰具有，咳嗽的性质与痰的性状如脓或铁锈样痰具有鉴别诊断意义。鉴别诊断意义。2.2.咯血喉以下的呼吸道出血为咯血，包括泡沫咯血喉以下

32、的呼吸道出血为咯血，包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等。血痰、鲜血和痰中带血等。3.3.呼吸困难呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。呼吸困难呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。4.4.发热伴白细胞增高尤其是中性粒细胞或发热伴白细胞增高尤其是中性粒细胞或CRPCRP明明显增高。显增高。5.5.胸部影像学检查提示胸部影像学检查提示 有感染可能。有感染可能。541.1.自然咳痰法以自然咳痰法以晨痰晨痰为佳，采集标本前应用清为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或用牙刷清洁口腔和牙齿，有水、冷开水漱口或用牙刷清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。尽可能在用抗菌药物之前假牙者应取下假牙。尽可能在用抗菌药物之前采集标本。用力咳出

33、呼吸道深部的痰，痰液直采集标本。用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应广口带盖的容器中，标本量应1ml1ml。咳痰困。咳痰困难者可用雾化吸入加温至难者可用雾化吸入加温至4545C C的的100g/L 100g/L NaClNaCl水溶液，使痰液易于排出。对难于自然咳痰患水溶液，使痰液易于排出。对难于自然咳痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。标本者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存2h2h。下呼吸道标本的采集和运

34、送：下呼吸道标本的采集和运送：55 2.2.支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法，均由临床医生按相应操作支气管肺泡灌洗法，均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。咽喉部正常菌群的污染。 3.3.小儿取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子小儿取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时，可喷出肺伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿

35、还可用部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。 对可疑烈性呼吸道传染病（如对可疑烈性呼吸道传染病（如SARSSARS、肺、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者采集检验标本炭疽、肺鼠疫等）的患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。时必须注意生物安全防护。5657分类分类 细胞数低倍镜细胞数低倍镜 结果判断结果判断 白细胞白细胞 鳞状上皮细胞鳞状上皮细胞 A A25 25 10 25 25 1025 1025 尚合格可用于尚合格可用于细菌培养细菌培养 C C10 25 25 不合格，重送不合格，重送标本标本 下呼吸道细菌学检验标本涂片下呼吸道细菌

36、学检验标本涂片显微镜白下细胞和鳞状上皮细胞计数判断标准显微镜白下细胞和鳞状上皮细胞计数判断标准58 实验室检查：采集痰或鼻咽拭子要来自于呼吸道实验室检查：采集痰或鼻咽拭子要来自于呼吸道合格的标本，以提高检出率和阳性的正确率。鼻合格的标本，以提高检出率和阳性的正确率。鼻咽拭子的细菌学检查应紧密结合临床。咽拭子的细菌学检查应紧密结合临床。 细菌学镜检的描述性报告：如镜检见到排列成葡细菌学镜检的描述性报告：如镜检见到排列成葡萄状的革兰阳性球菌，可报告萄状的革兰阳性球菌，可报告“找到革兰阳性球找到革兰阳性球菌，形似葡萄球菌菌，形似葡萄球菌”；如见到平端相对矛头状端；如见到平端相对矛头状端相背，成双排列

37、，具有明显荚膜的革兰阳性球菌相背，成双排列，具有明显荚膜的革兰阳性球菌时，可报告时，可报告“找到革兰阳性球菌，形似肺炎链球找到革兰阳性球菌，形似肺炎链球菌菌”；如见到不易识别的细菌时则报告；如见到不易识别的细菌时则报告“找到革找到革兰性形细菌兰性形细菌”。59 挑取可疑菌落进行细菌鉴定和药敏试验，痰及挑取可疑菌落进行细菌鉴定和药敏试验，痰及下呼吸道分泌物标本易受到上呼吸道正常菌群下呼吸道分泌物标本易受到上呼吸道正常菌群的污染，临床微生物实验室通常可从送检的呼的污染，临床微生物实验室通常可从送检的呼吸道标本中分离出多种细菌，但分离的细菌是吸道标本中分离出多种细菌，但分离的细菌是否能真正代表下呼吸

38、道感染的病原菌，这对临否能真正代表下呼吸道感染的病原菌，这对临床诊断和治疗感染性疾病至关重要。实验室人床诊断和治疗感染性疾病至关重要。实验室人员在检验过程中应重视判断所分离的细菌是污员在检验过程中应重视判断所分离的细菌是污染的上呼吸道正常菌群还是引起下呼吸道感染染的上呼吸道正常菌群还是引起下呼吸道感染的病原菌。在实际工作中，有时也由于细菌生的病原菌。在实际工作中，有时也由于细菌生长速度不一，如肺炎链球菌可能被生长速度快长速度不一，如肺炎链球菌可能被生长速度快的细菌（包括正常菌群）菌落掩盖，不仔细观的细菌（包括正常菌群）菌落掩盖，不仔细观察就会漏检。察就会漏检。60 当在同一培养基上分离出多种病

39、原菌时，当在同一培养基上分离出多种病原菌时，应主动与临床医生联系，结合患者的临床应主动与临床医生联系，结合患者的临床症状、痰涂片染色镜检及近期细菌培养结症状、痰涂片染色镜检及近期细菌培养结果（如近期同一病人多次分离培养出同一果（如近期同一病人多次分离培养出同一种菌）等综合判断所分离的多种细菌中哪种菌）等综合判断所分离的多种细菌中哪一种菌可能为优势病原菌。一种菌可能为优势病原菌。61 结果报告：结果报告： 痰标本培养痰标本培养4848小时后仅有草绿色链球菌生小时后仅有草绿色链球菌生长而无致病菌生长，报告长而无致病菌生长，报告“正常菌群正常菌群”。 查出致病菌，最终检验结果应报告标本肉查出致病菌，

40、最终检验结果应报告标本肉眼观察的结果、涂片革兰染色白细胞、鳞眼观察的结果、涂片革兰染色白细胞、鳞状上皮细胞与细菌学镜检的描述性报告、状上皮细胞与细菌学镜检的描述性报告、优势菌鉴定的规范细菌名称和药敏试验结优势菌鉴定的规范细菌名称和药敏试验结果及评述性意见。果及评述性意见。62结核分枝杆菌的检验结核分枝杆菌的检验 结核标本的采集与处理：结核标本的采集与处理： 合格的痰标本：连续合格的痰标本：连续3次送检次送检 其他类型标本：尿液、脑脊液、胸水等其他类型标本：尿液、脑脊液、胸水等 标本的后期处理：标本的后期处理： 1 1：1 1 4% 4% NaOHNaOH 消化消化1515分钟分钟 消除杂菌消除

41、杂菌 液化作用液化作用 促进粘蛋白和细胞中结核杆菌释放促进粘蛋白和细胞中结核杆菌释放 CSFCSF与尿液要离心与尿液要离心 63 涂片：涂片：1 12cm2cm2 2 抗酸性与抗酸染色抗酸性与抗酸染色 涂片的结果要结合培养结果，有助于早期诊断、早期涂片的结果要结合培养结果，有助于早期诊断、早期隔离传染源和指导临床用药隔离传染源和指导临床用药 培养：酸性罗琴培养基培养：酸性罗琴培养基 温度：温度：3737 气体：专性需氧、气体：专性需氧、5 5COCO2 2 时间：时间：3535天，生长缓慢天，生长缓慢 菌落：坚硬、粗糙、淡黄色菌落菌落：坚硬、粗糙、淡黄色菌落 观察与结果报告：每周观察一次观察与

42、结果报告：每周观察一次 报告：找到抗酸杆菌报告：找到抗酸杆菌 未找到抗酸杆菌未找到抗酸杆菌64抗酸染色抗酸染色65泌尿生殖道感染的细菌学检查泌尿生殖道感染的细菌学检查 尿液标本：尿液标本： 尿路感染是人类最常见的感染之一尿路感染是人类最常见的感染之一 尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖而引起尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖而引起的尿路炎症。诊断尿路感染最常用的方法是进的尿路炎症。诊断尿路感染最常用的方法是进行尿液标本的细菌学检查。行尿液标本的细菌学检查。 根据感染可分为上尿路感染（如肾孟肾炎）及根据感染可分为上尿路感染（如肾孟肾炎）及下尿路感染，男性还可出现前列腺感染，不同下尿路感染，男性还

43、可出现前列腺感染，不同部位同时感染也很常见。部位同时感染也很常见。66 中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要价值。细菌培养必须结合菌落计数有重要价值。细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。辨别是否为病原菌。 有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数10105 5/ml/ml（球菌（球菌10104 4/ml/ml ），提示感染（膀），提示感染（膀胱炎，肾盂肾炎、肾或膀胱结核等）。胱炎，肾盂肾炎、肾或膀胱结核等）。 常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、链球菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。、链

44、球菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。67一、尿液标本采集和运送一、尿液标本采集和运送 1.1. 采集指征：采集指征： （1 1）有典型的尿路感染症状；）有典型的尿路感染症状；(2(2）肉眼脓尿）肉眼脓尿或血尿；（或血尿；（3 3）尿常规检查表现为白细胞或亚）尿常规检查表现为白细胞或亚硝酸盐阳性；硝酸盐阳性；(4)(4)不明原因的发热，无其他局不明原因的发热，无其他局部症状；（部症状；（5 5）留置导尿管的患者出现发热；）留置导尿管的患者出现发热；（6 6）膀胱排空功能受损；）膀胱排空功能受损；(7(7）泌尿系统疾病）泌尿系统疾病手术前。手术前。682.2. 采集方法：标本采集应力争在未使用抗生素采集

45、方法：标本采集应力争在未使用抗生素之前注意避免消毒剂污染标本，方法有：之前注意避免消毒剂污染标本，方法有： (1 (1）清洁中段尿：）清洁中段尿：最好留取早晨清洁中段尿标最好留取早晨清洁中段尿标本，嘱咐患者睡前少饮水，本，嘱咐患者睡前少饮水，将前段尿排去，中将前段尿排去，中段尿约段尿约10-20ml10-20ml直接排入专用的无菌容器中，直接排入专用的无菌容器中，立即送检，立即送检，2h2h内接种。该方法简单、易行，是内接种。该方法简单、易行，是最常用的尿培养标本收集方法，但很容易受到最常用的尿培养标本收集方法，但很容易受到会阴部细菌污染，应由医护人员采集或在医护会阴部细菌污染，应由医护人员采

46、集或在医护人员指导下由患者正确留取。人员指导下由患者正确留取。 69 （2 2）耻骨上膀胱穿刺：使用无菌）耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的内细菌感染的“金标准金标准”方法，方法，但有一定的痛苦患者难以接受但有一定的痛苦患者难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。本困难的婴儿尿标本的采集。 (3 (3）直接导尿：按常规方法对会）直接导尿：按常规方法对会阴局部进行消毒后，用导尿管直阴局部进行消毒后，用导尿管直接经尿道插人膀胱，获取膀胱

47、尿接经尿道插人膀胱，获取膀胱尿液，可减少尿液标本污染，准确液，可减少尿液标本污染，准确地反映膀胱感染情况。但有可能地反映膀胱感染情况。但有可能将下尿道细菌引入膀胱，导致继将下尿道细菌引入膀胱，导致继发感染，一般不提倡使用。发感染，一般不提倡使用。 703. 3. 采集容器：（采集容器：（l l）应由不与尿液成分发生）应由不与尿液成分发生反应的惰性材料制成；反应的惰性材料制成；(2(2）洁净、无菌、加盖）洁净、无菌、加盖、封闭、防渗漏；、封闭、防渗漏；(3(3）不含防腐剂和抑菌剂；）不含防腐剂和抑菌剂；(4(4）广口、具有较宽的底部、容积应）广口、具有较宽的底部、容积应50ml50ml、盒盖易于

48、开启。盒盖易于开启。4. 4. 标本运送：标本采集后应及时送检、及时标本运送：标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存时间不得超过接种，室温下保存时间不得超过2h2h（夏季保存（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存）时间应适当缩短或冷藏保存）,4 ,4 冷藏保存冷藏保存时间不得超过时间不得超过8h8h，但应注意冷藏保存的标本不，但应注意冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养。能用于淋病奈瑟菌培养。 71二、实验室检查二、实验室检查 1 1涂片检查：尿路感染标本可直接做细涂片检查：尿路感染标本可直接做细菌培养，无需常规进行涂片检查。对于菌培养，无需常规进行涂片检查。对于临床怀疑临床怀疑淋病奈瑟菌、淋

49、病奈瑟菌、假丝酵母菌或结假丝酵母菌或结核分枝杆菌感染的标本可用无菌吸管吸核分枝杆菌感染的标本可用无菌吸管吸取尿液取尿液5-10ml5-10ml置无菌试管中，置无菌试管中，3000-3000-4000r/min4000r/min离心离心30min30min，倾去上清液，取，倾去上清液，取沉渣涂片，行革兰染色或抗酸染色后镜沉渣涂片，行革兰染色或抗酸染色后镜检。检。722 2细菌培养：细菌培养： (l (l）普通培养：）普通培养：将收集标本的容器轻轻旋转混匀将收集标本的容器轻轻旋转混匀，用定量接种环分别取尿液，用定量接种环分别取尿液lullul涂抹接种血平板涂抹接种血平板和麦康凯平板（或中国蓝平板）

50、，和麦康凯平板（或中国蓝平板），35-3735-37培养培养18-24h18-24h，观察结果。，观察结果。对导尿、耻骨上膀胱穿刺和对导尿、耻骨上膀胱穿刺和已使用抗生素治疗的病人标本应增加一个已使用抗生素治疗的病人标本应增加一个1010ll接种量。接种量。 73（2 2）特殊培养：）特殊培养： 检查淋病奈瑟菌、结核检查淋病奈瑟菌、结核分枝杆菌感染时无需做定量培养，可将分枝杆菌感染时无需做定量培养，可将标本离心后取尿沉渣进行培养，以提高标本离心后取尿沉渣进行培养，以提高阳性率。阳性率。对怀疑有苛氧菌感染者应采用对怀疑有苛氧菌感染者应采用耻骨上膀胱穿刺法或导尿法采集样本，耻骨上膀胱穿刺法或导尿法采