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1、 塞来昔布对胃癌细胞生长的抑制作用 夏敏，郭继中，严洁，唐建英 夏敏，郭继中 ，严洁 ， 唐建英 ，无锡市第一人民医院消化内科 江苏省无锡市 214000 項目负贵人 . 夏敏 ,214000,江苏省无锡市第一人民医院消化内科 . 收稿曰期： 2004-12-22 接受 B期： 2005-01-20 摘要 目的：观察特异性 COX-2 抑制剂塞来昔布对体外培养的 SGC7901 胃腺癌细胞生长及环氧化酶活性的作用 . 方法：采用 MTT 比色法现察不同浓度的塞来昔布对 COX- 2高表达的人胃癌细胞 SGC7901 生长的影响，免疫细胞化 学方法检测 COX-2 蛋白的表达 ;同时用相差显微镜
2、动态观 察细胞形态及生长方式的改变 . 结果：塞来普布 25 Jlmol/L 对 SGC7901 细胞生长无抑制作 用，作用 72 h 后细胞存活率为 80.0%;50-100 Jimol/L的塞 来昔布与 SGC7901 细胞相互作用 24 h 细胞存活率分别为 88.5%， 80.7%, 42.3%， 48 h 细胞存活率分别为 79.8%， 60.2%， 40.1%， 72 h 细胞存活率分别为 58.6%， 37.8%、 21.2%. 塞来昔布同时减少 COX-2 蛋白表达 ;当浓度为 50 Hmo /L 的 塞来昔布与胃癌 SGC7901 细胞作用后， COX-2 表达明 k 下降，
3、并呈剂量依赖关系 . 结论：塞来昔布能抑制 SGC7901 胃癌细胞株的生长及 COX-2蛋白表达 . . 夏敏 .郭继中，严洁 ,唐建英 .塞来昔布对胃癌细胞生长的抑制作用 .世界华人 消化杂志 2005;13(4):555-556 http:/ 引言 C0X-2 表达增加可见于人类多种肿瘤， C0X-2 受抑可抑 制几种动物肿瘤模型肿瘤的生长 m, C0X-2 表达增加提 示患者的预后较差 2,因此 C0X-2 成为肿瘤化学预防的 靶目标 .胃癌是我国常见的消化道恶性肿瘤，进展期胃癌 的疗效不尽人意，对胃癌的防治是目前研究的热点，研究 发现胃癌及不典型增生患者 COX-2 raRNA 及蛋
4、白的表达增 加 3-4，而塞来昔布对胃癌的防治作用国内报道较少， 我们探讨塞来昔布抗人胃癌细胞株 SGC7901 细胞增生作 用机制如下 . 1 材綱方法 1.1 材料 RPMI1640 培养基，小牛血清购自 Gibco 公司； MTT, DMS0 购自 Sigma 公司；塞来昔布由普强苏州制药有 限公司提供；山羊抗人 C0X-2 多克隆抗体购自 Santa Cruz 公司；人胃癌细胞系 SGC7901 购自中科院上海细胞所 . 1.2 方法取对数生长期的细胞以每孔 5 X 103 个细胞接 种于 96 孔培养基中， 37X： , 50 niL/L C02 条件下培养 24 h,分别加入以 D
5、MS0 溶解的不同浓度的塞来昔布 （ 25, 50，75， 100 pimol/L),并设含相同浓度 DMS0 的空白对 照，继续培养 24 h 和 48 h,每孔加 MTT(5 g/L)20 叫， 作用 4 h 后加 DMS0150 pL,震荡 10 rain,使结晶物 充分溶解，酶联免疫检测伩测其吸光度，计算细胞存活率 (%)=实验组平均值 /对照组平均值 X 100%.另将细胞 悬液接种在 24 孔板内预先处理的玻片上，继续培养 24 h 后加入不同浓度的塞来昔布，设溶剂 DMS0 为对照组，培 养 72 h 后取出玻片，PBS 清洗后乙醇固定，采用常规 SP 法测 C0X-2 蛋白 .
6、另相差显微镜下动态观察 SGC7901 细胞 经不同浓度塞来昔布处理后细胞在大小、形态及生长方式 上的改变 . 2 结果 塞来昔布处理组 SGC7901 细胞形态体积略大，呈圆形或多 边形，核浆比例少，异型性降低，细胞呈单层生长， 在长至 100%汇合后恢复接触抑制和密度抑制，在用药后 3d 100 Hinol/L 处理组大部分细胞老化、死亡：而对 照组 SGC7901细胞大小形态不一，能叠加成堆生长，丧 失接触抑制和密度抑制的特性 .塞来昔布 25 nmol/L 对 SGC7901 细胞生长无抑制作用，作用 72 h 后细胞存活 率为 80. 0%， 50-100 nmol/L 的塞来昔布与
7、 SGC790I 细 胞相互作用后， 24 h 细胞存活率分别为 88. 5%， 80. 7%, 42. 3%;48 h 细胞存活率分别为 79. 8%, 60.2%, 40. 1%; 72 h 细胞存活率分别为 58. 6%, 37.8%, 21.2%.随着药 物浓度的增加及作用时间的延长，细胞存活率逐渐下 降，呈时间剂量依赖性关系 .免疫细胞化学染色显示 |胃 癌 SGC7901 细胞有 C0X-2蛋白的表达（图 1A).当浓度为 50 nmol/L 的塞来昔布与胃癌 SGC7901 细胞作用后， C0X-2 表达明显下降，塞来昔布浓度越高，其抑制 C0X-2 表达的作用越明显（图 1B)
8、. 图 1 C0X-2 在不同组细胞中的表达 .A:对照； B: 50 nmol/L 塞来昔布 . 3 讨论 胃癌组织中 C0X-2表达增加，而正常胃黏膜组织未有 C0X-2蛋白表达 ， Lira et aJs:发现 C0X-2 过度表达尚 见于肠腺化生和腺瘤等癌前状态，认为 C0X-2 可能在胄 癌形成的早期事件中起作用，与肿瘤的血管生成及淋巴 结转移有关 .塞来昔布是第一个 COX-2 特异性抑制剂，在 由化学性诱导剂所致的多发肠肿瘤的鼠模型中，塞来昔 布可抑制 7 1%肠肿瘤的发生；在偶氮甲烷所致的鼠大肠癌 模型中，塞来昔布可使大肠癌的发生率和数量分别减少 93%和 97%,并抑制结肠异
9、常腺管灶的形成 7.塞来昔布通 过激活 NF-KTB 或抑制蛋白激酶 B (PKB) /AKT 的激活促进体 外培育的结肠癌株凋亡而抑制细胞增生 :81，而他的抗肿瘤 增生效应尚未在胃癌中证实 ， Saukkonen et a/9研究 发现在三叶肽生长因子 -1 缺乏鼠腺瘤模型中， COX-2 表 达增加，使用塞来昔布可减小腺瘤的大小，其作用机制可 能通过炎症和促溃疡形成作用扰乱腺瘤的完整性 w.我们 用 MTT 方法证实塞来昔布呈时间、剂量依赖性方式抑制人 胃癌细胞SGC7901 增生，相差显微镜发现塞来昔布处理组 SGC7901细胞异型性降低，细胞呈单层生长，在长至 100% 汇合后恢复接
10、触抑制和密度抑制，在用药第 3 d 后 100 pm 1 / L 处理组大部分细胞老化、死亡；而对照组 SGC7901 细胞大小形态不一，能叠加成堆生长，丧失接触 抑制和密度抑制的特性，因此塞来昔布可抑制人胃癌细胞 的增生 .塞来昔布可通过多种途径抑制肿瘤的生长，免疫 细胞化学发现SGC-7901 胃癌细胞株有较高水平的 C0X-2 表达，经塞来昔布作用后癌细胞株 C0X-2 的表达水平明显 降低，故塞来昔布抑制胃癌细胞生长可能是通过抑制 C0X-2 的表达，进而抑制前列腺素的合成而实现 .前列腺 素可诱导免疫抑制 m，抑制 C0X-2 可加重食物抗原诱导 的大鼠炎症性肠 病模型的肠黏膜损害，
11、故前列腺素可防止 免疫介导的胃肠道损伤，其机制是通过改变淋巴细胞和巨 噬细胞 IL-IO， IL-12 的释放 11及抑制 T 细胞和自然杀 伤细胞的活性导致免疫抑制 .因此，应用环氧化酶抑制剂 塞来昔布可减低肿瘤引起的免疫抑制作用 .另外 ， Uefuji et 证实了微血管密度与COX-2 表达强度的关系， C0X-2 通过诱导血管内皮生长因子和转化生长因子 p、 刺 激内皮细胞移行和管腔形成促进血管生成 .在一项对大鼠血 管增生模型的研究中，观察到塞来昔布可抑制体内成纤维 细胞生长因子诱导的促角膜新生血管的形成 lm,因此塞 来昔布也可抑制肿瘤血管的增生 . 4 参考文献 1 Gupta
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