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1、专题10 生物技术与实践教材必背及必会知识1、果酒制作（P2）（1）酵母菌是兼性厌氧微生物。酵母菌进行有氧呼吸的反应式如下：C6H12O6+6H2O+6O2 6CO2+12H2O；酵母菌进行无氧呼吸的反应式如下： C6H12O6 2C2H5OH+2CO2 。（2）20 左右最适合酵母菌繁殖，酒精发酵时一般将温度控制在1825。2、果醋制作（P3-P4）（1）醋酸菌是一种好氧细菌。醋酸生成反应式是 C2H5OH+O2 CH3COOH+H2O。（2）醋酸菌的最适生长温度为3035 。（3）为防止发酵液被污染，发酵瓶要清洗干净，用体积分数为 70%的酒精消毒。（4）果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重
2、铬酸钾来检验。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。3、多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是毛霉。毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以将脂肪水解成甘油和脂肪酸。（P6）4、卤汤中的酒可以选用料酒、黄酒、米酒、高粱酒等，含量一般控制在12%左右。（P7）5、腐乳制作的实验流程示意图（P7）让豆腐长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶 密封腌制6、测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与 N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玖瑰红色染料。将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较，可以大致估算出亚硝酸盐
3、的含量。（P10）7、在泡菜的腌制过程中，要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量。温度过高、食盐用量过、低腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。（P11）8、微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。（P14）9、虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐。（P14）10、在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要
4、提供无氧的条件。（P15）11、消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。（P15）12、实验室常用的消毒和灭菌方法（1）消毒方法：日常生活中经常用到煮沸消毒法。在100煮沸56min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢。对于一些不耐高温的液体，如牛奶，则使用巴氏消毒法，在7075煮30min或在80煮15min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养成分不被破坏。此外，人们也常使用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手、用消氯气 毒水源等。（P15）（2）灭菌方法：灼烧灭菌是将微生物的
5、接种工具，如接种环、接种针 或其他金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌。此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。干热灭菌是将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160170加热12h可达到灭菌的目的。能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。高压蒸汽灭菌是将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽锅内。把锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后，将锅密闭，继续加热使锅内的气压逐步上升，温度也随之升到100以上。为达到良好的灭菌效果，一般在压力为 100kPa，温度为121的条件下，维持1
6、530min。（P16）（3）除了以上方法外，实验室里还用紫外线 或化学药物进行消毒。例如，接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30min，以杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。（P16）13、本实验用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养，可分成制备培养基和纯化大肠杆菌两个阶段进行。（P16）14、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程：（1）计算；（2）称量；（3）溶化；（4）灭菌；（5）倒平板。倒平板的具体操作正确顺序是： d a c b（用下图字母表示）。（P17） a b c d15、微生物接种的方法很多，最常
7、用的是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是通过接种环在琼脂固体 培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体 ，这就是菌落。 稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释 ，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。（P18-（P19）16、对于频繁使用的菌种，我们可以采用临时保藏 的方法。首先，将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4的冰箱中
8、保藏。以后每36个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。但是，这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染 或产生变异 。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏 的方法，在3mL的甘油瓶中，装入 1mL后甘油灭菌。将1mL培养的菌液转移至甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在-20的冷冻箱中保存。（P14）17、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基 。（P22）18、稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中
9、大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。值得注意的是，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低 。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。除了上述的活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。（P22）19、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨 。氨会使培养基的碱性增强，pH升高。因此，我们可以通过检测培养基pH 的变化 来判断该化学反应是否发生。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红。（P26）20、许多商
10、品纤维素都是由天然纤维素制得的，如水溶性的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、不溶于水的微晶纤维素等。纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。（P27）21、在刚果红(CongoRed，简称CR )是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红一纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。（P28）22、在将样品稀释涂布到鉴别纤
11、维素分解菌的培基之前，可以通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度 ，以确保能够能够从样品中分离到所需要的微生物。（P29）23、常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。方法一：在长出菌落的培养基上，覆盖质量浓度为1mg/mL的CR溶液，1015min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为1mol/L的NaCl溶液，15min后倒掉NaCl溶液，此时，产生纤维素酶的菌落周围将会出现 透明圈。方法二：配制质量浓度为10mg/mL的CR溶液，灭菌后，按照每200mL培养基加入1mL的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。等培养基上长出菌落后，产生纤
12、维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。（P29）24、果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一，它是由半乳糖醛酸 聚合而成的一种高分子化合物。（P42）25、果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁 及胞间层，使榨取果汁变得更容易，而果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸，也使得浑浊的果汁变得澄清。果胶酶并不特指某一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等。（P42）26、酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力。酶的活性高低可以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反应的反应速度来表示。酶反应速度用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量来表示。（P42）27、
13、温度、pH和酶的抑制剂等条件会影响酶的活性。（P43）28、加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉，目前常用的酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和 纤维素酶。其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。（P46）29、温度、酸碱度和表面活性剂都会影响酶的活性。为了解决这个难题，科学家通过基因工程生产出了能够耐酸、耐碱、忍受表面活性剂和较高温度的酶，并且通过特殊的化学物质将酶层层包裹，与洗衣粉的其他成分隔离。（P46）30、固定化酶技术是指将酶固定在不溶于水的载体上，使酶既能与反应物接触，又能与产物分离。（P49）31、固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间
14、内的技术，包括包埋法 、化学结合法和物理吸附法 。一般来说，酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固定化，而细胞多采用包埋法固定化。（P50）32、在缺水状态下，微生物处于休眠状态。活化 就是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。（P50）33、注意，加热时要用小火，或者间断加热，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止。（P51）34、将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已活化的酵母细胞 ，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移到注射器中。（P51）35、 以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，观察液滴在CaCl2溶液中形成凝胶珠的情形。（P51）36、将固定好的酵母细胞
15、（凝胶珠）用蒸馏水冲洗23次。（P51）37、凝胶色谱法。（1）凝胶色谱法的原理根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。所用的凝胶实际上就是些微小的多孔球体；（2）当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程路程较短，移动速度较快。（P64）38、凝胶色谱法实验使用的缓冲液一般是磷酸缓冲液。（P65）39、电泳的原理是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。（P65
16、）40、在测定蛋白质分子质量时，通常使用SDS聚丙烯酰胺电泳。（P66）41、蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少和分子质量的大小等因素。（P66）42、SDS能消除净电荷对迁移率的影响，并且能使蛋白质发生完全变性。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复合物，由于SDS所带的负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因此掩盖了不同蛋白质分子之间的电荷差别，是电泳迁移率完全取决于蛋白质分子的大小。（P66）43、实验操作（P66-P67）（1）样品处理及粗分离（粗分离步骤）血红蛋白一共由四条肽链组成，包括两条a肽链和B肽链。其中每条肽链环绕成一个亚铁血红素基团，此基团可携带
17、一分子的氧或一分子二氧化碳。血红蛋白因含有血红素而呈红色。样品的处理和粗分离的四个步骤分别是红细胞的洗涤、血红蛋白的释放。 分离血红蛋白溶液以及透析可以除去样品中分质量较小的杂质。（2）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（纯度鉴定步骤）判断纯化的蛋白质是否达标，需要进行蛋白质纯度的鉴定，使用最多的是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。44、操作提示（P69-P70）（1）洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白；离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离效果。（2）为了加速膨胀，可以将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，这样做的目的是不但可以节约时间，而且可以除去凝胶中可能带有的微生物，排除凝胶内的空气。（3）在装
18、填凝胶柱时，不得有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。45、植物芳香油的来源（P72）（1）天然香料的主要来源是动物和植物，微生物中的真菌 也可以产生芳香化合物。（2）提取出的植物芳香油具有很强的挥发性，其组成也比较复杂，主要包括 萜类化合物及其衍生物。 46、植物芳香油的提取方法（P72）（1）植物芳香油的提取方法有蒸馏、压榨和萃取等。 （2）水蒸气蒸馏法的原理是利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来，形成油水混合物，冷却后，混合物又会重新分出油层和水层。（3）根据蒸馏过程中原料放置的位置，可以将水蒸气蒸馏法划分为水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏。其中，水中蒸馏的
19、方法对于有些原料不适用，如柑橘和柠檬。 这是因为水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题。因此，柑橘、柠檬芳香油的制备通常使用 压榨法。（4）植物芳香油不仅挥发性强，而且易溶有机溶剂，如石油醚、酒精、乙醚和戊烷等。不适于用水蒸气蒸馏的原料，可以考虑使用萃取法。（5）萃取法是将粉碎、干燥的植物原料用有机溶剂浸泡，使芳香油溶解在有机溶剂中的方法。芳香油溶解于有机溶剂后，只需蒸发出有机溶剂，就可以获得纯净的植物芳香油了。47、玫瑰精油的提取（P73-P74）（1）玫瑰精油是制作高级香水的主要成分，能使人产生愉悦感。实验室玫瑰精油的粗提取，将玫瑰花瓣与清水的质量按1：4 ，用水蒸气蒸馏法进行提取。玫
20、瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏。（2）水蒸气蒸馏后，锥形瓶中将收集到乳白色的乳浊液，这是玫瑰精油与水 的混合物。这时只需要向乳化液中加入氯化钠( NaCl ) ，增加盐的浓度，就会出现明显的分层。然后用分液漏斗将这两层分开。分离的油层还会含有一定的水分，一般加入一些无水Na2SO4吸水，放置过夜，再过滤除去固体硫酸钠就要可以得到玫瑰油了。48、橘皮精油的提取（P74-P75）（1）从橘皮中提取的橘皮油，无色透明，具有诱人的橘香味，主要成分是柠檬烯。橘皮精油主要贮藏在橘皮部分，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部水解，使用水中蒸馏法又会发生原料焦糊的
21、问题，所以一般采用压榨 法。（2）新鲜的柑橘皮中含有大量的果蜡、果胶和水分，如果直接压榨，出油率较低。为了提高出油率，需要将柑橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡。为了使橘皮油易于与水分离，还要分别加入相当于橘皮质量0.25%的NaHCO3和5%的 Na2SO4，并调节pH至78。（3）橘皮压榨液中含有橘皮精油和大量水分，还有一些糊状残渣等杂质。可以先用普通布袋过滤除去固体物和残渣，然后离心进一步除去质量较小的残留固体物，再用分液漏斗或吸管将上层 的橘皮油分离出来。此时的橘皮油还含有少量的水和果蜡，需在 5-10下静止57d，使杂质沉淀，用吸管吸出上层澄清橘皮油，其余部分通过滤纸过滤，滤液与吸出的上层
22、橘油合并，成为最终的橘皮精油。 49、操作提示（P75） （1）蒸馏时许多因素都会影响产品的品质。例如，蒸馏温度太高、时间太短，产品品质就比较差。如果要提高品质，就需要延长蒸馏时间。（2）橘皮在石灰水的浸泡时间为10h以上，橘皮要浸透，这样压榨时不会滑脱，出油率高，并且压榨液的粘稠度不会太高，过滤时不会堵塞筛眼。50、胡萝卜素的提取（P77）（1）从胡萝卜中提取的橘黄色物质包括多种结构类似物，统称为胡萝卜素。胡萝卜素的化学分子式中包含多个碳碳双键，根据双键的数目可以将胡萝卜素划分为、三类， -胡萝卜素是其中最主要的成分。一分子的-胡萝卜素在人或动物的小肠、肝脏等器官被氧化成两分子的维生素A。因
23、此，胡萝卜素可以用来治疗因缺乏维生素A而引起的各种疾病，如夜盲症、幼儿生长发育不良、干皮症等。（2）胡萝卜素是橘黄色 结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于乙醚等有机溶剂。胡萝卜等蔬菜是提取天然-胡萝卜素的原料，工业生产上，提取天然-胡萝卜素的方法主要有三种，一是从植物 提取，二是从大面积养殖的岩藻中获得，三是利用微生物的发酵生产。51、实验设计（P78）（1）用做溶剂的有机溶剂分为水溶性和水不溶性 两种。乙醇和丙酮能够与水混溶，是水溶性有机溶剂；石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳等不能与水混溶，称为水不溶性有机溶剂。（2）萃取的效率主要取决于萃取剂的性质 和使用量，同时还受到
24、原料颗粒大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响。一般来说，原料颗粒小、萃取温度高、时间长，需要提取的物质就能够充分溶解，萃取效果就好。（3）萃取过程应该避免明火加热，采用水浴加热，这是因为有机溶剂都是易燃物，直接使用明火加热容易引起燃烧、爆炸。为了防止加热时有机溶剂挥发，还要在加热瓶口安装回流冷凝装置。萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置，在浓缩之前，还要进行过滤，除去萃取液中的不溶物。52、操作提示（P79）将提取的胡萝卜素粗品通过纸层析进行鉴定，在18cm X 30cm滤纸下端距离底边2cm处做一基线，在基线上取A、B、C、D四点，用最细的注射器针头分别吸取0.10.4mL溶解在石
25、油醚中的 标准 样品和提取样品，在A、D和B、C点上点样。点样应该快速细致，在基线上形成直径为2mm左右的圆点，每次点样后，可用吹风机将溶剂吹干，注意保持滤纸 干燥。等滤纸上的点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，置于装有1cm深的石油醚的密封玻璃瓶中。等各种色素完全分开后，取出滤纸，让石油醚自然挥发后，观察标准样品中位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带。易错易混知识1、醋酸菌属于原核生物，异养需氧型代谢类型，不仅能利用葡萄糖合成醋酸，还能将酒精转化为醋酸。2、在制作葡萄酒时，在发酵过程中，每隔12个小时左右要将瓶盖拧松一次，其目的是补充氧气，以利于酵母菌的繁殖。3、制作葡萄酒与醋酸时的控制温度不相
26、同，前者控制在3035，后者的适宜温度是20左右。4、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色。在缺氧 呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。5、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇直接变为醋酸。 6、培养微生物的培养基中都必须含有碳源、氮源、水和无机盐，有些微生物的培养基中还需要加入特殊营养，如维生素等。7、牛肉膏与蛋白胨不仅能为微生物提供碳源、氮源、无机盐，还能为微生物提供维生素。8、
27、消毒与灭菌的本质是相同的，但灭菌能杀死所有的微生物包括芽孢与孢子，消毒的条件则相对温和，只能杀灭部分微生物，一般不能杀死芽孢与孢子。9、平板培养基配制的基本流程为：计算称量溶化（包括琼脂）调节PH倒平板灭菌（冷却后）倒置平板。10、微生物计数时，如果单位体积菌液内微生物的数量过大，计数前必须进行稀释。一般将菌液稀释接种后可能在培养基的平板上形成10-100个左右的菌落，比较适宜，统计的菌落数比较准确可信。11、一个由KH2PO4、Na2HPO4、H2O、NH4HCO3配制的培养基中含有4种营养物质。12、培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养
28、基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至碱性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件13、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。14、 消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴
29、氏消毒法（对于一些不耐高温的液体），还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。15、 灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。灭菌方法：接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。16、平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止培养基表面的水分过度地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。在倒平板的过程中，如果不小心将
30、培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。17、微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。18、用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面
31、形成单个的菌落，以便于纯化菌种。这两种接种方法都可用于微生物的分离纯化和计数。19、平板划线法操作步骤：将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。将试管口通过火焰。将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。将试管通过火焰，并塞上棉塞。左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意要将最后一区的划线与第一区相连。将平板倒置放入培养箱中培养。200、涂布平板操作的步骤：将接种环浸在盛有酒精的烧杯中。取
32、少量菌液，滴加到培养基表面。将沾有少量酒精的接种环在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810s。用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面。21、菌种的保存：（1）对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。临时保藏方法：将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4的冰箱中保藏。以后每36个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。缺点：这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。（2）对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法：在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20的冷冻箱中保存
33、。22、样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中，通常选用一定稀释度的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用稀释度102、103、104；测定放线菌的数量，一般选用稀释度103、104、105；测定真菌的数量，一般选用稀释度104、105、106。23、从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌株数方法：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值。每克样品中的菌株数=（C/ M）* V 。其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），M代表稀释倍
34、数。24、 胡萝卜素的提取过程中，萃取剂最好选择具有较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶的四氯化碳。25、影响萃取的因素：主要因素：萃取剂的性质和使用量。次要因素：原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等。一般来说，原料颗粒小，萃取温度高，时间长，需要提取的物质就能够充分溶解，萃取效果就好。萃取前，要将胡萝卜进行粉碎和干燥。萃取过程应该避免明火加热，采用水浴加热，这是因为有机溶剂都是易燃物，直接使用明火加热容易引起燃烧爆炸。为了防止加热时胡萝卜素挥发，还要在加热瓶口安装回流冷凝装置。萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置。在浓缩之前，还要进行过滤，除去萃取液中的不溶物。1.传统发酵技术的应用2.微生物的培养与应用3.酶的应用4.从生物材料中提取某些特定成分 17 / 17学科网（北京）股份有限公司