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1、实验二实验二 培养基的制备和灭菌培养基的制备和灭菌 目的要求目的要求实验原理实验原理实验材料实验材料实验程序实验程序结果与思考题结果与思考题目目 的的 要要 求求了解培养基的配制原理和方法，掌握其了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。配制过程。学习并掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作学习并掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作技术技术 实实 验验 原原 理理由人工方法配制的适合微生物生长繁殖或积累代由人工方法配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质称为谢产物的营养基质称为培养基培养基。主要用于微生物主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏或积累代谢产物的分离、培养、鉴定、菌种保藏或积累代谢产物
2、等方面。等方面。由于不同微生物的生长繁殖需要不同的环境、营由于不同微生物的生长繁殖需要不同的环境、营养和酸碱条件，因此在配制培养基时还应该调节养和酸碱条件，因此在配制培养基时还应该调节pHpH值。值。培养基的种类培养基的种类从培养基的组成成分可分为从培养基的组成成分可分为:1.1.合成培养基：合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而由各种纯化学物质按一定比例配制而成。成。2.2.半合成培养基：半合成培养基：一部分纯化学物质和一部分天然物一部分纯化学物质和一部分天然物质配制而成。质配制而成。3.3.天然培养基：天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。利用天然来源的有机物配制而成。从培养基的
3、物理状态可分为从培养基的物理状态可分为:1.1.液体培养基：液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。不加凝固剂的液体状态培养基。2.2.固体培养基：固体培养基：在液体培养基中加入在液体培养基中加入2%2%左右的凝固剂的左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。固体状态的培养基或农副产品培养基。3.3.半固体培养基：半固体培养基：在液体培养基中加入在液体培养基中加入0.20.5%0.20.5%凝固凝固剂而成的半固体状培养基。剂而成的半固体状培养基。高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可密闭的高压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可密闭的高压蒸汽灭菌锅中进行
4、的，通过加热，产生大量蒸汽使其中压力升高，从而使锅中进行的，通过加热，产生大量蒸汽使其中压力升高，从而使沸点增高，得到高于沸点增高，得到高于100100的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。当蒸汽压达到到灭菌的目的。当蒸汽压达到1.055kg/cm21.055kg/cm2时，锅内温度可达到时，锅内温度可达到121121，一般维持，一般维持20min,20min,即可杀死一切微生物的营养体或芽孢，而即可杀死一切微生物的营养体或芽孢，而达到灭菌目的。达到灭菌目的。实实 验验 材材 料料各种药品：牛肉膏、蛋白胨、琼脂等；各种药品：牛肉膏、蛋白胨、琼脂等；称
5、量工具：托盘天平、量筒、称量纸、角匙；称量工具：托盘天平、量筒、称量纸、角匙；分装工具：铁架台、漏斗、分装工具：铁架台、漏斗、pH试纸；试纸；包扎工具：牛皮纸、扎绳、棉花。包扎工具：牛皮纸、扎绳、棉花。实实 验验 程程 序序（培养基的配制与分装培养基的配制与分装）1配方：配方：NaCL 0.5、蛋白胨、蛋白胨 1、牛肉膏、牛肉膏 0.3，琼脂，琼脂，pH7.4-7.6(使用使用10 NaOH和和 5 HCL调节调节)。2配制：配制：称量及加热溶化称量及加热溶化-加琼脂加琼脂-定容定容-调调pH-分装、加塞、包扎。分装、加塞、包扎。3分装：分装：每组装每组装3个三角瓶，个三角瓶，150ml/瓶，
6、包扎、灭菌。瓶，包扎、灭菌。将剩余的将剩余的250ml分装大试管（装量为试管长度分装大试管（装量为试管长度的的1/5），加棉球，包扎、灭菌。），加棉球，包扎、灭菌。细菌培养基细菌培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）（牛肉膏蛋白胨培养基）:700 ml/:700 ml/组组霉菌培养基霉菌培养基（察氏一号培养基）：（察氏一号培养基）：300ml/组组1配方：配方：K2HPO4 0.1%MgSO4.7H2O 0.05%FeSO4 0.001%（加（加3滴即可）滴即可）KCL 0.05%NaNO3 0.2%葡葡萄糖萄糖 3%琼脂琼脂2%。2配制：配制：称量及溶化称量及溶化-加琼脂加琼脂-定容定容-分装、加塞、
7、包扎分装、加塞、包扎3分装：分装：平均分装在两个三角瓶中，包扎、灭菌。平均分装在两个三角瓶中，包扎、灭菌。实实 验验 程程 序序（准备工作（准备工作）取取6支小试管各加生理盐水支小试管各加生理盐水4.5ml,包扎灭菌。包扎灭菌。取取1只三角瓶加只三角瓶加99ml水及水及1015粒玻粒玻 璃球，包扎灭菌。璃球，包扎灭菌。1.灭菌器内加入一定量水，将包扎好的物品放入其中。灭菌器内加入一定量水，将包扎好的物品放入其中。2.接通电源，进行加热。接通电源，进行加热。3.排除高压锅内的冷空气排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；（排气阀；（或关闭排
8、气阀，待压力上升到或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待时再打开排气阀，待压力回复到压力回复到0时再关闭排气阀。）时再关闭排气阀。）4.当压力达当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为时，此时灭菌器内的温度为1210C，维，维持持30min。（。（对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。）降低压力，延长时间。）5.灭菌时间一到，切断电源，待灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时压力降至零时，才能打开排气阀，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。然后打开灭菌器盖，取出物品
9、。高高 压压 蒸蒸 汽汽 灭灭 菌菌 法法（手提式高压蒸汽灭菌锅）（手提式高压蒸汽灭菌锅）实实 验验 程程 序序（善后工作（善后工作）将将6支三角瓶放回仪器橱中，小试管放到小烧支三角瓶放回仪器橱中，小试管放到小烧杯中，不能放倒。杯中，不能放倒。将灭好菌的试管，摆成斜面，备用。将灭好菌的试管，摆成斜面，备用。1、你所作的培养基是否有异常现象出现？、你所作的培养基是否有异常现象出现？试分析其原因。试分析其原因。2、培养微生物的培养基应具备哪些条件？、培养微生物的培养基应具备哪些条件？能否以这次试验的方法配制其他培养基？能否以这次试验的方法配制其他培养基？3、高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅、高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内的冷空气排尽？内的冷空气排尽？结果与思考题结果与思考题