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1、2020/10/26,1,白 细 胞 分 类 计 数（differention count of leukocyte）,实验二,谢 海 啸,2020/10/26,2,一、白细胞分类计数,白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。,2020/10/26,3,瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不一样，故可呈不同的着色特点。,瑞氏染色原理：,2020/10/26,4
2、,血红蛋白、嗜酸性颗粒均为碱性物质，故与酸性染料伊红结合而染成红色，呈嗜酸性。 细胞核的核蛋白为酸性物质，故与碱性染料美兰结合，染成深蓝色或深紫红色，呈嗜碱性。 中性颗粒与美兰和伊红同时结合而染为淡紫红色，呈嗜中性。,染色原理：,2020/10/26,5,器材 光学显微镜 推片，载玻片 试剂 Wright染液 Wright 1.0g 甲醇 600ml 磷酸盐缓冲液（PH6.46.8） 香柏油 标本来源 EDTA-K2抗凝全血,2020/10/26,6,操作,1)推片：血膜厚薄适中，边缘整齐，外观呈舌形，头、体、尾分明。 2）干燥 3）标记,1.制备血涂片,2020/10/26,7,2染色 1）
3、准备：血膜干透后，用蜡笔在两端划线，以防止染色时染液外溢。将血涂片放染色架上。 2）加染液：在涂片上滴加瑞氏染液数滴，以染液覆盖整个血膜为度，稍静置1min。 3）加缓冲液：滴加缓冲液等量或多些，与上述染液充分混匀。 4）染色：染色10min. 5）冲洗：不要先倒掉染液，平持血涂片用流水缓缓冲洗干净。 6）干燥：直立血涂片，使其自然干燥。,2020/10/26,8,血涂片制作,2020/10/26,9,良好血涂片外观 羽（子弹头）状尾部 周边有空白 无划痕,羽 状 尾 部,2020/10/26,10,不良血涂片,2020/10/26,11,2瑞氏染色操作,2020/10/26,12,3白细胞分
4、类： 先用低倍镜选择厚薄适宜，染色良好，细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，油镜下分类计数。分类时要有秩序的连续进行，避免主观选择视野。通常分类计数100个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。,低倍镜下所见,结果记录方式： Ne 正 一 Ly 正 Mo 正 Eo 正 Ba 正,2020/10/26,13,体尾交界处,理想区域,细胞重叠 细胞太稀,理想区域,2020/10/26,14,各类成熟白细胞的形态学：,中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圆形，直径1013m，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。,2020/1
5、0/26,15,嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。,2020/10/26,16,嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。,2020/10/26,17,淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，直径介于615m之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，直径69m，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可
6、见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。,2020/10/26,18,单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。,2020/10/26,19,正常成人外周血白细胞分类参考值： Ne 50%70% Ly 20%40% Mo 3%8% Eo 0.5%5% Ba 0%1%,参考值,2020/10/26,20,1.血涂片制备要厚薄适宜、均匀、头体尾分明，无溶血、无空洞。 2.很多因素影响涂片时血膜的厚度。血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。 3.按一定顺序，有秩序地连续进行，避免选择视野。 4.分类计数时应同时报告RBC和WBC的形态是否有异常。退化细胞不计数。,注意事项,2020/10/26,21,RBC异常,2020/10/26,22,中性粒细胞,嗜酸性粒细胞,淋巴细胞,嗜碱性粒细胞（右）,单核细胞,血小板,2020/10/26,23,实验报告（注意学号）,1原理 2方法,3各类细胞百分比报告,4讨论,