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1、保健食品功效成分 检测技术与方法保健食品功效成分 检测技术与方法提 纲提 纲一保健食品的检验有关要求二保健食品理化检验及常用的分析方法 介绍三保健食品功效成分的检测四保健食品功效成分检测其它有关问题一保健食品的检验有关要求二保健食品理化检验及常用的分析方法 介绍三保健食品功效成分的检测四保健食品功效成分检测其它有关问题一、保健食品的检验有关要求1、检验依据2、检验要求1、主要检验依据1、主要检验依据 保健食品管理办法（1996年卫生部46令）保健食品注册管理办法 卫生部健康相关产品检验机构认定与管理办法（卫法监发1999第76号）卫生部发布的与保健食品相关的文件 保健食品通用卫生要求（1996
2、年）保健（功能）食品通用标准（GB16740）保健食品检验与评价技术规范（2003年版）食品国标 GB/T 50092003 企业标准2、检验要求2、检验要求保健食品检验机构 CDC系统 药检系统检验要求检验要求1.保健食品应具有与产品配方和申 报的保健功能相适应的功效成分 或特征成分，申报时须检测配方 中主要原料所含的功效成分或特 征成分。检验要求检验要求1.保健食品评审专家委员会可根据产品的具体配 方、工艺等相关资料，要求申报单位检测指定 的项目。2.检验机构受理保健食品检测时，申报单位应提 供该产品的配方、工艺及企业标准等相关资料。3.保健食品的功效成分检测工作应在SFDA和卫生 部原来
3、认定的检测机构进行。检验要求检验要求1.功效成分或指标性成分、含量及其检验方法 根据产品及原料确定，应与申报的功能有一定的关系 功效成分或指标性成分、含量及其检验方法应分别列出 依据以下二方面确定产品的功效成分（或标志性成分）并说明理由 与申报保健功能有关的功效成分 代表产品特性的标志性成分 按标准（规范）规定的检测方法检测 无标准检测方法的，应用比较权威的检测方法，并标明方法的出处 无相关检测方法的，申请人应提供详细的检测方法和方法学研究及验证 结果。研究及验证结果包括检验方法、线性范围、精密度、准确度和至 少5批加样回收率等内容及验证报告检验要求检验要求功效成分、特征成分、营养成分及卫生学
4、指标 的检测方法应根据其产品适用的方法学范 围选择以下进行测定：国家标准卫生部部颁标准行业标准国际上权威分析方法检验要求检验要求1.在没有相应的标准方法时，企业应建 立自己的企业标准。自主开发研究的 分析方法，申报单位需向检测机构提 供方法学研究的相关资料。检验要求1.质量标准 质量标准中文文本编写格式须符合GBT1.12000 标准化工作导则第一部分：标准的结构和编写规 则的规定 内容须包括资料性概述要素（封面、目次、前 言）、规范性一般要素（产品名称、范围、规范 性引用文件）、规范性技术要素（技术要求、试 验方法、检验规则、标志、包装、运输、储存、规范性附录）以及质量标准编写说明 附录中列
5、出检验方法和原料的质量标准检验要求1.质量标准（续）功效成分标示范围，具体标示方法 一般性功效成分（或标志性成分）按指标值标示，如总氨基酸、粗 多糖、膳食纤维等 功效成分（或标志性成分）需要限定范围的，可按指标值x%作为限 定范围，如总蒽醌、芦荟苷等。X值依据研制产品的检测资料确定 对于每日摄入量需严格控制的化合物，如褪黑素等，其指标范围上限 折算成每日摄入量不得大于允许摄入量 营养素补充剂中维生素类按指标值的0.8-1.8倍确定其指标范围，矿物质 按指标值的0.75-1.25倍确定其指标范围 质量标准编制说明中应详细提供功效成分（或标志性成分）指标值的确定 依据及理由二、保健食品理化检验及常
6、用的 分析方法介绍二、保健食品理化检验及常用的 分析方法介绍1、保健食品常见的检验项目2、保健食品检验常用的分析方法1、保健食品常见的检验项目1、保健食品常见的检验项目1.感官指标（性状）2.水分3.灰分4.净含量与负偏差5.崩解时限6.微生物限度7.重金属（Pb、As、Hg）8.农药残留量（六六六、滴滴涕）9.功效成分10.其它2、保健食品检验常用的分析方法2、保健食品检验常用的分析方法1.感官检查法2.物理检查法3.化学分析法4.物理化学分析法感官检查法感官检查法1.主要依靠人的感觉器官，即视觉、嗅觉、味觉等来鉴定被检物质的外观、颜色、气 味和滋味等。感官检查在对某些保健食品 进行卫生学评
7、价时具有重要的意义。物理检查法物理检查法1.测定被测物的物理性质，如密度、旋光、折光率等，用以判定物质的纯度。不溶 性固形物物。化学分析法化学分析法1.定性分析 化学反应的颜色、沉淀2.定量分析 重量分析 挥发法、萃取法、沉淀法 容量分析 中和法、氧化还原法、沉淀法、络合滴定 法物理化学分析法物理化学分析法1.比色和分光光度法2.原子吸收分光光度法3.荧光分析法4.原子荧光光谱法5.电位分析法6.层析法7.气相色谱法8.高效液相色谱法物理化学分析法物理化学分析法1.IR2.HPCE3.HPLC-MS/MS4.GC-MS/MS5.ICP-MS三、保健食品功效成分的检测三、保健食品功效成分的检测（
8、一）、保健食品原料（二）、保健食品功效成分类别和相应检测指标（三）、保健食品功效成分检测方法（四）、保健食品分析方法的建立和析方法学验证（五）、实例分析（一）、保健食品原料1.普通食品2.植物类（中草药）3.动物类4.真菌类5.益生菌类6.核酸类7.新资源食品8.营养素9.其他（三）保健食品类别和功效成分检测指标1、增强免疫力功能多糖（灵芝、虫草、香菇等）、腺苷、氨基酸、人参皂 苷类、花粉、党参、黄芪、伏苓、枸杞、人参、阿 胶、大枣、灵芝、灵芝孢子粉、桑葚、西洋参、螺 旋藻、冬虫夏草、蜂王浆、铁皮石斛、蜂胶、牛初 乳、杜仲、银耳、牛膝等2、辅助降血脂功能黄酮类、鱼油（EPA、DHA、DPA）、
9、亚麻酸、亚油酸、绞股蓝皂苷、卵磷脂、山楂、芦荟、丹参、牛磺酸、茶多酚、苦荞粉、钝顶螺旋藻、决明子、维生素E、银杏叶、荷叶、月见草油、沙棘油、红曲制剂、甲 壳素、植物甾醇、-谷维素等保健食品类别和功效成分检测指标3、辅助降血糖功能苦瓜总苷、三价铬、多糖类、黄酮类、红曲、三七、葛 根、泽泻、田七、何首乌、黄芪、黄精、人参、乌 梅、知母、生地、决明子、山药、山楂、红花、甘 草、有机铬、苦瓜、魔芋精粉、麦芽糖醇、木糖醇、山梨酸糖醇、异麦芽糖醇、乳糖醇、蜂胶、桑叶、D-甘露、糖醇、百合4、抗氧化功能茶多酚、黄酮类、维生素C、硒保健食品类别和功效成分检测指标5、辅助改善记忆功能EPA、DHA、DPA、Ve
10、、磷脂、牛磺酸6、缓解视疲劳功能B-胡萝卜素、叶黄素、维生素类7、促进排铅功能N-葡萄糖基L-半胱氨酸、谷胱甘肽、牛初乳粉、珍珠粉、维生素C、葡萄糖酸锌、酪蛋白磷酸肽、牛磺酸、木糖 醇8、清咽功能金银花、胖大海青果、冰片、薄荷脑9、辅助降血压功能黄酮类保健食品类别和功效成分检测指标10、改善睡眠功能褪黑素、松果体素、低聚糖11、促进泌乳功能12、缓解体力疲劳功能人参、西洋参皂苷类、多糖类、维生素类、淫羊藿苷13、提高缺氧耐受力功能角鲨烯、维生素E、角鲨烯、沙棘籽油、枸杞子、黄精、冬虫夏草、螺旋澡、胶股蓝、茶多酚、珍珠粉、牛 初乳、党参、红景天、马鹿葺、川芎、当归、刺五 加、灵芝、黄芪、三七、银
11、杏叶、红花保健食品类别和功效成分检测指标14、对辐射危害有辅助保护功能红景天、茶多酚、维生素C、当归、蜂胶、原花青素、灵 芝、银耳、维生素E、螺旋藻、壳聚糖、枸杞、银杏 叶、女贞子、黄芪、香菇、番茄红素、刺五加、-胡萝卜素等15、减肥功能决明子、芦荟、黄芪、山楂、番泻叶、黄酮、肉碱、大 黄酸、茶多酚、荷叶等保健食品类别和功效成分检测指标16、改善生长发育功能钙、锌、Vd、Vb6等17、增加骨密度功能钙、牛磺酸、Vd、Vc18、改善营养性贫血功能Fe，芦荟19、对化学性肝损伤有辅助保护功能黄酮、多糖保健食品类别和功效成分检测指标20、祛痤疮功能栀子、丹皮、银花、薄荷、芦荟、野菊花21、祛黄褐斑功
12、能芦荟、山药、茯苓、薏米22、改善皮肤水份功能23、改善皮肤油份功能保健食品类别和功效成分检测指标24、调节肠道菌群功能 益生菌、低聚糖类25、促进消化功能(成人和儿童)山楂、麦芽、鸡内金、山药、党参、莱服子、扁 豆、陈皮、伏苓、大枣、木香、神曲、佛手、生地、低聚果糖、牛磺酸、乳酸锌、果寡糖、微晶纤维素、膳食纤维、低聚半乳糖、大豆 低聚糖保健食品类别和功效成分检测指标26、通便功能制何首乌、火麻仁、决明子、枳实、莱菔子、桃 仁、百合、玉竹、阿胶、芦荟、黄芪、膳食 纤维、大豆膳食纤维、低聚果糖、低聚半乳 糖、大豆低聚糖、螺旋藻、橘皮、蜂蜜、山 楂、几丁聚糖、番泻叶、罗汉果、大黄、甘 草、郁李仁、
13、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、燕麦、桑椹、乳酸菌、决明子胶、瓜尔豆胶、阿拉 伯胶27、对胃黏膜损伤有辅助保护功能部分常见保健食品原料为主的 产品指标检测项目产品类型检测项目营养素补充剂产品中标识的营养素(包 括维生素和矿物质)五加科参类皂甙蕈类（灵芝、蘑菇等）膳食纤维冬虫夏草菌丝体腺苷红景天类红景天甙部分常见保健食品原料为主的 产品指标检测项目芦荟类芦荟甙大蒜类大蒜素螺旋藻类蛋白质、胡萝卜素、维生 素B1、维生素B2 茶叶类茶多酚魔芋类膳食纤维部分常见保健食品原料为主的 产品指标检测项目纤维素类膳食纤维磷脂类（原料）丙酮不溶物、乙醚不溶 物等红曲类洛伐它丁植物油类脂肪酸、维生素E 动物油类脂肪酸部分常
14、见保健食品原料为主的 产品指标检测项目初乳类免疫球蛋白鹿血类蛋白质、氨基酸蚂蚁类锰、蛋白质蚯蚓类蚓激酶（溶纤酶）、蛋 白质蛇、蝎等蛋白质、氨基酸部分常见保健食品原料为主的 产品指标检测项目角鲨烯角鲨烯蜂皇浆10-羟基癸烯酸蜂花粉、蜂胶总黄酮甲壳质产品脱乙酰度，产品如为复方 应检测原料的脱乙酰度蛋白质、氨基酸制品蛋白质、氨基酸褪黑素产品褪黑素 产品原料（褪黑 素）需提供原料纯度证明 并检测（三）保健食品功效成分检测方法1.保健食品中红景天甙的测定2.保健食品中大蒜素的测定3.保健食品中芦荟甙的测定4.保健食品中脱氢表雄甾酮（DHEA）的测定5.保健食品中吡啶甲酸铬的测定6.保健食品中盐酸硫胺、盐
15、酸吡哆醇、烟酸、烟 酰胺和咖啡因的测定保健食品功效成分检测方法7.保健食品中肌醇的测定8.保健食品中肉碱的测定9.保健食品中-亚麻酸、-亚麻酸的测定10.保健食品中免疫球蛋白IgG的测定11.保健食品中人参皂甙的高效液相色谱测定12.保健食品中原花青素的测定保健食品功效成分检测方法13.保健食品中核苷酸的测定14.保健食品中洛伐他丁的测定15.保健食品中中药功效成分的鉴别方法16.保健食品中银杏叶总黄酮的高效液相色谱测定1 7.保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低 聚糖的测定18.保健食品中金雀异黄素的测定保健食品功效成分检测方法19.保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定2 0.五味子类保健
16、食品中五味子醇甲、五味子甲 素和乙素的高效液相色谱测定21.保健食品中腺苷的测定22.保健食品中褪黑素的测定保健食品功效成分检测方法23.保健食品中总皂甙的测定24.保健食品中总黄酮的测定25.壳聚糖的游离氨基测定及脱乙酰度的计算26.蚓激酶活性的测定27.红曲产品中桔青霉素的测定（四）保健食品分析方法的建立 和析方法学验证 分析方法的选择 分析方法学验证的内容 分析方法建立实例分析分析方法的选择1.根据分析对象的性质选择准确、可靠的方法2.分析方法的科学性，应根据分析方法的评价参 数选择可以满足分析需要的分析方法3.分析方法的实用性，方法应简便易行，样品前 处理少、操作不费时、适合大批量样品
17、的测定、同时测定成本低、所用试剂和材料不特殊、种 类少、稳定性高、环保、毒性小等。4.方法要经过验证和评价分析方法学验证的内容1.精密度2.准确度3.灵敏度4.检测限5.检测上限6.定量限7.方法的适用范围8.最佳测定范围9.选择性和专属性10.耐用性11.不确定度评估精密度(precision)1.在一定条件下对同一被测物多次测定的结果与平均值偏离 的程 度。精密度反映了随机误差的大小。常用标准差（S）或相对标准偏差（RSD）表示。平行性（replicability）相同分析方法、样品、实验室、分析 人员、分析设备、分析时间 重复性（repeatability）相同分析方法、样品、实验室，但
18、分 析人员、分析设备、分析时间中至少有一项不同 再现性（reproducibility）相同分析方法、样品，但实验室，分析人员、分析设备、分析时间均不同精密度平行性平行性重复性重复性再现性再现性备注备注方法方法样品样品地点地点人员人员 时间时间 分散设备设备 浓度水平浓度水平333样品（样品（n）999室内室间准确度（accuracy）1.是用一个特定的分析程序所获得的分 析结果与假定的或公认的真实值之间 符合程度的度量。2.准确度反映分析方法的系统误差和随 机误差的综合指标。3.决定分析结果的可靠程度准确度的评价方法回收率X1-X0P（%）=100MP 加入的标准物质的回收率M加入标准物质的
19、量X1 加入标准样品的测定值X0 未知样品的测定值用回收率评价准确度需注意事项1.不同浓度水平，加入量与样品浓度相近（80%、100%、120%），不能超过方法的线性范围，加 标量不得超过待测物含量的3倍。2.用回收率评价准确度并非完全可靠。形态不同、与其它组分的关系不同。3.选定与被测样品相似的标准参考物更加可靠。4.样品中某些组分对被测成分产生的干扰（正、负），有时很难靠回收率实验发现。5.如果可能，用不同方法比较。灵敏度（sensitivity）1.一个方法的灵敏度是指该方法对单位 浓度或单位量的待测物质的变化所引 起的响应量变化的程度。通常工作曲 线的斜率（k）用于度量灵敏度。A=k
20、c+a检测限（limit of detection,LOD）1.指对某一特定的分析方法在给定的置 信水平内可以从样品中检测到待测物 质的最小浓度或最小量。即分析方法 所能识别的极限。分光光度法检测限的确定1.以扣除空白值后的吸光度为0.01相对 应的浓度值为检测限。2.标准质量0.013.检测限=4.标准吸光度-空白吸光度色谱法检测限的确定以最低检出量（或浓度）表示检测限。S=3NS最小响应值（峰高或峰面积）N噪音信号标准物质的量S最低检出量=标准物质的响应值注：标准物质的量尽量接近最低检出量，较为准确。检测上限（maximum detectability）指与标准曲线直线部分最高界点相应的浓
21、 度值。当样品中待测物质的浓度值超过 检测上限时，无法定量。定量限（limit of quantitation,LOQ）1.定量下限：在限定误差能满足要求的前提下，用特定分析方法 能准确地定量测定待测物质的最小浓度或量。通常 取SN=10N 对于消除了系统误差的特定方法来说，精密度要求 越高，则定量下限高出检测限越多。2.定量上限：在限定误差能满足要求的前提下，用特定分析方法 能准确地定量测定待测物质的最大浓度或量。对于消除了系统误差的特定方法来说，精密度要求 越高，则定量上限低于检测上限越多。方法的适用范围1.某一特定方法的检测下限至检测上限之间 的浓度范围，在此范围内可作定性或定量 的测定
22、。最佳测定范围（optimum concentration range）1.亦称有效测定范围，在限定误差能满足 要求的前提下，特定方法的测定下限至 测定上限之间的 浓度范围。在此范围内 能准确地定量测定待测物质的浓度或量。2.最佳测定范围应小于方法的适用范围，对测量结果的精密度要求越高，则相应 的最佳测定范围越小。检测限定量下限定量上限检测上限方法适用范围最佳测定范围斜率K=灵敏度选择性和专属性1.其它组分的存在不干扰2.一个选择性好的方法是由一系列专属性 的测定方法组成的。耐用性在测定条件有小的变动是，测定结果不受 影响的承受程度。样品溶液的稳定性 提取次数、时间 HPLC 流动相比例、PH
23、、（五）、分析方法建立实例分析实例1高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷实例1高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷 高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷 HPLC determination of Icariine in health food1 范围1 范围本方法规定了保健食品中淫羊藿苷的测定方法。本方法适用于以淫羊藿或淫羊藿提取物为主要原料生产的保健食品中淫羊藿苷 的测定。原理原理将粉碎的胶囊内容物、丸剂或液体试样经提取、浓缩等前处理后，根据高效液 相色谱紫外检测器定性定量检测。试剂试剂除非另有说明，在分析中仅使用重蒸水。3.1 乙醇 分析纯3.
24、2 乙腈 色谱纯3.3 提取液 稀乙醇（乙醇546mL1000mL）3.4 淫羊藿苷标准溶液 准确称量淫羊藿苷标准品0.012g，加入甲醇溶解并定容至 25mL。此溶液每mL含0.48mg淫羊藿苷。仪器仪器高效液相色谱仪：附紫外检测器（UV）。超声波清洗器。高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷 高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷 HPLC determination of Icariine in health food分析步骤分析步骤试样处理：固体试样：取20粒以上胶囊、10g以上丸剂试样进行粉碎，混匀，根据样品含量，称取0.5g 2.5g试样（精确至0.001g），精密加入50mL稀乙
25、醇，称重，超声提取60分钟，取出，放 冷至室温，用稀乙醇补重，过滤，取续滤液，经0.45m膜过滤后供液相色谱分析用。液体试样：取100mL以上液体试样，混匀，精密吸取50mL，减压浓缩至近干，用稀乙醇转移 至10mL量瓶中并稀释至刻度，摇匀。经0.45m膜过滤后供液相色谱分析用。液相色谱参考条件5.2.1 色谱柱：C18柱，5m，4.6250mm。5.2.2 柱温：2035。5.2.3 紫外检测器：检测波长270nm。5.2.4 高效液相色谱流动相：乙腈-水（26:74）。5.2.5 流速：1.0mL/min。5.2.6 进样量：1020L。5.2.7 色谱分析：取1020L试样溶液注入色谱仪
26、中，以保留时间定性，以试样 峰面积通过标准曲线计算含量。高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷 高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷 HPLC determination of Icariine in health food淫羊藿苷标准溶液色谱图高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷 高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷 HPLC determination of Icariine in health food5.3 标准曲线制备 分别配制浓度为0.0048361.0104mg/mL的淫羊藿苷标准溶液，在给定的 仪器条件下进行液相色谱分析，进样量10L，以峰面积对进样量（g）作标准曲线。分
27、析结果的表述由 y=a+bx 得（yx-a）/bV110-3100X=MV2式中：X 试样中淫羊藿苷的含量，g/100g；yx 试样峰面积；V1 试样稀释倍数，mL；M 试样质量，g；V2样品进样量，g。5.4.2 结果表示 计算结果保留三位有效数字。技术参数技术参数准确度 方法的回收率在95.0%105.0%之间。允许差 平行样相对误差2%。标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证1 仪器及试药1 仪器及试药1.1 仪器1.1.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器（UV）。岛津2010液相色谱仪；AgiLent 1100液相色谱仪；岛津2010/SPD-M液相色谱仪。1.1.2 超声波清
28、洗器。1.2 试剂除非另有说明，在分析中仅使用重蒸水。纯净水为Milli-Q纯水系统二次制备。1.2.1 乙醇 分析纯。1.2.2 乙腈 色谱纯。1.2.3 稀乙醇（乙醇546mL1000mL）。1.3 样品1.3.1 前烈立舒胶囊：澳美制药生产。1.3.2 中国劲酒：劲牌有限公司生产。1.3.3 海狗丸：深圳市宝和堂保健品有限公司出品。1.4 标准品：淫羊藿苷（批号：110737-200414，中国药品生物制品检定所提供）。标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证2 样品及处理2 样品及处理2.1 固体试样：取10粒胶囊内容物，混匀，取约0.5g，精密 称定；或取10g丸剂，研细，混
29、匀，取约2.5g，精密称定。精密加入稀乙醇50mL，称重，超声处理60分钟，放冷至 室温，再称重，加稀乙醇补足减失的重量。滤过，取续 滤液，经0.45m膜过滤后作为供试品溶液。2.2 液体试样：取100mL以上液体试样，混匀，精密吸取 50mL，减压浓缩至近干，用稀乙醇转移至10mL量瓶中并 稀释至刻度，摇匀。经0.45m膜过滤后作为供试品溶液。标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证3 对照品3 对照品精密称取淫羊藿苷标准品12.33mg，置25mL量 瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度，作为标准 品溶液。标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证4 线性及范围4 线性及范围精密量取标
30、准品溶液0.5mL，1mL、2mL，分别置25mL量瓶 中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取标准品溶液1 mL，2mL，3 mL，5 mL，10mL，分别置10mL量瓶中，用 甲醇稀释至刻度，摇匀。按给定的色谱条件，分别精密 吸取稀释后的标准品溶液10L，注入液相色谱仪，测 得峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标，以淫羊藿 苷标准品进样量（g）为横坐标，绘制标准曲线，计算 回归方程为：y=2.2260106x-1.3159104 ，r=0.9998淫羊藿苷在0.098644.932g范围内，进样量与峰面积积分 值呈良好的线性关系。（见附图1）标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证02
31、00000040000006000000800000010000000120000000123456淫羊藿苷进样量（g）峰面积淫羊藿苷标准曲线进样量（g）峰面积积分值0.098642164520.197284280110.394568504510.493212072990.986421414141.479632356712.46653874794.93211020132标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证5 检测限和定量限5.1 检测限 精密吸取标准品溶液（浓度为 0.009864mg/mL）1.0mL，置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条 件测定，进样量10L
32、。此浓度标准品的 峰高为相应噪音的峰高的3倍。故本方法 的检测限为0.986410-3g。标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证淫羊藿苷检测限色谱图标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证5.2 定量限 精密吸取标准品溶液（浓度为 0.009864mg/mL）1.0mL，置10mL量瓶中，加 甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件 测定，进样量10L，连续进样5次，结果 见下表。故本方法的定量限为9.86410-3g。标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证进样次数峰面积积分 值平均值RSD%124556244121.48%22483832404442402552459
33、7定量限测定结果标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证6 稳定性6 稳定性取同一供试品 溶液，按给定 色谱条件测定 16小时内淫羊 藿苷峰面积积 分值，数据见 表小时峰面积积分值平均值RSD%0119543011817750.90%2117150241171950611902528116495510119228312118178314118900916117880816小时内稳定性试验结果标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证7 精密度7 精密度7.1 重复性 取本品(批 号:QLS050107)12份（低浓度3份，中 间浓度6份，高浓 度3份），按样品 溶液制备方法制 备
34、，依给定色谱 条件测定含量试验重复 次 数取样量（g）含量（g/10 0g）平均值RSD%10.26741.08691.04562.04%20.24941.074530.24851.057840.49981.040950.50001.044060.50301.003970.50311.041980.50381.023690.50561.0474100.75031.0398110.76021.0399120.75101.0465重复性试验结果标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证7.2 仪器精密度 取 同一供试品溶液，按给定色谱条件重 复进样6次，测定峰 面积积分值进样次数峰面积积 分
35、 值平均RSD%1234369223460740.13%2234524032348346423425145235077362345878仪器精密度试验结果标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证7.3 中间精密度 试验 3人采用 3台不同的设备 对同一批（QLS050107批）样品按样品溶 液制备方法制 备，依给定色 谱条件测定含 量测定仪器测定结果（g/100g）平均RSD%1岛津2010液相色 谱仪1.061.071.42%2AgiLent 1100液 相色谱仪1.093岛津2010/SPD-M 液相色谱仪1.06中间精密度试验结果标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证8
36、 回收率8 回收率分别精密吸取标准品溶液（精密称取淫羊藿苷 29.32mg置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻 度，摇匀，即得。浓度：0.2932mg/mL）5.0、10.0、15.0mL，置100mL锥形瓶中，挥干溶剂，取本品(批号:QLS050107)0.25g，共9份，按样品溶液制备 方法制备供试液，按给定色谱条件测定，计算回 收率测得量-样品中含量回收率%=100%对照品加入量回收率试验结果回收率试验结果样 品 中 含 量(mg)对 照 品 加 入量(mg)测得量(mg)回收率%平均值总平均%RSD%2.65371.46604.106899.12%98.45%97.76%0.87%
37、2.65374.1338100.96%2.61404.065198.98%2.61404.0913100.77%2.60984.023796.45%2.60983.994194.43%2.77192.93205.614596.95%98.02%2.77195.682199.26%2.66845.570398.97%2.66845.580199.31%2.64335.479796.74%2.64335.483496.87%2.65794.39806.876395.92%96.81%2.65796.940997.39%2.67886.892995.82%2.67886.900996.00%2.63
38、706.939897.84%2.63706.942297.89%标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证9 专属性9 专属性取未加入淫羊藿药材的空白对照样品0.5g，按 样品溶液制备方法制备。按给定色谱条件 进行测定，结果未检测出淫羊藿苷的色谱 峰标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证专属性色谱图（色谱图从下到上依次为溶剂、缺淫羊藿阴性、淫羊藿苷对照品、样品）标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证10 耐用性10 耐用性分别采用3根不同商品规格的色谱柱，对同一批（QLS050107批）样品按试样溶液制备方法制备，依给定测定条件测定含量色谱柱规格色谱柱规格测定结果（g
39、/100g）测定结果（g/100g）平均平均RSD%RSD%Phenomenx Gemini 5，C18 110A，2504.6mm1.071.060.71%Agilent C18，2504.6mm1.06HiQ Sil C18W，2504.6mm，No.00W001691.06标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证11 不确定度11 不确定度P0.050P （k=2）标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证12 其他有关说明12 其他有关说明采用已建立的方法，测定了不同配方、不同 剂型的保健食品中淫羊藿苷的含量。标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证12.1 中国
40、劲酒中淫羊藿苷的含量测定供试品溶液的制备 精密量取本品50mL，减压浓缩至近干，用稀乙醇转 移至10mL量瓶中并稀释至刻度，摇匀，经0.45m滤膜滤过，即得。标准品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷标准品12.59mg，置25mL量瓶中加 甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.5mL，1mL，2mL，分别置25mL量 瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取对照品溶液1 mL，2 mL，3 mL，5 mL，10mL，分别置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。按给定的色谱条件，分别精密吸取稀释后的标准品溶液10L，注入 液相色谱仪，测得峰面积积分值。以峰面积积分
41、值为纵坐标，以淫羊 藿苷标准品进样量（g）为横坐标，绘制标准曲线。测定法 精密吸取供试品溶液10L，注入液相色谱仪，记录峰面积积分 值，通过标准曲线计算供试品溶液中淫羊藿苷的含量。标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证12.2 海狗丸中淫羊藿苷的含量测定供试品溶液的制备 取本品适量，研细，混匀，精 密称取2.5g，精密加入稀乙醇50mL，摇匀，称 重，超声处理60分钟，放冷至室温，用稀乙醇 补足减失的重量，滤过，取续滤液，经0.45m 滤膜滤过，即得。标准品溶液的制备、标准曲线的制备 同“中国劲酒 中淫羊藿苷的含量测定”项下。测定法 精密吸取供试品溶液20L，注入液相色谱 仪，记录峰
42、面积积分值，通过标准曲线计算供 试品溶液中淫羊藿苷的含量。标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证试样名称含量RSD%中国劲酒2.4010-4g/100mL0.54%海狗丸1.2810-2g/100g0.75%样品测定结果标准起草说明和方法学验证标准起草说明和方法学验证其他保健食品色谱图（1-中国劲酒；2-海狗丸；3-淫羊藿苷对照品）保健食品功效成分检测实例分析实例2HPLC-DAD-MS 法同时测定保健食品中六种大 豆异黄酮类成分的含量实例2HPLC-DAD-MS 法同时测定保健食品中六种大 豆异黄酮类成分的含量天然药物及保健食品概况一天然药物的特点 来源广泛 成分复杂多样 功效成分
43、不唯一 质量控制和评价难度大天然药物及保健食品概况二、保健食品的特点 概念 来源 食品、药食同源、维生素、矿物质 质量和安全性问题 标准 功效成分不明确 违法添加严重 外源性有害残留物控制 稳定性、可控性检测 一致性 均一性天然药物及保健食品概况三、天然药物及保健食品分析检测的发 展趋势 功效性检测 多组分、多成分、多指标、常量、微量、代谢产物 安全性检测 外源性有害残留物检测 内源性有毒物质的检测 稳定性、可控性检测 一致性 均一性色谱质谱技术在天然药物 和保健食品分析中的应用一功效成分检测（常量、微量）二安全性检测（有害残留、有毒成分）三稳定性和可控性（指纹图谱技术）HPLC-DAD-MS
44、在天然药物和保健食 品分析中的应用介绍HPLC-DAD-MS在天然药物和保健食 品分析中的应用介绍大豆异黄酮类成分概况大豆异黄酮类成分概况1.1.功效和用途：大豆异黄酮作为天然的植物雌激素，具有 明显的缓解更年期综合症和抗骨质疏松症的功效，同时 又有延缓衰老以及预防心血管疾病，降低乳腺癌、前列 腺癌等疾病的发病率等多种功效，近年来引起国内外广 泛的关注和研究。功效和用途：大豆异黄酮作为天然的植物雌激素，具有 明显的缓解更年期综合症和抗骨质疏松症的功效，同时 又有延缓衰老以及预防心血管疾病，降低乳腺癌、前列 腺癌等疾病的发病率等多种功效，近年来引起国内外广 泛的关注和研究。2.2.市场概况：我国
45、市场上有关大豆异黄酮类成分的中药、天然药物、植物提取物、保健食品（进口、国产）名目 繁多，质量参差不齐。市场概况：我国市场上有关大豆异黄酮类成分的中药、天然药物、植物提取物、保健食品（进口、国产）名目 繁多，质量参差不齐。3.3.标准概况：目前只控制1-2种成分标准概况：目前只控制1-2种成分大豆异黄酮类成分概况大豆异黄酮类成分概况OOHR1R3R2OH中文名称中文名称英文名称英文名称R1R2R3大豆苷元大豆苷元DaidzeinOHHH大豆苷大豆苷DaidzinO-GluHH染料木素染料木素GenisteinOHHOH染料木苷染料木苷GenistinO-GluHOH黄豆黄素黄豆黄素Glycit
46、einOHOCH3H黄豆黄苷黄豆黄苷GlycitinO-GluOCH3H大豆异黄酮类成分概况大豆异黄酮类成分概况1.1.目前大豆异黄酮类成分常见的分析方法：目前大豆异黄酮类成分常见的分析方法：紫外分光光度法紫外分光光度法 薄层扫描法薄层扫描法 高效液相色谱法高效液相色谱法2.2.这些方法在准确性、合理性、可操作性等方面 均有欠缺，大多数方法只报道了测定其中12 个成分的含量，不能较为全面地反应产品的真 实质量。这些方法在准确性、合理性、可操作性等方面 均有欠缺，大多数方法只报道了测定其中12 个成分的含量，不能较为全面地反应产品的真 实质量。S1 S2 S3 S4 标准现状标准现状1.1.多成
47、分同时测定？多成分同时测定？对照品 检测成本2.2.单成分 多成分单成分 多成分同时测定同时测定常规的常规的HPLC法用于多成分分析法用于多成分分析1、大豆苷2、黄豆黄苷3、染料木苷4、大豆苷元5、黄豆黄素6、染料木素132456色谱条件色谱条件液相色谱仪：Waters Alliance 2690高效液相色谱仪色谱柱：Agilent zorbax SB-C18（4.6150mm,5m）柱温：25 流动相：0.2%甲酸-乙腈（梯度）流速：1 ml/min检测波长：DAD流动相梯度表流动相梯度表时间时间0.2%甲酸（%）0.2%甲酸（%）乙腈（%）乙腈（%）0 min901018 min78222
48、5 min782243 min703045 min5050样品测定样品测定S4 S3 S1 S2 S5 CRS B 用一个对照品同时测定多个成分用一个对照品同时测定多个成分校正因子法校正因子法A HPLC-DAD-MS 法 用于多成分同时测定法 用于多成分同时测定校正因子（以染料木素计）化合物化合物浓度(mg/ml)浓度(mg/ml)校正因子校正因子 平均校正因子平均校正因子 RSD(%)RSD(%)染料木甙染料木甙0.2041.351.392.270.4081.380.8161.421.6321.392.041.353.061.42黄豆黄甙黄豆黄甙0.152.182.122.940.32.0
49、50.62.201.22.081.52.142.252.07黄豆黄素黄豆黄素0.02561.671.661.460.05121.620.10241.690.20481.640.2561.660.3841.66计算因子（以染料木素计）化合物化合物浓度(mg/ml)浓度(mg/ml)校正因子校正因子 平均校正因子平均校正因子 RSD(%)RSD(%)大豆甙大豆甙0.211.981.942.130.421.920.841.881.681.942.11.993.151.92大豆甙元大豆甙元0.0761.211.212.930.1521.260.3041.170.6081.230.761.181.141
50、.2两种方法测定结果比较中文名称中文名称常规法常规法替代法替代法含量含量(%)RSD(%)含量含量(%)RSD(%)大 豆 苷大 豆 苷0.301.080.321.65黄豆黄苷黄豆黄苷0.071.830.051.79染料木苷染料木苷0.621.260.611.05大豆苷元大豆苷元0.861.630.891.22黄豆黄素黄豆黄素0.061.960.081.92染料木素染料木素0.471.280.461.51FABCDE以单成分为对照同时测定多成分时，最大的困难 被测成分的识别？HPLC-DAD-MS 法 用于多成分同时测定MIX-CRS-7212Time0.002.505.007.5010.00