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1、实验二二 培养基的制培养基的制备一、目的要求一、目的要求1.掌握培养基制掌握培养基制备的原的原则；2.掌握培养基的制掌握培养基的制备方法。方法。二、二、实验原理原理1、培养基的概念？、培养基的概念？培养基是指由人工方法配合而成的培养基是指由人工方法配合而成的培养基是指由人工方法配合而成的培养基是指由人工方法配合而成的营营养基养基养基养基质质，专专供微生物培养、分离、供微生物培养、分离、供微生物培养、分离、供微生物培养、分离、鉴别鉴别、研究和保存菌种用的、研究和保存菌种用的、研究和保存菌种用的、研究和保存菌种用的混合混合混合混合营营养物制品。养物制品。养物制品。养物制品。2、必、必须具具备五个条
2、件五个条件:含有含有含有含有细细菌生菌生菌生菌生长长所需的物所需的物所需的物所需的物质质：如：水分、养分（氮源、碳源、如：水分、养分（氮源、碳源、如：水分、养分（氮源、碳源、如：水分、养分（氮源、碳源、矿矿物物物物质质）等）等）等）等适宜的酸碱性：适宜的酸碱性：适宜的酸碱性：适宜的酸碱性：多数多数多数多数为为，有的，有的，有的，有的为为pH5.6-6.8 pH5.6-6.8。不含抑制不含抑制不含抑制不含抑制细细菌生菌生菌生菌生长长的物的物的物的物质质；均均均均质质透明透明透明透明：便于便于便于便于观观察察察察细细菌生菌生菌生菌生长长性状和引起培养基的性状和引起培养基的性状和引起培养基的性状和引
3、起培养基的变变化，化，化，化，严严格格格格灭灭菌，保菌，保菌，保菌，保证证无菌。无菌。无菌。无菌。配好配好立即立即高高压灭菌，菌，并保并保证新新鲜。3、培养基的分、培养基的分类根据根据根据根据对对培养基培养基培养基培养基组组成物成物成物成物质质的的的的化学成分化学成分化学成分化学成分是否完全了解来区分：是否完全了解来区分：是否完全了解来区分：是否完全了解来区分：天然培养基天然培养基天然培养基天然培养基 合成培养基合成培养基合成培养基合成培养基 半合成培养基。半合成培养基。半合成培养基。半合成培养基。根据培养基的根据培养基的根据培养基的根据培养基的物理状物理状物理状物理状态态来区分：来区分：来区
4、分：来区分：固体培养基固体培养基固体培养基固体培养基 液体培养基液体培养基液体培养基液体培养基 半固体培养基半固体培养基半固体培养基半固体培养基根据培养基的根据培养基的根据培养基的根据培养基的用途用途用途用途来区分：来区分：来区分：来区分：增菌培养基增菌培养基增菌培养基增菌培养基 选择选择培养基培养基培养基培养基 鉴别鉴别培养基培养基培养基培养基中国农业出版社中国农业出版社陈天寿主编陈天寿主编一些物质在培养基中的应用原理一些物质在培养基中的应用原理1.细菌生菌生长的基的基础营养物养物质：N源：蛋白源：蛋白胨（peptone）、酵母浸出物）、酵母浸出物 牛肉浸膏牛肉浸膏 C源源 无机无机盐类 水
5、水 一些物质在培养基中的应用原理一些物质在培养基中的应用原理2.具有抑菌作用的物具有抑菌作用的物质 抑制抑制G-菌的：菌的：葡萄糖、葡萄糖、亚硫酸硫酸铋和煌和煌绿 抑制抑制G+菌的：菌的：结晶紫、胆晶紫、胆盐 抑制抑制肠道非致病菌的：道非致病菌的：胆胆盐 一些物质在培养基中的应用原理一些物质在培养基中的应用原理3.具有生化反具有生化反应作用的作用的硫硫羟代乙酸代乙酸钠（硫乙醇酸（硫乙醇酸钠）、半胱氨酸、）、半胱氨酸、葡萄糖、肝葡萄糖、肝块、肉渣、肉渣、还原原铁等等还原原剂生化反生化反应 一些物质在培养基中的应用原理一些物质在培养基中的应用原理4.具有具有缓冲作用的冲作用的 磷酸磷酸盐 碳酸碳酸
6、盐 一些物质在培养基中的应用原理一些物质在培养基中的应用原理5.具有具有PH指示作用的指示作用的中性红指示液中性红指示液 变色范围（红变色范围（红黄）黄）孔雀绿指示液孔雀绿指示液 变色范围（黄变色范围（黄绿）；绿）；13.5(绿绿无色无色)石蕊指示液石蕊指示液 变色范围（红变色范围（红蓝）蓝）甲基红指示液甲基红指示液 变色范围（红变色范围（红黄）黄）刚果红指示液刚果红指示液 变色范围（蓝变色范围（蓝红）红）亮绿指示液亮绿指示液 变色范围（黄变色范围（黄绿）绿）结晶紫指示液结晶紫指示液 pH值（黄）（绿），值（黄）（绿），pH值（绿）（蓝），值（绿）（蓝），pH值（蓝）值（蓝）（紫）。（紫）。溴
7、甲酚紫指示液变色范围（黄溴甲酚紫指示液变色范围（黄紫）紫）溴麝香草酚蓝指示液溴麝香草酚蓝指示液 变色范围（黄变色范围（黄蓝）蓝）一些物质在培养基中的应用原理一些物质在培养基中的应用原理6.其它其它 硫酸硫酸亚铁 色氨酸色氨酸 脲酶培养特性培养特性（一）体外培养的要求（一）体外培养的要求营养、温度、营养、温度、PHPH、气体、培养时间、气体、培养时间（二）培养性状（二）培养性状 1.液体培养基液体培养基 需氧菌：菌膜需氧菌：菌膜 兼性厌氧菌：均匀浑浊兼性厌氧菌：均匀浑浊 厌氧菌：沉淀厌氧菌：沉淀 2.固体培养基固体培养基 菌落特点菌落特点:大小、颜色、边缘、湿润程度大小、颜色、边缘、湿润程度 3
8、.色素色素 脂溶性：菌体有颜色（如金黄色葡萄球菌）脂溶性：菌体有颜色（如金黄色葡萄球菌）水溶性：菌体和培养基都有颜色（如绿脓杆菌）水溶性：菌体和培养基都有颜色（如绿脓杆菌）4、培养基制、培养基制备的基本方法的基本方法培养基配方的培养基配方的培养基配方的培养基配方的选选定定定定培养基的制培养基的制培养基的制培养基的制备记录备记录培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基培养基培养基培养基pHpH的的的的调调正正正正培养基的培养基的培养基的培养基的过滤过滤培养基的分装培养基的
9、分装培养基的分装培养基的分装培养基的培养基的培养基的培养基的灭灭菌菌菌菌培养基的培养基的培养基的培养基的质质量量量量测试测试培养基的保存培养基的保存培养基的保存培养基的保存同一种培养基的配方在不同同一种培养基的配方在不同同一种培养基的配方在不同同一种培养基的配方在不同文献中常存在某些差文献中常存在某些差文献中常存在某些差文献中常存在某些差别别。因此因此因此因此应应尽量收集有关尽量收集有关尽量收集有关尽量收集有关资资料，料，料，料，加以比加以比加以比加以比较较核核核核对对，再依据自己的，再依据自己的，再依据自己的，再依据自己的使用目的，加以使用目的，加以使用目的，加以使用目的，加以选选用，用，用
10、，用，记录记录其其其其来源。来源。来源。来源。4、培养基制、培养基制备的基本方法的基本方法培养基配方的培养基配方的培养基配方的培养基配方的选选定定定定培养基的制培养基的制培养基的制培养基的制备记录备记录培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基培养基培养基培养基pHpH的的的的调调正正正正培养基的培养基的培养基的培养基的过滤过滤培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的培养基的培养基的培养基的灭灭菌菌菌菌培养基的培养基的培养基的培养基的质质量量量量测试测试培
11、养基的保存培养基的保存培养基的保存培养基的保存每次制每次制每次制每次制备备培养基均培养基均培养基均培养基均应应有有有有记录记录:包括名称、配方及其来源、包括名称、配方及其来源、包括名称、配方及其来源、包括名称、配方及其来源、pHpH值值、消毒的温度和、消毒的温度和、消毒的温度和、消毒的温度和时间时间、制、制、制、制备备的日期和制的日期和制的日期和制的日期和制备备者等，以防者等，以防者等，以防者等，以防发发生生生生混乱。混乱。混乱。混乱。4、培养基制、培养基制备的基本方法的基本方法培养基配方的培养基配方的培养基配方的培养基配方的选选定定定定培养基的制培养基的制培养基的制培养基的制备记录备记录培养
12、基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基培养基培养基培养基pHpH的的的的调调正正正正培养基的培养基的培养基的培养基的过滤过滤培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的培养基的培养基的培养基的灭灭菌菌菌菌培养基的培养基的培养基的培养基的质质量量量量测试测试培养基的保存培养基的保存培养基的保存培养基的保存必必必必须须精确称取，并注意防止精确称取，并注意防止精确称取，并注意防止精确称取，并注意防止错错乱。乱。乱。乱。可将配方置于傍可将配方置于傍可将配方置于傍可将配
13、方置于傍侧侧，每称好，每称好，每称好，每称好一种成分即在配方上做出一种成分即在配方上做出一种成分即在配方上做出一种成分即在配方上做出记记号号号号,最后最后最后最后还应进还应进行一次行一次行一次行一次检查检查。4、培养基制、培养基制备的基本方法的基本方法培养基配方的培养基配方的培养基配方的培养基配方的选选定定定定培养基的制培养基的制培养基的制培养基的制备记录备记录培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基培养基培养基培养基pHpH的的的的调调正正正正培养基的培养基的培养基的
14、培养基的过滤过滤培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的培养基的培养基的培养基的灭灭菌菌菌菌培养基的培养基的培养基的培养基的质质量量量量测试测试培养基的保存培养基的保存培养基的保存培养基的保存可先用温水加可先用温水加可先用温水加可先用温水加热热并随并随并随并随时时搅动搅动、以防焦化。待大部、以防焦化。待大部、以防焦化。待大部、以防焦化。待大部分固体成分溶化后，再用分固体成分溶化后，再用分固体成分溶化后，再用分固体成分溶化后，再用较较小火力使所有成分完全小火力使所有成分完全小火力使所有成分完全小火力使所有成分完全溶化，直至煮沸。溶化，直至煮沸。溶化，直至煮沸。溶化，直至煮沸。在加
15、在加在加在加热热溶化溶化溶化溶化过过程中，因程中，因程中，因程中，因蒸蒸蒸蒸发发而而而而丢丢失的水分，最后失的水分，最后失的水分，最后失的水分，最后必必必必须须加以加以加以加以补补足。足。足。足。4、培养基制、培养基制备的基本方法的基本方法培养基配方的培养基配方的培养基配方的培养基配方的选选定定定定培养基的制培养基的制培养基的制培养基的制备记录备记录培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基培养基培养基培养基pHpH的的的的调调正正正正培养基的培养基的培养基的培养基的过滤
16、过滤培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的培养基的培养基的培养基的灭灭菌菌菌菌培养基的培养基的培养基的培养基的质质量量量量测试测试培养基的保存培养基的保存培养基的保存培养基的保存经经加加加加热热煮沸，培养基各成分煮沸，培养基各成分煮沸，培养基各成分煮沸，培养基各成分完全溶解完全溶解完全溶解完全溶解,待冷却接近室温待冷却接近室温待冷却接近室温待冷却接近室温时时,应进应进行行行行pHpH的的的的调调正。正。正。正。4、培养基制、培养基制备的基本方法的基本方法培养基配方的培养基配方的培养基配方的培养基配方的选选定定定定培养基的制培养基的制培养基的制培养基的制备记录备记录培养基成分的
17、称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基培养基培养基培养基pHpH的的的的调调正正正正培养基的培养基的培养基的培养基的过滤过滤培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的培养基的培养基的培养基的灭灭菌菌菌菌培养基的培养基的培养基的培养基的质质量量量量测试测试培养基的保存培养基的保存培养基的保存培养基的保存培养基必培养基必培养基必培养基必须须均均均均质质透明。透明。透明。透明。通常采用通常采用通常采用通常采用过滤过滤以达到此以达到此以达到此以达到此项项要要要要求。一般液体
18、培养基可用求。一般液体培养基可用求。一般液体培养基可用求。一般液体培养基可用滤纸滤纸过滤过滤法。法。法。法。4、培养基制、培养基制备的基本方法的基本方法培养基配方的培养基配方的培养基配方的培养基配方的选选定定定定培养基的制培养基的制培养基的制培养基的制备记录备记录培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基培养基培养基培养基pHpH的的的的调调正正正正培养基的培养基的培养基的培养基的过滤过滤培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的培养基的培养基的培养基的灭灭
19、菌菌菌菌培养基的培养基的培养基的培养基的质质量量量量测试测试培养基的保存培养基的保存培养基的保存培养基的保存应应按使用的目的和要求，分按使用的目的和要求，分按使用的目的和要求，分按使用的目的和要求，分装于适当容器内。装于适当容器内。装于适当容器内。装于适当容器内。分装量一般超分装量一般超分装量一般超分装量一般超过过容器装盛量容器装盛量容器装盛量容器装盛量的的的的2/32/3。4、培养基制、培养基制备的基本方法的基本方法培养基配方的培养基配方的培养基配方的培养基配方的选选定定定定培养基的制培养基的制培养基的制培养基的制备记录备记录培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培
20、养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基培养基培养基培养基pHpH的的的的调调正正正正培养基的培养基的培养基的培养基的过滤过滤培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的培养基的培养基的培养基的灭灭菌菌菌菌培养基的培养基的培养基的培养基的质质量量量量测试测试培养基的保存培养基的保存培养基的保存培养基的保存一般采用高一般采用高一般采用高一般采用高压压蒸汽蒸汽蒸汽蒸汽灭灭菌方法菌方法菌方法菌方法（121121，15min15min）。）。）。）。某些畏某些畏某些畏某些畏热热成分，如糖成分，如糖成分，如糖成分，如糖类类、血、血、
21、血、血清等，一般以清等，一般以清等，一般以清等，一般以过滤过滤方法除菌，方法除菌，方法除菌，方法除菌，以后再用无菌操作技以后再用无菌操作技以后再用无菌操作技以后再用无菌操作技术术、定量、定量、定量、定量加于培养基。加于培养基。加于培养基。加于培养基。4、培养基制、培养基制备的基本方法的基本方法培养基配方的培养基配方的培养基配方的培养基配方的选选定定定定培养基的制培养基的制培养基的制培养基的制备记录备记录培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基培养基培养基培养基pHpH的
22、的的的调调正正正正培养基的培养基的培养基的培养基的过滤过滤培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的培养基的培养基的培养基的灭灭菌菌菌菌培养基的培养基的培养基的培养基的质质量量量量测试测试培养基的保存培养基的保存培养基的保存培养基的保存灭灭菌以后，菌以后，菌以后，菌以后，应应仔仔仔仔细检查细检查，如，如，如，如发现发现破裂、水分浸入、色破裂、水分浸入、色破裂、水分浸入、色破裂、水分浸入、色泽泽异异异异常等、均常等、均常等、均常等、均应应挑出弃去。挑出弃去。挑出弃去。挑出弃去。将全部培养基放入将全部培养基放入将全部培养基放入将全部培养基放入37 37 恒恒恒恒温箱培养温箱培养温箱培
23、养温箱培养过过夜，如夜，如夜，如夜，如发现发现有有有有细细菌菌菌菌生生生生长长，即弃去。，即弃去。，即弃去。，即弃去。用已知菌株接种部分培养基用已知菌株接种部分培养基用已知菌株接种部分培养基用已知菌株接种部分培养基,培养培养培养培养2448h2448h。如无菌生。如无菌生。如无菌生。如无菌生长长或生或生或生或生长长不良，不良，不良，不良，应应追追追追查查原因并重复接原因并重复接原因并重复接原因并重复接种一次，如种一次，如种一次，如种一次，如结结果仍同前，果仍同前，果仍同前，果仍同前，则该则该批培养基即批培养基即批培养基即批培养基即应应弃去。弃去。弃去。弃去。4、培养基制、培养基制备的基本方法的
24、基本方法培养基配方的培养基配方的培养基配方的培养基配方的选选定定定定培养基的制培养基的制培养基的制培养基的制备记录备记录培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基成分的称取培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基培养基培养基培养基pHpH的的的的调调正正正正培养基的培养基的培养基的培养基的过滤过滤培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的培养基的培养基的培养基的灭灭菌菌菌菌培养基的培养基的培养基的培养基的质质量量量量测试测试培养基的保存培养基的保存培养基的保存培养基的保存应应存放于冷暗存放于冷暗存放于冷暗存
25、放于冷暗处处，最好放于，最好放于，最好放于，最好放于普通冰箱内；普通冰箱内；普通冰箱内；普通冰箱内；平板培养基不宜超平板培养基不宜超平板培养基不宜超平板培养基不宜超过过3 3天；天；天；天；必必必必须须附有明附有明附有明附有明显标签显标签。三、三、实验材料材料1.1.量杯（量杯（量杯（量杯（1000mL1000mL和和和和500mL500mL各各各各1 1个）、玻璃棒、漏斗、三角个）、玻璃棒、漏斗、三角个）、玻璃棒、漏斗、三角个）、玻璃棒、漏斗、三角瓶、瓶、瓶、瓶、试试管、玻璃瓶（管、玻璃瓶（管、玻璃瓶（管、玻璃瓶（500mL500mL）等；）等；）等；）等；2.2.pHpH试纸试纸、纱纱布、
26、脱脂棉、布、脱脂棉、布、脱脂棉、布、脱脂棉、滤纸滤纸、包装、包装、包装、包装纸纸、扎、扎、扎、扎线线等；等；等；等；3.3.牛肉膏、蛋白牛肉膏、蛋白牛肉膏、蛋白牛肉膏、蛋白胨胨、氯氯化化化化钠钠、磷酸、磷酸、磷酸、磷酸氢氢二二二二钾钾、琼琼脂、葡萄糖、脂、葡萄糖、脂、葡萄糖、脂、葡萄糖、牛肉渣、蜡牛肉渣、蜡牛肉渣、蜡牛肉渣、蜡块块、蒸、蒸、蒸、蒸馏馏水、水、水、水、l mo1/L NaOHl mo1/L NaOH溶液和溶液和溶液和溶液和1 mo1/L 1 mo1/L HClHCl溶液等。溶液等。溶液等。溶液等。四、四、实验内容内容1.普通肉普通肉汤的制的制备：（1 1）常用配方）常用配方）常用
27、配方）常用配方:牛肉浸膏牛肉浸膏牛肉浸膏牛肉浸膏 3-5g3-5g蛋白蛋白蛋白蛋白胨胨 10g10g氯氯化化化化钠钠 5g5g磷酸磷酸磷酸磷酸氢氢二二二二钾钾 蒸蒸蒸蒸馏馏水水水水1000m1000mL L四、四、实验内容内容1.普通肉普通肉汤的制的制备：（2 2）配制方法）配制方法）配制方法）配制方法:取水取水取水取水600700mL600700mL，加，加，加，加热热；按照配方称取各物品加入水中，按照配方称取各物品加入水中，按照配方称取各物品加入水中，按照配方称取各物品加入水中，边边加加加加热边热边搅搅拌，快沸拌，快沸拌，快沸拌，快沸时时注意不要溢出，注意不要溢出，注意不要溢出，注意不要溢
28、出，沸沸沸沸腾腾后停止后停止后停止后停止加加加加热热；冷却至室温；冷却至室温；冷却至室温；冷却至室温；用用用用pHpH试纸试纸测测定定定定pHpH并并并并调调至至至至7.2-7.7.2-7.6 6。若若若若pHpH，/L HClL HCl调调低低低低;若若若若pHpH ，/L HClL HCl调低调低调低调低;若若若若pHpH，.4 4.调好调好调好调好pHpH值后，值后，值后，值后，各自再各自再各自再各自再补足水量，再测补足水量，再测补足水量，再测补足水量，再测pHpH值。值。值。值。将将将将6 6支做厌氧培养基（共约支做厌氧培养基（共约支做厌氧培养基（共约支做厌氧培养基（共约30ml30m
29、l），），），），200ml200ml装入小盐水瓶；取装入小盐水瓶；取装入小盐水瓶；取装入小盐水瓶；取20ml20ml再配再配再配再配0.4%0.4%琼脂的半固体培养基琼脂的半固体培养基琼脂的半固体培养基琼脂的半固体培养基6 6支；余下支；余下支；余下支；余下500ml500ml加加加加2%2%（10g10g琼脂）继续加琼脂）继续加琼脂）继续加琼脂）继续加热至充分融化，固体培养基中倒热至充分融化，固体培养基中倒热至充分融化，固体培养基中倒热至充分融化，固体培养基中倒6 6支斜面，其余加入盐水瓶。支斜面，其余加入盐水瓶。支斜面，其余加入盐水瓶。支斜面，其余加入盐水瓶。今天今天实验内容内容/每每每每组组：