保健食品功效成分检测方法.pptx

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1、分光光度法分光光度法测定保健食品功效成分 LOGO1.YOUR SITE HERE分分保健食品的原保健食品的原料料与与功效成功效成2.保健保健能能食品的功效成食品的功效成分分与与健健保功保功3.保健食品功效成分保健食品功效成分的的检测检测4.检测检测方法的方法的技技术术要求及要求及数数据据处处 理理内内 容容1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO保健功效成分来源与保健功能保健功效成分来源与保健功能功效成分功效成分保健功能保健功能主要来源主要来源灵芝多糖 香菇多糖缓解体力疲劳 增强免疫力 辅助降血糖辅助降血脂灵芝、香菇、灰树花、人参 昆布、木耳、茯苓、猪苓、枸杞 山药、银耳、西洋参、黄

2、芪、黄精、苦瓜硫酸软骨素辅助降血脂 增强免疫力 保护骨关节 参与制造骨骼动物的软骨YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO一、粗多糖的苯、粗多糖的苯酚酚硫酸分光光度硫酸分光光度测测定法定法测测定原理定原理-多糖多糖经经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质杂质的干的干 扰扰，再与苯，再与苯酚酚硫酸作用成橙硫酸作用成橙红红色化合物，其呈色度与溶色化合物，其呈色度与溶 液中的糖的液中的糖的浓浓度成正比，度成正比，在在485nm485nm波波长长下比色定量下比色定量YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多L

3、O糖糖GO一、粗多糖的苯、粗多糖的苯酚酚硫酸分光光度硫酸分光光度测测定法定法样样品品处处理理由由于于不不少少保保健健品品添添加加了了淀淀粉粉、糊糊精精，一一定定要要做做相相应应的的处处 理理，否否则则结结果果偏偏高高。添添加加淀淀粉粉的的样样品品需需加加-淀淀粉粉酶酶及及糖糖化化 酶酶（如葡萄糖苷（如葡萄糖苷酶酶）处处理。添加糊精的理。添加糊精的样样品需加糖化品需加糖化酶酶（如葡萄糖苷（如葡萄糖苷酶酶）处处理。理。处处理的原理的原则则是将是将这类这类非活性多糖的碳水化合物全部非活性多糖的碳水化合物全部酶酶解解 成成单单糖或低聚糖，再用乙醇沉淀所需的活性多糖以达到分糖或低聚糖，再用乙醇沉淀所需的

4、活性多糖以达到分 离的目的。离的目的。YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO一、粗多糖的苯、粗多糖的苯酚酚硫酸分光光度硫酸分光光度测测定法定法样样品品测测定定定量准确移取定量准确移取样样品溶液品溶液于于25mL25mL比色管中，比色管中，补补加水至加水至 2.0mL,2.0mL,加加入入5%5%苯酚溶苯酚溶液液1.0mL,1.0mL,在旋在旋涡涡混合器上混匀，小心混合器上混匀，小心 加入加入浓浓硫硫酸酸10mL,10mL,在旋在旋涡涡混合器上小心混匀，至沸水浴中混合器上小心混匀，至沸水浴中 2mi2min n，冷却至室温，用分光光度，冷却至室温，用分光光度

5、计计在在485n485nm m波波长处长处以以试剂试剂空空 白白为为参比参比，1cm1cm比色皿比色皿测测定吸光度定吸光度值值。YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO、葡葡聚聚糖糖的的分分光光光光度度测测定定法法二二一、粗多糖的苯、粗多糖的苯酚酚硫酸分光光度硫酸分光光度测测定法定法注意事注意事项项测定样品中多糖时，提取时间以1小时为宜，以免因提取时间过长引起 糖结构变化甚至使碳键断裂而导致所测多糖含量偏低本法灵敏度高，出现测定结果平行性偏差较大,实际操作时每个样品要 多做几个平行样由于保健食品组方的复杂性，不同分子量得多糖所用的乙醇浓度沉淀效 果是不同的酶

6、的活性对酶解的效果影响较大粗多糖测定最终报告结果要标示以葡萄糖计或葡聚糖计，因两者测定值 相差很大YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO二、葡聚糖的分光光度二、葡聚糖的分光光度测测定法定法测测定原理定原理-食食品品中中相相对对分分子子质质量量大大于于1*1041*104的的高高分分子子物物质质在在80%80%乙乙醇醇溶溶 液液中中沉沉淀淀，与与水水溶溶液液中中单单糖糖和和低低聚聚糖糖分分离离，用用碱碱性性二二价价铜铜 试试剂剂选选择择性性地地从从其其他他高高分分子子物物质质中中沉沉淀淀具具有有葡葡聚聚糖糖结结构构的的 多多糖糖，用用苯苯酚酚硫硫酸酸反反应应

7、以以碳碳水水化化合合物物形形式式比比色色测测定定其其含含 量量，其其显显色色强强度度与与粗粗多多糖糖中中葡葡聚聚糖糖的的含含量量成成正正比比，以以此此计计 算食品中粗多糖的含量。算食品中粗多糖的含量。YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO二、葡聚糖的分光光度二、葡聚糖的分光光度测测定法定法样样品品处处理理1 1样样品提取品提取2 2沉淀粗多糖沉淀粗多糖3 3沉淀葡聚糖沉淀葡聚糖YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO二、葡聚糖的分光光度二、葡聚糖的分光光度测测定法定法样样品品处处理理样样品提取品提取称取混合均匀的固体称取

8、混合均匀的固体样样品品2.0g,2.0g,置于置于100ml100ml，加加水水80ml80ml左左 右，于沸水浴上加右，于沸水浴上加热热2 2小小时时、冷却至室温后、冷却至室温后补补加水至刻加水至刻 度，混匀后度，混匀后过滤过滤，弃去初，弃去初滤滤液，收集余下液，收集余下滤滤液供沉淀多糖液供沉淀多糖YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO二、葡聚糖的分光光度二、葡聚糖的分光光度测测定法定法样样品品处处理理沉淀粗多糖沉淀粗多糖准确吸取准确吸取样样品提取中品提取中终滤终滤液液5.0ml5.0ml或液体或液体样样品品5.0ml5.0ml，置置 于于50ml50m

9、l离心管中，加入无水乙离心管中，加入无水乙醇醇20ml20ml，混混匀匀5min5min后，以后，以 3000r/mi3000r/min n离离心心5mi5min n，弃去上清液。残渣，弃去上清液。残渣用用80%80%(体体积积分数）分数）乙醇溶液数毫升洗乙醇溶液数毫升洗涤涤，离心后弃上清液，反复操，离心后弃上清液，反复操作作3-3-4 4次。次。残渣用水溶解并定容残渣用水溶解并定容至至5.0ml5.0ml，混匀后供沉淀葡聚糖。混匀后供沉淀葡聚糖。YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO二、葡聚糖的分光光度二、葡聚糖的分光光度测测定法定法样样品品处处理理沉淀

10、葡聚糖沉淀葡聚糖准确吸取沉淀粗多糖后的准确吸取沉淀粗多糖后的终终溶溶液液2ml2ml，置置于于20ml20ml离心管离心管 中，加中，加入入100g/100g/l l氢氢氧化氧化钠钠溶溶液液2.0m2.0ml l、铜试剂铜试剂溶溶液液2.0m2.0ml l，沸水浴中煮沸水浴中煮沸沸2mi2min n，冷却，冷却，以以3000r/mi3000r/min n离心离心5min5min,弃去上弃去上 清液。残渣用洗清液。残渣用洗涤涤液数毫升洗液数毫升洗涤涤，离心后弃去上清液，反，离心后弃去上清液，反 复操复操作作3 3次，残渣次，残渣用用10%10%（体体积积分数）硫酸溶分数）硫酸溶液液2.0ml2.

11、0ml溶解溶解 并并转转移移至至50m50ml l容量瓶中，加水稀容量瓶中，加水稀释释至刻度，混匀。此溶液至刻度，混匀。此溶液 为样为样品品测测定液。定液。YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO二、葡聚糖的分光光度二、葡聚糖的分光光度测测定法定法样样品品测测定定准确吸取准确吸取样样品品测测定定液液2.0mL2.0mL，置置于于25mL25mL比色管中，加入比色管中，加入 50g/50g/L L苯酚溶苯酚溶液液1.0mL1.0mL,在旋在旋涡涡混合器上混匀，小心加入混合器上混匀，小心加入浓浓硫硫 酸酸10.0mL10.0mL,在旋在旋涡涡混合器上小心混匀，至

12、沸水浴混合器上小心混匀，至沸水浴中中2min2min，冷，冷 却至室温，用分光光度却至室温，用分光光度计计在在485nm485nm波波长处长处以以试剂试剂空白空白为为参参 比比，1cm1cm比色皿比色皿测测定吸光度定吸光度值值。YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO二、葡聚糖的分光光度二、葡聚糖的分光光度测测定法定法注意事注意事项项本方法测定的水溶性多糖含有10个以上单糖残基在测定过程中应避免糖和其他碳水化合物的污染，因为苯酚硫酸与糖 和碳水化合物起反应某些保健食品中功效成分为醇溶性多糖，可参照本方法进行测定，但样 品预处理时将乙醇改为丙酮即可洗涤粗多糖沉

13、淀时，一定要将离心管壁上玷污的其他糖分和碳水化合物 用80%乙醇洗净，否则结果偏高此法适用于测定高分子量的糖类物质（10000Da）YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO三、硫酸三、硫酸软软骨素的分光光度骨素的分光光度测测定法定法测测定原理定原理-结结晶紫是一种阳离子染料，在酸性条件下晶紫是一种阳离子染料，在酸性条件下带带正正电电荷，易与荷，易与 带带酸性基酸性基团团的生物大分子的生物大分子发发生静生静电电作用而形成离子配合作用而形成离子配合 物，已用于脱氧核糖核酸、干物，已用于脱氧核糖核酸、干扰扰素等的分光光度法分析。素等的分光光度法分析。结结晶紫晶紫结

14、结构中的氨基构中的氨基带带正正电电荷，硫酸荷，硫酸软软骨素的磺酸基和骨素的磺酸基和羧羧 基基带负电带负电荷，两者通荷，两者通过过静静电电引力和引力和输输水作用力形成水作用力形成络络合合 物，物，产产生生变变色效色效应应，吸光度降低。吸光度的降低量与硫酸，吸光度降低。吸光度的降低量与硫酸 软软骨素含量骨素含量线线性相关性相关YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO三、硫酸三、硫酸软软骨素的分光光度骨素的分光光度测测定法定法样样品品处处理理精密称取内容精密称取内容物物25mg25mg，置置于于100mL100mL量瓶中，加水适量，量瓶中，加水适量，超声超声处处理

15、理10mi10min n，加水定容，加水定容至至100mL100mL,过滤过滤，取，取续滤续滤液液4mL4mL,置置 于于100mL100mL量瓶中，加水至刻度，得量瓶中，加水至刻度，得样样品溶品溶液液。YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO三、硫酸三、硫酸软软骨素的分光光度骨素的分光光度测测定法定法样样品品测测定定取供取供试试品溶品溶液液1mL1mL，置置于于10mL10mL具塞刻度具塞刻度试试管中，加入管中，加入 pH5.0pH5.0的醋的醋酸酸醋酸醋酸钠缓钠缓冲冲液液1.0mL1.0mL和和结结晶紫并粗三溶液晶紫并粗三溶液 0.6m0.6mL L，加

16、水，加水至至10.0m10.0mL L，摇摇匀匀，3 30 0水浴保水浴保温温20min20min,放至室放至室 温。以水温。以水为为参比，参比，于于588nm588nm波波长长下下测测定吸光度。定吸光度。YOUR SITE HERE1.多糖多糖的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO三、硫酸三、硫酸软软骨素的分光光度骨素的分光光度测测定法定法注注释释硫酸软骨素是提取于动物软骨的黏多糖类物质，在 心血管疾病、关节病的防治等方面具有重要作用。硫 酸软骨素除了作为药用品外，大量的是作为改善关节 病的补充品，作为健康食品应用，在美国已经风行多 年，经过多年的应用，已经证明硫酸软骨素对改善老 年退行性关节

17、炎、风湿性关节炎有一定的效果。YOUR SITE HERE2.皂苷皂苷类类化合物化合物的的检检测测方法方法皂皂L苷苷O G类类O保健功效成分来源与保健功能保健功效成分来源与保健功能功效成分功效成分保健功能保健功能主要来主要来源源缓缓解体力疲解体力疲劳劳、增增强强免疫力、免疫力、红红景天苷景天苷抗氧化、抗抗氧化、抗辐辐射、射、人参、西洋参、人参、西洋参、人参皂苷人参皂苷提高缺氧耐受力、提高缺氧耐受力、辅辅助降血糖、助降血糖、保保护护心血管系心血管系统统红红景景天、天、绞绞股股蓝蓝YOUR SITE HERE2.皂苷皂苷类类化合物化合物的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO一、总总皂苷的分光光度皂苷

18、的分光光度测测定法定法测测定原理定原理-总总皂皂苷苷经经提提取取、PTPT大大孔孔吸吸附附树树脂脂柱柱预预分分离离后后，在在酸酸性性条条 件件下下，香香草草醛醛与与人人参参皂皂苷苷生生成成有有色色化化合合物物，以以人人参参皂皂苷苷Re Re 为对为对照品，照品，于于560nm560nm处处比色比色测测定。定。YOUR SITE HERE2.皂苷皂苷类类化合物化合物的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO一、粗粗多多糖糖的的苯苯酚酚硫硫酸酸分分光光光光度度测测定定一、总总皂苷的分光光度皂苷的分光光度测测定法定法法法样样品品处处理理1 1）固体固体样样品：称品：称取取1.0g1.0g左右左右样样品置品

19、置于于100mL100mL烧烧杯中，加入杯中，加入2040mL85%2040mL85%乙醇，超声波振乙醇，超声波振荡荡30min30min，再定容再定容至至50mL,50mL,摇摇 匀，放置，吸取上清匀，放置，吸取上清液液1.0mL1.0mL,挥挥干后以水溶解残渣，干后以水溶解残渣，进进行行柱分离。柱分离。2)2)液体液体样样品：含乙醇的酒品：含乙醇的酒类样类样品：准确吸品：准确吸取取1.0m1.0mL L样样品放于蒸品放于蒸 发发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进进行柱行柱层层析。非乙析。非乙 醇醇类类液体液体样样品：准确吸品：准确吸取取1.0mL1.0mL样

20、样品（如品（如浓浓度高或度高或颜颜色深，色深，需稀需稀释释一定体一定体积积后再后再取取1.0mL1.0mL）,直接直接进进行柱分离。行柱分离。YOUR SITE HERE2.皂苷皂苷类类化合物化合物的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO一、粗粗多多糖糖的的苯苯酚酚硫硫酸酸分分光光光光度度测测定定一、总总皂苷的分光光度皂苷的分光光度测测定法定法法法样样品品处处理理柱柱层层析：析：以以PTPT大孔吸附大孔吸附树树脂柱脂柱进进行行层层析分离，准确吸取析分离，准确吸取 上述已上述已处处理好的理好的样样品溶品溶液液1.0mL1.0mL上柱，上柱，用用15m15mL L水洗柱，以洗水洗柱，以洗 去糖分等水溶

21、性去糖分等水溶性杂质杂质，弃去洗脱液，再，弃去洗脱液，再用用20mL8520mL85%乙醇洗脱乙醇洗脱 总总皂苷，收集洗脱液于蒸皂苷，收集洗脱液于蒸发发皿中，于水浴上蒸干，以此作皿中，于水浴上蒸干，以此作 显显色用。色用。YOUR SITE HERE2.皂苷皂苷类类化合物化合物的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO一、粗粗多多糖糖的的苯苯酚酚硫硫酸酸分分光光光光度度测测定定一、总总皂苷的分光光度皂苷的分光光度测测定法定法法法样样品品测测定定显显色：在上述已色：在上述已挥挥干的蒸干的蒸发发皿中准确加皿中准确加入入0.2mL50.2mL5%香草香草醛醛冰冰 乙酸溶液，乙酸溶液，转动转动蒸蒸发发皿，使

22、残渣溶解，再加皿，使残渣溶解，再加入入0.8mL0.8mL高高氯氯 酸，混匀后移酸，混匀后移入入10mL10mL比色管中，塞比色管中，塞紧紧盖子，盖子，于于6060以下水以下水 浴加浴加温温15min15min取出，冷却后准确加入冰乙取出，冷却后准确加入冰乙酸酸5.0mL5.0mL，摇摇匀后匀后 以以1.0cm1.0cm比色皿比色皿与与560nm560nm处处与人参皂与人参皂苷苷ReRe标标准管同准管同时时比比色色。YOUR SITE HERE2.皂苷皂苷类类化合物化合物的的检检测测方法方法多多LO糖糖GO、葡葡聚聚糖糖的的分分光光光光度度测测定定法法二二注注释释(1)人参系五加科植物人参p

23、a n a xg i n s e n g C A Meycr的根，含有多种人参皂苷（ginsenoside），多数为达玛烷型皂苷，如人参皂苷Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rd等，少数为齐墩果酸型（C型）皂苷、如人参皂苷Re，由于苷元不同，达玛烷型 皂苷又分为20S-原人参二醇类皂苷（A型）和20S-原人参三醇类皂苷（B型）。A型 和B型皂苷酸水解后，分别得到人参二醇（panaxadial）和人参三醇（panaxatriol）。除人参外，五加科的西洋参、三七、刺人参、刺五加和葫芦科的绞股蓝中亦含有与人参皂苷类似的化合物。当保健食品原料配方中含有上述多种原料 时，即以本法“总皂苷（以人参

24、皂苷Re计）”报告检测结果。（2）对于人参、西洋参、绞股蓝纯品或者以其为主要原料加工的保健食品，按中 华人民共和国药典，以薄层色谱法进行鉴定试验，将受试品色谱与对照药材色谱及 对照进行比较确定其主要原料后，人参、西洋参制品仍以人参皂苷Re为对照品进行 检测、而绞股蓝制品以绞股蓝总皂苷（中国药品生物制品鉴定所）为对照品进行检 测，分别以“人参总皂苷”、“西洋参总皂苷”报告检测结果。（3）回收率：90%105%。一、粗粗多多糖糖的的苯苯酚酚硫硫酸酸分分光光光光度度测测定定一、总总皂苷的分光光度皂苷的分光光度测测定法定法法法YOUR SITE HERE3.黄黄酮酮类类化合物化合物的的检检测测方法方法

25、黄黄L酮酮O G类类O保健功效成分来源与保健功能保健功效成分来源与保健功能功效成分功效成分保健功能保健功能主要来主要来源源辅辅助降血脂、助降血脂、提高缺氧耐受力、提高缺氧耐受力、银银杏杏叶叶、山山楂楂、银银杏黄杏黄酮酮抗氧化、抗氧化、沙沙棘棘、红红花花、荷荷叶叶 山楂黄山楂黄酮酮 增增强强免疫力、免疫力、陈陈皮、花粉皮、花粉保保护护心血管系心血管系统统、黄黄芪芪、淫淫羊羊 保保护脑护脑神神经经系系统统藿、藿、蜂胶、葛根、蜂胶、葛根、甘草、桑叶、甘草、桑叶、桑葚、桑葚、鱼鱼腥草腥草YOUR SITE HERE3.黄黄酮酮类类化合物化合物的的检检测测方法方法黄黄L酮酮O G类类O一、总总黄黄酮酮的

26、分光光度的分光光度测测定法定法测测定原理定原理-黄黄酮类酮类化合物是具有苯化合物是具有苯骈骈吡喃吡喃环结环结构的一构的一类类天然化合物的天然化合物的 总总称，一般都具称，一般都具有有4 4位位羰羰基，且呈黄色。黄基，且呈黄色。黄酮类酮类化合物多分化合物多分 布于植物中，大多数以苷的形式存在。黄布于植物中，大多数以苷的形式存在。黄酮类酮类化合物中的化合物中的 3-3-羟羟基基、4-4-羟羟基基或或5-5-羟羟基或基或邻邻二位酚二位酚羟羟基与基与铝盐进铝盐进行行络络合合 反反应应，在碱性条件下生成，在碱性条件下生成红红色的色的络络合物。合物。YOUR SITE HERE3.黄黄酮酮类类化合物化合物

27、的的检检测测方法方法一、粗粗多多糖糖的的苯苯酚酚硫硫酸酸分分光光光光度度测测定定黄黄L酮酮O G类类O一、总总黄黄酮酮的分光光度的分光光度测测定法定法法法样样品品处处理理1 1）固体固体样样品：称品：称取取12g12g干燥的固体干燥的固体样样品，用品，用滤纸滤纸包包紧紧，置于，置于 平底平底烧烧瓶中加瓶中加入入50100mL7050100mL70%乙醇溶液，浸乙醇溶液，浸润润后，后，在在8080水水 浴下回浴下回流流2h2h，至黄至黄酮类酮类化合物基本提取完全。粗提取液冷化合物基本提取完全。粗提取液冷 却后，减却后，减压压抽抽滤滤，并用少，并用少量量70%70%乙醇溶液洗乙醇溶液洗涤涤残渣，合

28、并残渣，合并滤滤 液。液。在在5050下减下减压压蒸蒸馏馏，除去其中的乙醇，直至，除去其中的乙醇，直至烧烧瓶内溶瓶内溶 液呈无醇味。倒数液呈无醇味。倒数烧烧瓶内溶液，并瓶内溶液，并用用30m30mL L热热水水分分3 3次洗次洗涤烧涤烧 瓶，抽瓶，抽滤滤后，将后，将滤滤液液导导入分液漏斗中，入分液漏斗中，以以75m75mL L氯氯仿仿分分3 3次萃次萃 取脱脂，待完全分取脱脂，待完全分层层后，收集下后，收集下层层水溶液并定容水溶液并定容至至50mL50mL。YOUR SITE HERE3.黄黄酮酮类类化合物化合物的的检检测测方法方法一、粗粗多多糖糖的的苯苯酚酚硫硫酸酸分分光光光光度度测测定定黄

29、黄L酮酮O G类类O一、总总黄黄酮酮的分光光度的分光光度测测定法定法法法样样品品处处理理称称取取12g12g经预处经预处理的聚理的聚酰酰胺胺树树脂粉末，湿法装柱，用脂粉末，湿法装柱，用 水水饱饱和。吸取上述脱脂后的水溶和。吸取上述脱脂后的水溶液液12m12mL L，沿，沿层层析柱慢慢滴析柱慢慢滴 入柱内，放置一定入柱内，放置一定时间时间，待，待测测液被充分吸附后，液被充分吸附后，用用70%70%乙醇乙醇 或甲醇洗脱，流速或甲醇洗脱，流速为为1.0mL/min,1.0mL/min,至流出液基本无色，一般至流出液基本无色，一般 收收集集10m10mL L即可。上述洗出液用洗脱即可。上述洗出液用洗脱

30、剂剂（7070%乙醇或甲醇）定乙醇或甲醇）定 容后即可用于容后即可用于测测定。定。YOUR SITE HERE3.黄黄酮酮类类化合物化合物的的检检测测方法方法一、粗粗多多糖糖的的苯苯酚酚硫硫酸酸分分光光光光度度测测定定黄黄L酮酮O G类类O一、总总黄黄酮酮的分光光度的分光光度测测定法定法法法样样品品处处理理2 2）液体液体样样品：准确吸取品：准确吸取样样品品3.0mL3.0mL，定容定容至至50mL50mL后，直接以后，直接以75mL75mL氯氯仿仿分分3 3次萃取脱脂，其余步次萃取脱脂，其余步骤骤同上。同上。YOUR SITE HERE3.黄黄酮酮类类化合物化合物的的检检测测方法方法一、粗粗

31、多多糖糖的的苯苯酚酚硫硫酸酸分分光光光光度度测测定定黄黄L酮酮O G类类O一、总总黄黄酮酮的分光光度的分光光度测测定法定法法法样样品品测测定定准确吸取定量准确吸取定量样样品溶液，加品溶液，加入入3030%乙醇液乙醇液至至5mL5mL,各各加加5%5%亚亚硝硝 酸酸钠钠溶溶液液0.3mL0.3mL，振振摇摇后放后放置置5min5min，加加入入10%10%硝酸硝酸铝铝溶液溶液 0.3mL0.3mL,摇摇匀后放匀后放置置60min60min，加加1.0mol/1.0mol/L L氢氢氧化氧化钠钠溶溶液液2mL2mL,用用3030%乙醇定容至刻度，以零管乙醇定容至刻度，以零管为为空白，空白，摇摇匀后

32、匀后用用1c1cm m的比色的比色 皿，皿，在在510nm510nm处测处测定吸光度。定吸光度。YOUR SITE HERE3.黄黄酮酮类类化合物化合物的的检检测测方法方法、葡葡聚聚糖糖的的分分光光光光度度测测定定法法二二注意事注意事项项方法精密度：对同一样品在相同条件下，重复测定6次，其相对标准差 为4.4%。方法回收率：对总黄酮含量为1.52%的减肥茶加入相似浓度的芦丁标准 品进行回收试验，其平均回收率为103.2%。对于以葡萄、山楂等有色水果味原料的样品，可用未加铝盐试剂的样液 为空白或采用标准加入法进行测定，以避免样液颜色对测定干扰而引起 结果偏高。一、粗粗多多糖糖的的苯苯酚酚硫硫酸酸

33、分分光光光光度度测测定定黄黄L酮酮O G类类O一、总总黄黄酮酮的分光光度的分光光度测测定法定法法法YOUR SITE HERE3.黄黄酮酮类类化合物化合物的的检检测测方法方法原原花花LO青青G O素素二、原花青素的分光光度二、原花青素的分光光度测测定法定法测测定原理定原理-原花青素（也称原花青素（也称缩缩合合单单宁）是黄宁）是黄烷烷33醇的寡聚体与多聚醇的寡聚体与多聚 体，属多份体，属多份类类化合物。与其他酚化合物。与其他酚类类化合物不同，黄化合物不同，黄烷烷醇醇（缩缩合合单单宁、宁、单单体、双体等）在酸性介体、双体等）在酸性介质质中可与香草中可与香草醛醛反反应应，生成，生成在在500n500

34、nm m处处有最大吸收的有色物有最大吸收的有色物质质，可通，可通过过比色比色测测 其含量。其含量。YOUR SITE HERE3.黄黄酮类酮类化合物的化合物的检测检测方法方法原原花花LO青青G O素素二、原花青素的分光光度二、原花青素的分光光度测测定法定法样样品品处处理理1 1、植物材料、植物材料经经4 4倍体倍体积积丙丙酮酮+水水（7+37+3，体体积积比）或者比）或者经经60%60%甲醇提取甲醇提取，4040以下减以下减压压蒸蒸馏馏去除有机溶去除有机溶剂剂，水相再，水相再经经乙乙 醚醚洗洗涤涤后沉淀。后沉淀。2 2、冰冰冻冻干干燥燥的的固固体体原原青青花花素素制制剂剂，直直接接溶溶于于水水

35、中中（先先加加少少 量量甲甲醇醇助助溶溶），制制成成原原青青花花素素液液。原原青青花花素素液液与与55下下暗暗 环环境中保存境中保存备备用。用。YOUR SITE HERE3.黄黄酮类酮类化合物的化合物的检测检测方法方法原原花花LO青青G O素素二、原花青素的分光光度二、原花青素的分光光度测测定法定法样样品品测测定定1、用用锡锡箔箔将将试试管管（14mm*120mm）包包裹裹严严，仅仅留留试试管管 口口用用于于加加样样。向向管管内内加加入入试试样样0.5mL，再再加加3.0mL4%香草香草醛醛甲醇液混合，然后加甲醇液混合，然后加入入1,5mL浓盐浓盐酸，酸，彻彻底混底混匀，室温下匀，室温下显显

36、色色15min，也可在暗也可在暗环环境下境下进进行以上操作。行以上操作。最后最后在在500nm处处比色。比色。2、（0.1mg原花青素原花青素在在500nm处处的吸收的吸收值值为为0,55）YOUR SITE HERE3.黄黄酮类酮类化合物的化合物的检测检测方法方法原原花花LO青青G O素素二、原花青素的分光光度二、原花青素的分光光度测测定法定法注意事注意事项项（1）本方法的检测范围为（5500）*10-3mg/0.5mL样 液。精密度与准确度大于1*10-3mg。2反应试管应用清洁剂浸泡24小时，彻底洗涤干净。3进行比色时，用水作空白对照。（4）500nm处的OD值应控制在3以下。5试样中花

37、青素含量较高时，应从香草醛存在下所测A500nm值中减去无香草醛时所测值。6显色液应避光放置。YOUR SITE HERE3.黄黄酮类酮类化合物的化合物的检测检测方法方法原原花花LO青青G O素素三、原花青素的三、原花青素的铁盐铁盐催化比色催化比色测测定法定法测测定原理定原理原花青素氧化后能生成红色的花青素。通常用铁盐催化比 色法测定总量，利用硫酸高铁铵的催化作用，以盐（OD550）,与原花青素化学对照品比较，便可定量计算出样品中原花青素的含量。YOUR SITE HERE3.黄黄酮类酮类化合物的化合物的检测检测方法方法原原花花LO青青G O素素三、原花青素的三、原花青素的铁盐铁盐催化比色催化

38、比色测测定法定法样样品品处处理理准确称取胶囊内容物0.51.0g，加污水乙醇（遇醇溶性 较差的样品，可加入少量的蒸馏水促进溶解），溶解（对 于软胶囊取整粒称重后再用小刀割破，用超声波以乙醇多 次提取）,定容至100mL,摇匀，即得到样品储备液。再移 取0.51mL储备液（根据提取物浓度高低确定具体的量，使待测液原花青素浓度在0.050.20mg/mL范围内）定容至50mL,摇匀得到待测样品液。YOUR SITE HERE3.黄黄酮类酮类化合物的化合物的检测检测方法方法原原花花LO青青G O素素三、原花青素的三、原花青素的铁盐铁盐催化比色催化比色测测定法定法样样品品测测定定移取1.00mL待测液

39、依照上述标准曲线绘制同样操作，测定 OD550，查标准曲线，并计算原花青素的含量。YOUR SITE HERE3.黄黄酮类酮类化合物的化合物的检测检测方法方法原原花花LO青青G O素素三、原花青素的三、原花青素的铁盐铁盐催化比色催化比色测测定法定法注意事注意事项项1、线性范围：本法原花青素浓度在26.00416.0g范围内，最低检 出限为4g。2、准确性：添加浓度为52.00208.0g的标准（OD550在0.1570.520范围内），3次测定平均回收率在90.64%109.5%。3、精密度（重现性）：同一样品液8次测定，相对标准差为2.13%2.98%。4、干扰物质：常见的维生素，芦丁、类胡

40、萝卜素、食品抗氧化剂、各类 油脂基体未见明显干扰，由于多糖、蛋白质不溶于无水乙醇，故不 会干扰测定。YOUR SITE HERE4.酶酶、激素、激素及及内内源性源性物物质质的的检检测测方方法法 酶酶、LO激激GO素素O一、氯氯化高化高铁铁血血红红素的分光光度定法素的分光光度定法测测定原理定原理氯化高铁血红素是以新鲜猪血经冰醋酸法提取加工 而成的动物性补铁剂，能被人体黏膜上皮细胞分解为 原卟啉及二价铁，从而进入血液被机体吸收和利用。氯化高铁血红素制品以氢氧化钠溶液溶解和定容后，以1cm比色皿于波长385nm处进行检测，与标准品比较 进行定量。YOUR SITE HERE样样品品处处理理1固体样品

41、（胶囊或片剂）：准确称取一定量样品，一边 研磨，一边加入0.1mol/L氢氧化钠，使氯化高铁血红素 充分溶解（注意不能加热溶解，否则引起结果偏高），定 容后备检测。2液体样品：摇匀后准确吸取一定量样品，用0.1mol/L氢 氧化钠稀释后待测定。4.酶酶、激素及内源性物、激素及内源性物质质的的检测检测方法方法 酶酶、LO激激GO素素O一、氯氯化高化高铁铁血血红红素的分光光度定法素的分光光度定法YOUR SITE HERE1、准确称取经105干燥至恒重的氯化高铁血红素标准 品10.00mg，用0.1mol/L氢氧化钠充分溶解并定容至 100mL,容量瓶中。吸取此储备液10mL，加于100mL容 量

42、瓶中，加入0.1mol/L氢氧化钠定容至刻度，摇匀，配 成10g/mL的标准使用液。分别准确吸取标准使用液 0mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL至10mL比色刻度试管中，加0.1mol/L氢氧化钠至刻度，以零管作空白调零，于385nm处测定吸光度，并绘制氯 化高铁血红素含量吸光度标准曲线。2、氯化高铁血红素浓度在1.27.0g/mL范围内吸光度 与浓度呈直线关系4.酶酶、激素及内源性物、激素及内源性物质质的的检测检测方法方法 酶酶、LO激激GO素素O一、氯氯化高化高铁铁血血红红素的分光光度定法素的分光光度定法标标准曲准曲线绘线绘制制YOUR SITE HERE样样

43、品品测测定定取上述样品处理液依照标准曲线操作步骤测定385nm处 的吸光度值，依据标准曲线查得氯化高铁血红素含量。4.酶酶、激素及内源性物、激素及内源性物质质的的检测检测方法方法 酶酶、LO激激GO素素O一、氯氯化高化高铁铁血血红红素的分光光度定法素的分光光度定法YOUR SITE HERE4.酶酶、激素及内源性物、激素及内源性物质质的的检测检测方法方法 酶酶、LO激激GO素素OYOUR SITE HERE注意事注意事项项1.精密度和准确度重复测定同样一样品6次，其相对标准差（RSD）为2.1%；口服液样品标准添加回收率为93.1%95.4%.5.其他其他类类化合物的化合物的检测检测方法方法其

44、其LO他他GO保健功效成分来源与保健功能保健功效成分来源与保健功能功效成分功效成分保健功能保健功能主要来源主要来源蒽蒽醌类醌类通便、美容、通便、美容、减肥、增减肥、增强强免疫力免疫力芦芦荟荟、大黄、决明子、何首、大黄、决明子、何首乌乌三三萜类萜类灵芝三灵芝三萜萜、角、角鲨烯鲨烯抗氧化、增抗氧化、增强强免疫力、免疫力、抗抗辐辐射、射、缓缓解体力疲解体力疲劳劳、辅辅助降血脂、助降血脂、辅辅助保助保护护化学性肝化学性肝损伤损伤、改善睡眠、改善改善睡眠、改善记忆记忆灵芝、赤芝、紫芝（灵芝、赤芝、紫芝（孢孢子粉）、甘草、子粉）、甘草、黄芪、人参、黄芪、人参、泽泽泻、泻、积积雪草、山楂、雪草、山楂、女女贞

45、贞子、苦丁茶、五味子、子、苦丁茶、五味子、深海深海鱼鱼油（金油（金枪鱼枪鱼、沙丁、沙丁鱼鱼、鲨鱼鲨鱼、鲑鱼鲑鱼）壳聚糖壳聚糖（几丁聚糖）（几丁聚糖）增增强强免疫力、免疫力、辅辅助降血脂、助降血脂、辅辅助降血糖、助降血糖、辅辅助保助保护护骨粘膜骨粘膜虾虾、蟹壳的提取物、蟹壳的提取物YOUR SITE HERE测测定原理定原理蒽醌类化合物经酸水解用氯仿提取后，再用稀碱液萃取，与1,8二羟基蒽醌对照品比较，在分光光度计530nm处比 色定量。5.其他其他类类化合物的化合物的检测检测方法方法其其LO他他GO一、总总蒽蒽醌醌的分光光度的分光光度测测定法定法YOUR SITE HERE5.其他其他类类化合

46、物的化合物的检测检测方法方法样样品品处处理理准确称取均匀的样品粉末0.52g或适量，液体样品可取 10mL左右（视含量而定），置于200mL带冷凝管的锥形 瓶中，加5mol/L硫酸40mL，加热回流水解2小时，稍冷 后加氯仿30mL，水浴加热回流1小时，分离出氯仿液，再加氯仿30mL，加热回流水解30min，分离出氯仿液，再加氯仿20mL，如此反复，提取至氯仿无色位置，收集 氯仿提取液过滤，将滤液移至容量瓶中，用氯仿定容至刻 度（V1）,摇匀，精密吸取一定量（10mL左右）（V2）置分液漏斗中，用混合碱液（每次5mL）萃取至无色，将 萃取液移至50mL量瓶中，用混合碱液调至刻度。一、总总蒽蒽醌

47、醌的分光光度的分光光度测测定法定法其其LO他他GOYOUR SITE HERE5.其他其他类类化合物的化合物的检测检测方法方法样样品品测测定定精密吸取上述精密吸取上述对对照照备储备储液液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml（相当相当于于1,8二二羟羟基蒽基蒽醌醌0.116mg、0.232mg、0.348mg、0.464mg、0.580mg），），分分别别置置于于50ml量瓶中，加混合碱液至刻度，量瓶中，加混合碱液至刻度，摇摇匀，匀，20min后混合碱液作空白后混合碱液作空白对对照，照，与与530nm处测处测定和定和记记 录录相相应应的吸收光刻度的吸收光刻度值值，以以1,8

48、二二羟羟基蒽基蒽醌醌的的质质量量为为横坐横坐标标、吸光度、吸光度值为纵值为纵坐坐标绘标绘制制标标准曲准曲线线。一、总总蒽蒽醌醌的分光光度的分光光度测测定法定法其其LO他他GOYOUR SITE HERE注意事注意事项项1总蒽醌包括游离蒽醌和结合蒽醌，游离蒽醌测定，样品直接用氯仿提取至 无色，再用混合碱液多次萃取氯仿提取液制得供试品溶液，而结合蒽醌测定 系先用5mol/L的硫酸水解，再用氯仿提取，再用混合碱液多次萃取氯仿提取 液质的供试品溶液。2本方法线性范围为0.1160.580mg/mL3本方法的平均回收率为97.0%（n=3）。（4）精密度RSD=1.2%（n=5）。（5）比色时注意比色液

49、中是否混有氯仿微粒的干扰，而影响测定结果。5.其他其他类类化合物的化合物的检测检测方法方法一、总总蒽蒽醌醌的分光光度的分光光度测测定法定法其其LO他他GOYOUR SITE HERE测测定原理定原理几丁胺醣又称壳聚糖、脱乙酰甲壳素、甲壳胺，由甲壳素 在80120下经强碱长时间脱去乙酰基而得到，化学 名称为（1,4）-2-氨基-2-脱氧-D葡聚糖。脱乙酰度 为鉴定几丁胺醣纯度的重要指标。利用几丁胺醣呈弱碱性 的特点，用过量的盐酸中和溶解，再以甲基橙为指示剂，以氢氧化钠滴定中和剩余的盐酸，可间接测定几丁胺醣消 耗盐酸的量，从而计算出其脱乙酰度。5.其他其他类类化合物的化合物的检测检测方法方法其其L

50、O他他GO二、二、几丁胺几丁胺醣醣的脱乙的脱乙酰酰度滴定法度滴定法YOUR SITE HERE样样品品处处理理准确称取0.25g几丁胺醣样品，置于100mL烧杯 中，加入0.1mol/L盐酸40mL，在室温下用平头玻 棒捣碎试样，并搅拌使其充分溶解，放置2小时，5.其他其他类类化合物的化合物的检测检测方法方法其其LO他他GO二、二、几丁胺几丁胺醣醣的脱乙的脱乙酰酰度滴定法度滴定法YOUR SITE HERE样样品品测测定定加一滴0.1%甲基橙作指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠滴定 至红色刚好消失，保持1min，计算消耗的氢氧化钠标准溶 液的体积。5.其他其他类类化合物的化合物的检测检测方法方