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1、实验三 培养基的制备一、实验目的1、明确培养基的配制原理；2、通过对培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。实验三 培养基的制备二、实验原理（一）培养基的概念指人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的混合营养成分，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。实验三 培养基的制备（二）培养基的分类1、按成分的不同分天然培养基：主要成分是复杂的有机物质，如马铃薯、豆饼粉、玉米粉、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等，如马铃薯培养基、玉米粉、豆饼粉培养基、血琼培养基等合成培养基：用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基，也称化学成分明确的培养基（chemically define
2、d medium），如高氏一号培养基、查氏培养基等半合成培养基：在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基，如PDA培养。实验三 培养基的制备（二）培养基的分类2、按物理状态的不同分液体培养基：一类外观呈液体状态的培养基，不含任何凝固剂。固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂。凝固剂：琼脂（1.52%）和明胶（512%）半固体培养基：琼脂（0.5%）脱水培养基：又称脱水商品培养基或预制干燥培养基，指含有除水以外的一切成分的商品培养基，使用时只要加入适量水分并加以灭菌即可，是一类既有成分精确又使用方便等优点的现代化培养基。实验三 培养基的制备（二）培养基的
3、分类3、按培养基的用途分选择培养基：利用微生物对某种或某些化学物质的敏感性不同，在培养基中加入这些物质，抑制不需要的微生物生长，而利于所需分离的微生物的生长，从而达到分离或鉴别某种微生物的目的。如马丁氏培养基马丁氏培养基鉴别培养基：主要用于不同类型微生物的生理生化鉴定；如伊红美蓝乳糖培养基伊红美蓝乳糖培养基实验三 培养基的制备（三）培养基的简介1、牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。牛肉膏：提高碳源、能源、磷酸盐和维生素；蛋白胨：提供氮源、维生素；NaCl：提供无机盐；pH：稀酸或稀碱将pH值调至中性或微碱性。实验三 培养基的制备（三）培养基的简介2、高氏一号培养基用来
4、培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。主要特点是：含有各种化学成分已知的无机盐。3、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（即PDA培养基）用来培养和观察真菌的半合成培养基。实验三 培养基的制备三、实验仪器与用具电磁炉、搪瓷缸、50ml的小烧杯、纱布、玻璃棒、称量纸、分析天平、1mol/lNaOH溶液、1mol/lHCl溶液、pH试纸四、实验材料与试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、KNO3、K2HPO43H2O、MgSO47H2O、FeSO47H2O、蒸馏水、琼脂、马铃薯、葡萄糖实验三 培养基的制备五、实验操作1、计算2、称量药品，如牛肉膏、蛋白胨；3、溶化 按照顺利加入，防治沉淀产生；对于可溶性淀粉
5、，先用少量冷水调成糊状，再放入沸水中。琼脂溶化温度96，凝固温度40。4、调pH值5、分装液体分装：以试管高度的1/4左右为宜；一般不超过三角瓶容积的1/2为宜；固体分装：以不超过试管高度的1/5左右为宜；半固体分装：以不超过试管高度的1/3左右为宜；实验三 培养基的制备五、实验操作6、加塞；7、包扎：注明培养基的名称、组别、配制日 期；8、灭菌：0.1MPa，121，灭菌20min即可。9、搁置斜面：斜面长度不超过试管高度的1/2左右为宜；10、无菌检查将灭菌培养基放入37 的恒温培养箱中培养2448h，以检查灭菌是否彻底。实验三 培养基的制备六、实验作业1、2组配制200ml的牛肉膏蛋白胨
6、培养基、3组配制200ml的高氏一号培养基，4组配制200ml的PDA培养基。2、培养基配制好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的？3、配制合成培养基加入微量元素时最好用什么方法加入?天然培养基为什么不需要另加微量元素?实验三 培养基的制备六、实验作业4你配制的高氏I号培养基有沉淀产生吗?说明产生或未产生的原因。5、细菌能在高氏I号培养基上生长吗?为了分离放线菌，你认为应该采取什么措施?实验三 培养基的制备六、实验作业6现有培养基成分如下 葡萄糖 10g K2HPO43H2O 0.2g NaCl 0.2g MgSO47H2O 0.2g K2SO4 0.2g CaCO3 5g 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml pH 7.2-7.4(1)分析各营养成分的作用。(2)根据培养基成分来源和物理状态，此培养基属何种类型培养基?(3)此培养基的用途是什么?并说明其理由。