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1、微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH实验四、培养基的制备实验四、培养基的制备微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH培养基配制实验原理v培养基是按照微生物生长发育的需要，培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。基质。v人工制备培养基的目的，在于给微生物人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。创造一个良好的营养条件。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH培养基配制要素v营养：碳源、
2、氮源、能源、生长素、水营养：碳源、氮源、能源、生长素、水分和无机盐；分和无机盐；v适宜的酸碱度适宜的酸碱度(pH(pH值值) )和一定缓冲能力；和一定缓冲能力；v一定的氧化还原电位；一定的氧化还原电位；v合适的渗透压。合适的渗透压。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH营养六要素v碳源：碳源：提供微生物繁殖所需碳元素的营养物质。提供微生物繁殖所需碳元素的营养物质。用途：糖、蛋白质、核酸合成。用途：糖、蛋白质、核酸合成。v氮源：氮源：提供微生物繁殖所需氮元素的营养物质。提供微生物繁殖所需氮元素的营养物质。用途：蛋白质、核酸合成。用途：蛋白质、核酸合成。
3、v能源：能源：提供微生物生命活动最初能量来源的营养提供微生物生命活动最初能量来源的营养物或辐射能。物或辐射能。v生长素：生长素：微生物生长必需，但又不能自行合成的微生物生长必需，但又不能自行合成的有机物。有机物。v无机盐：无机盐：提供微生物繁殖所需各种重要元素。提供微生物繁殖所需各种重要元素。v水分：水分：水是保证生命活动重要的介质。水是保证生命活动重要的介质。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH培养基灭菌v配制培养的各类营养物质和容器等含有配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物各种微生物v微生物生长繁殖：微生物生长繁殖： 消耗养分消耗养分
4、改变培养的酸碱度改变培养的酸碱度 产生毒素或者抑制物产生毒素或者抑制物微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH培养基的分类 根据微生物的种类和实验目的的不根据微生物的种类和实验目的的不同，培养基分类可以按以下方式：同，培养基分类可以按以下方式：1. 按成分的不同分按成分的不同分2. 按培养基的物理状态分按培养基的物理状态分3. 按培养基的用途按培养基的用途分分微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH牛肉膏蛋白胨培养基的制备v牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基
5、础培养基；普通的细菌基础培养基；v牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素；维生素；v蛋白胨主要提供氮源和维生素；蛋白胨主要提供氮源和维生素；vNaClNaCl提供无机盐；提供无机盐；v在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂；凝固剂；v用稀酸稀碱将其用稀酸稀碱将其pHpH调至中性或微碱性。调至中性或微碱性。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH牛肉膏蛋白胨培养基配方v牛肉膏：牛肉膏： 3.0gv蛋白胨：蛋白胨： 10.0gvNaCl ： 5.0gv水水 ： 1000
6、mLvpH ： 7.47.6微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH操作步骤1. 称量2. 溶化3. 调pH4. 过滤5. 分装6. 加塞7. 包扎8. 灭菌9. 搁置斜面10. 无菌检查微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH高氏号培养基的制备v高氏高氏号是用来培养和观察放线菌形态特征的号是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。合成培养基。v如果加入适量的抗菌药物，则可用来分离各种如果加入适量的抗菌药物，则可用来分离各种放线菌。放线菌。v此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分此合成培养基的主要特点是含有
7、多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。例混合。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH高氏号培养基配方v可溶性淀粉：可溶性淀粉： 20 gvNaCl： 0.5 gvKNO3： 1 gv K2HPO43H2O： 0.5 g vMgSO47H2O： 0.5 g
8、 vFeSO47H2O： 0.01gv琼脂：琼脂： 1525 gv水：水： 1000 mLvpH： 7.47.6微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH马丁氏培养基的配制v马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。择性培养基。v这种培养基的特点是培养基中加入了孟这种培养基的特点是培养基中加入了孟加拉红和链霉素，能有效抑制细菌和放加拉红和链霉素，能有效抑制细菌和放线菌的生长，而对真菌无抑制作用，因线菌的生长，而对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上可以得到优势生而真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而达到分离真菌
9、的目的。长，从而达到分离真菌的目的。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH马丁氏培养基配方vK2HPO4 ： 1 gvMgSO47H2O： 5 gv蛋白胨：蛋白胨： 5 gv葡萄糖：葡萄糖： 10 gv琼脂：琼脂： 1520 g v1% 孟加拉红水溶液孟加拉红水溶液 3.3mLv水：水： 1000 mLvpH： 自然自然v临用时以无菌操作在临用时以无菌操作在100mL培养基中加入培养基中加入1%的的链霉素链霉素0.3mL ，使其终浓度为，使其终浓度为30g/mL。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH按照培
10、养基的成分来分v天然培养基天然培养基v合成培养基合成培养基v半合成培养基合成培养基微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH天然培养基v主要成分是复杂的天然有机物质，是实主要成分是复杂的天然有机物质，是实验室和发酵工厂常用的培养基。验室和发酵工厂常用的培养基。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH合成培养基v用化学成分完全了解的纯化合物药品配用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基，因此也称化学成分明制而成的培养基，因此也称化学成分明确的培养基。一般用于研究微生物的形确的培养基。一般用于研究微生物的形态
11、，营养代谢，分类鉴定，育种选育，态，营养代谢，分类鉴定，育种选育，遗传分析。遗传分析。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH半半合成培养基v在以天然有机物作为微生物营养来源的在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基叫半合成培养基。大品所配制的培养基叫半合成培养基。大多数微生物都能在此种培养基上生长，多数微生物都能在此种培养基上生长，应用广泛。应用广泛。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH按照培养基的物理状态v固体培养基固体培养基
12、v半固体培养基半固体培养基v液体培养基液体培养基微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH固体培养基v在液体培养基中加入凝固剂即为固体培在液体培养基中加入凝固剂即为固体培养基。实验室的凝固剂有琼脂，琼脂糖，养基。实验室的凝固剂有琼脂，琼脂糖，明胶，和硅胶。一般加入明胶，和硅胶。一般加入1.5%2.0%即即可。主要用于微生物的分离，鉴定，活可。主要用于微生物的分离，鉴定，活菌计数，菌种保藏等菌计数，菌种保藏等。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH半固体培养基v在液体培养基中加入少量凝固剂即为半在液体培养基中加入
13、少量凝固剂即为半固体培养基。例如用琼脂做凝固剂时只固体培养基。例如用琼脂做凝固剂时只需要加入需要加入0.2%0.7%，此种培养基常用，此种培养基常用来观察细菌的运动特征、菌种保存和噬来观察细菌的运动特征、菌种保存和噬菌体的分离纯化及制备等。菌体的分离纯化及制备等。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH液体培养基v不含任何凝固剂，配好后成液体状态的不含任何凝固剂，配好后成液体状态的培养基。广泛用于微生物的培养，生理培养基。广泛用于微生物的培养，生理的培养，生理代谢和遗传学的研究以及的培养，生理代谢和遗传学的研究以及工业发酵等。工业发酵等。微生物学实验微
14、生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH按照培养基的用途分v基础培养基基础培养基v营养培养基（加富培养基）营养培养基（加富培养基）v鉴别培养基鉴别培养基v选择培养基选择培养基微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH基础培养基 含有一般细菌生长繁殖需要的基本的营养含有一般细菌生长繁殖需要的基本的营养物质。最常用的基础培养基是天然培养基物质。最常用的基础培养基是天然培养基中的牛肉膏蛋白胨培养基。这种培养基可中的牛肉膏蛋白胨培养基。这种培养基可作为一些特殊培养基的基础成分。作为一些特殊培养基的基础成分。微生物学实验微生物学实验生命
15、科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH营养培养基（加富培养基） 在基础培养基中加入某些特殊营养物质，在基础培养基中加入某些特殊营养物质，如血液、血清、动物（或植物）组织液，如血液、血清、动物（或植物）组织液，酵母浸膏或生长因子。用以培养对营养酵母浸膏或生长因子。用以培养对营养要求苛刻的微生物。要求苛刻的微生物。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH鉴别培养基 是一类含有特定化合物或试剂的培养基。是一类含有特定化合物或试剂的培养基。某种微生物在这种培养基上培养后，它某种微生物在这种培养基上培养后，它所产生的某种代谢产物与这种特定的化所产
16、生的某种代谢产物与这种特定的化合物或试剂能发生某种明显的特征性反合物或试剂能发生某种明显的特征性反应，根据这一特征性反应可以将某种微应，根据这一特征性反应可以将某种微生物与他种微生物区别开来。主要用于生物与他种微生物区别开来。主要用于不同类型微生物的生理生化鉴定。不同类型微生物的生理生化鉴定。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH选择培养基 利用微生物对某种化学物质的敏感性不利用微生物对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入这类物质，抑制不同，在培养基中加入这类物质，抑制不需要的微生物生长，而利用所需分离的需要的微生物生长，而利用所需分离的微生物生
17、长，从而达到分离或鉴别某种微生物生长，从而达到分离或鉴别某种微生物的目的。微生物的目的。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH 蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛另外，称药品时严防药品混杂，一把牛交匙用于一种药品，或称取一种药品后，交匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。不要盖错。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH 在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免在琼脂溶化
18、过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出培养基因沸腾而溢出容器。同时，需容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦，配制培不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦，配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。免离子进入培养基中，影响细菌生长。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH pHpH不要调过头，以免回调而影响培养基不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。内各离子的浓度。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH 分装过程中，注意不要使培养基沾在管分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上以免污染棉塞而引起污染。（瓶）口上以免污染棉塞而引起污染。