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1、 白细胞分类计数白细胞分类计数12白白白白细细胞的种胞的种胞的种胞的种类类 白细胞分类计数白细胞分类计数 【操作】【操作】1 1制备血涂片制备血涂片 2 2血涂片染色血涂片染色 3 3白细胞分类白细胞分类 4 4计算百分率计算百分率4血涂片的制备血涂片的制备血涂片的制备血涂片的制备黄慧黄慧器材器材器材器材推片推片载玻片载玻片一、一、一、一、载载玻片的清玻片的清玻片的清玻片的清洁洁 1.新玻片新玻片 1mol/L HCl泡泡24小小时水洗水洗干燥。干燥。2.旧旧载玻片玻片 肥皂水或其他合成洗肥皂水或其他合成洗涤剂水中煮沸水中煮沸20分分钟热水洗水洗自来水洗自来水洗干燥。干燥。7标标本本本本8毛毛
2、细血管血血管血 EDTA抗凝新抗凝新鲜全血全血 ：标本采集后本采集后4小时内制片小时内制片二、血涂片的制作二、血涂片的制作二、血涂片的制作二、血涂片的制作取血液一滴，置于取血液一滴，置于载玻片一端。玻片一端。以以边缘平滑的推片的一端，放在血滴前方，逐平滑的推片的一端，放在血滴前方，逐渐后移接触血滴，血液立即沿推片散开。后移接触血滴，血液立即沿推片散开。9二、血涂片的制作二、血涂片的制作二、血涂片的制作二、血涂片的制作将推片与载玻片将推片与载玻片保持保持3030-45-45夹夹角，平稳向前推进角，平稳向前推进至载玻片的另一端，至载玻片的另一端，玻片上即留下一薄玻片上即留下一薄层血膜。层血膜。10
3、1212良好血涂片的要求良好血涂片的要求（1）厚薄适宜）厚薄适宜（2）头体尾明显）头体尾明显（3）细胞分布均匀）细胞分布均匀（4）两侧留有空隙）两侧留有空隙（5）血膜边缘整齐）血膜边缘整齐 尾 体 头细胞呈单层或近细胞呈单层或近单层紧密排列单层紧密排列 血膜血膜厚薄厚薄的影响因素的影响因素 1.血滴大小血滴大小 2.推片与推片与载玻片之玻片之间的角度的角度 3.推片推片时的速度的速度 血滴愈大、角度愈大、推片血滴愈大、角度愈大、推片时速度愈快，速度愈快，则血膜血膜愈厚；反之血膜愈薄。愈厚；反之血膜愈薄。13较好较好用力不均匀用力不均匀用力不均匀用力不均匀载载玻片不清玻片不清玻片不清玻片不清洁洁
4、血膜血膜血膜血膜过过窄窄窄窄血膜血膜血膜血膜过过短短短短19推片推片推片推片边缘边缘不整不整不整不整齐齐血细胞染色血细胞染色血细胞染色血细胞染色黄慧黄慧血血血血细细胞染色胞染色胞染色胞染色瑞特染色法瑞特染色法吉姆吉姆萨染色法染色法混合染色法混合染色法21一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法【原理】【原理】1、染液成分、染液成分 瑞特染液是有酸性染料瑞特染液是有酸性染料伊伊红和碱性和碱性染料染料美美蓝组成的复合染料溶于成的复合染料溶于甲醇甲醇而成。而成。22一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法【原理】伊红伊红系不易解系不易解离的弱酸性染料，离的弱酸性染料，
5、通常用伊红钠盐通常用伊红钠盐（+），其），其有色部分是伊红，有色部分是伊红，为阴离子，所以伊为阴离子，所以伊红是红是酸性染料酸性染料。23一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法【原理】美蓝美蓝又名又名亚甲蓝亚甲蓝，为四甲基硫堇染料，通常为，为四甲基硫堇染料，通常为氯盐，即氯化美蓝（氯盐，即氯化美蓝（+l-l-）。其有色部分是）。其有色部分是美蓝，为阳离子，所以是一种美蓝，为阳离子，所以是一种碱性染料碱性染料。美蓝在空气中很容易氧化为一、二、三甲基美蓝在空气中很容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料（即天青），在制备瑞特染料时，硫堇等次级染料（即天青），在制备瑞特染料时，一部分
6、美蓝被氧化为各种天青。一部分美蓝被氧化为各种天青。24一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法 美蓝和伊红的水溶液混合后，生成一种疏水性伊美蓝和伊红的水溶液混合后，生成一种疏水性伊红化美蓝的中性沉淀物，即瑞特染料，其反应式为：红化美蓝的中性沉淀物，即瑞特染料，其反应式为：水中水中l ll l 瑞特染料在甲醇中溶解后，重新解离，与不同的瑞特染料在甲醇中溶解后，重新解离，与不同的细胞成分选择性结合而使细胞着色。细胞成分选择性结合而使细胞着色。25一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法【原理】【原理】2、细胞的受色原理、细胞的受色原理 细胞的受色既有胞的受色既有化学
7、化学亲和和作用，也作用，也有有物理吸附物理吸附作用。作用。26血血红蛋白、嗜酸性蛋白、嗜酸性颗粒粒等碱性物质等碱性物质+酸性染料伊酸性染料伊红粉粉红色色（嗜酸性物嗜酸性物质）核染色核染色质、嗜碱性、嗜碱性颗粒粒等酸性物质等酸性物质+碱性染料美碱性染料美蓝蓝色色或紫黑色（或紫黑色（嗜碱性物嗜碱性物质）中性中性颗粒粒+伊伊红和美和美蓝淡紫淡紫红色色（中（中性物性物质）27一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法 pH对细胞染色的影响胞染色的影响 1.在酸性在酸性环境中，染色偏境中，染色偏红；2.在碱性在碱性环境中境中，染色偏染色偏蓝。染色染色时应用用pH6.46.8的的磷酸磷酸盐缓
8、冲液冲液维持恒定的持恒定的酸碱酸碱环境。境。28一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法一、瑞特染色法【染色方法】【染色方法】1、用蜡笔在血膜两端画线，、用蜡笔在血膜两端画线，以防染色时染液外溢以防染色时染液外溢。2930勿冲洗，滴加等量或稍多的缓冲液，用勿冲洗，滴加等量或稍多的缓冲液，用吸耳球轻吹使染液与缓冲液吸耳球轻吹使染液与缓冲液充分混合，充分混合，染色染色5 10分钟分钟涂片干燥后用油镜分类计数100个白细胞李李四四1 12 23 3涂片干燥后加涂片干燥后加瑞特染液瑞特染液5-8滴滴覆盖整个血膜覆盖整个血膜0.51分钟分钟用细流水从血涂片的一端冲去染液，30秒以上（切勿先倒掉染液）【
9、染色结果】【染色结果】正常染色正常染色:肉眼观察：血膜外观呈淡紫红色肉眼观察：血膜外观呈淡紫红色 成熟红细胞成熟红细胞 粉红色粉红色 显微镜下显微镜下 白细胞白细胞 颗粒清楚颗粒清楚 呈现各自色彩呈现各自色彩 细胞核细胞核 紫红色紫红色 染色质结构清楚染色质结构清楚31染色偏酸染色偏酸:红细胞、嗜酸粒细胞颗粒偏红红细胞、嗜酸粒细胞颗粒偏红 白细胞核白细胞核 淡紫红色或不着色淡紫红色或不着色32染色偏碱：染色偏碱：红细胞红细胞 灰蓝色灰蓝色 中性粒细胞颗粒中性粒细胞颗粒 深暗、偏粗，紫黑色深暗、偏粗，紫黑色 嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞 暗褐色或紫黑色、蓝色暗褐色或紫黑色、蓝色33【注意事项】【注意
10、事项】1 1.染色偏酸或偏碱时，应更换缓冲液再染。染色偏酸或偏碱时，应更换缓冲液再染。2 2、染色时间、染色时间染液淡、室温低、细胞多、有核细胞多，则染色时间要长染液淡、室温低、细胞多、有核细胞多，则染色时间要长反之，可减少染色时间反之，可减少染色时间3 3、血膜干透后方可固定染色。血膜干透后方可固定染色。344 4、染色过程、染色过程玻片要放平玻片要放平染液不能过少染液不能过少染液覆盖全部血膜染液覆盖全部血膜缓冲液和染液混匀缓冲液和染液混匀【注意事项】【注意事项】【注意事项】【注意事项】354 4、冲洗染液、冲洗染液流水冲洗流水冲洗冲洗时间不能过长冲洗时间不能过长冲洗完后的血片应立即立于架上
11、冲洗完后的血片应立即立于架上染料颗粒沉积：甲醇或染料颗粒沉积：甲醇或WrightWright染液溶解染液溶解 【注意事项】【注意事项】【注意事项】【注意事项】36白细胞分类计数白细胞分类计数白细胞分类计数白细胞分类计数黄慧黄慧 白白细细胞分胞分类计类计数数法法【原理】【原理】将血液制成分布均匀的血涂片，经瑞特染将血液制成分布均匀的血涂片，经瑞特染色后置于显微镜下观察，根据各类白细胞的形色后置于显微镜下观察，根据各类白细胞的形态特征逐个进行分类计数，计数态特征逐个进行分类计数，计数100个白细胞个白细胞得出各种白细胞的百分率。同时注意观察各种得出各种白细胞的百分率。同时注意观察各种白细胞的形态变
12、化。白细胞的形态变化。38低倍镜观察：低倍镜观察：1.1.染色情况染色情况(满意、偏酸、偏碱）满意、偏酸、偏碱）2.2.细胞分布情况细胞分布情况油镜下分类计数：体尾交界处。油镜下分类计数：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。李李四四1 12 23 3白细胞分类白细胞分类39 白白细细胞分胞分类计类计数数法法白白细胞分胞分类记录方法方法（1 1）手工记录法：画）手工记录法：画“正正”字字（2 2）分类计数器法）分类计数器法某类白细胞（某类白细胞个数分类白细某类白细胞（某类白细胞个数分类白细胞总数）胞总数）100%100%40 【报告结果】【报告
13、结果】白细胞分类计数：白细胞分类计数：中性杆状核粒细胞中性杆状核粒细胞%中性分叶核粒细胞中性分叶核粒细胞%嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞%嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞%淋巴细胞淋巴细胞%单核细胞单核细胞%41 白白白白细细胞胞胞胞总总数与分数与分数与分数与分类类白白白白细细胞数的关系胞数的关系胞数的关系胞数的关系白细胞总数（白细胞总数（10109 9/L/L）应分类白细胞个数应分类白细胞个数4 504 501001004 410 10010 100101020 20020 200202030 30030 30030 40030 400【注意事项】【注意事项】1 1、分类计数的白细胞数量视白细胞总数而定、
14、分类计数的白细胞数量视白细胞总数而定42 2 2、由于各种白细胞大小不同在血片中分布不很均匀。、由于各种白细胞大小不同在血片中分布不很均匀。一般体积较小的淋巴细胞在头、体部较多，而尾部和两一般体积较小的淋巴细胞在头、体部较多，而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多，特别是异常大的细胞侧以中性粒细胞和单核细胞较多，特别是异常大的细胞常常在片尾末端出现。常常在片尾末端出现。43 分类最好是在血膜体尾交界处由血膜边缘向中央依分类最好是在血膜体尾交界处由血膜边缘向中央依次上下呈曲线向血膜中间移动，计数不同区域的白细胞，次上下呈曲线向血膜中间移动，计数不同区域的白细胞，以免重复计数缩小因细胞分布不匀的误差。以免重复计数缩小因细胞分布不匀的误差。443 3、血片中如有幼红细胞，也应逐个计数，不列入白细、血片中如有幼红细胞，也应逐个计数，不列入白细胞总数，而是报告分类计数胞总数，而是报告分类计数100100个白细胞的过程中见到个白细胞的过程中见到的幼红细胞数，并应注明其所属阶段。的幼红细胞数，并应注明其所属阶段。4 4、各类细胞所占百分率乘以白细胞总数、各类细胞所占百分率乘以白细胞总数/，即得每，即得每升血液中各类白细胞的浓度数（习惯称绝对值）。升血液中各类白细胞的浓度数（习惯称绝对值）。45谢谢46