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1、实验六实验六 酵母核糖核酸的分离酵母核糖核酸的分离 及组分鉴定及组分鉴定一一 实验原理实验原理1.酵母核酸中酵母核酸中RNA含量较高；含量较高；RNA可溶于可溶于碱性溶液，碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即可，由此即可得得RNA的粗制品。的粗制品。2.核糖核酸含有核糖核酸含有核酸、嘌呤碱、嘧啶碱和核酸、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸磷酸各组分；加硫酸煮沸可使其水解，从各组分；加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以定性测出上述组分的存在。水解液中可以定性测出上述组分的存在。二二 实验步骤实验步骤1.取取10g 酵母酵母放
2、入研钵放入研钵用量筒量取用量筒量取60ml 0.04mol/L NaOH 溶液（溶液（202020三次三次添加）添加）倒入锥形瓶倒入锥形瓶在沸水浴中加热在沸水浴中加热20min冷却冷却2.倒入大离心管，盖上盖子倒入大离心管，盖上盖子离心离心10min,V=5000上清液倒入烧杯上清液倒入烧杯A用量筒量取用量筒量取20ml酸性乙醇溶液酸性乙醇溶液倒入烧杯倒入烧杯B然后将然后将烧杯烧杯A液缓缓倒入烧杯液缓缓倒入烧杯B,注意不断搅拌注意不断搅拌待待核酸沉淀下来后离心核酸沉淀下来后离心5min,V=5000弃去上弃去上清液清液3.沉淀加入沉淀加入10ml 95乙醇乙醇搅拌均匀搅拌均匀倒入小离心管中倒入
3、小离心管中离心离心5min,V=5000弃弃去上清液去上清液沉淀中加入沉淀中加入10ml乙醚乙醚搅拌搅拌均匀均匀过滤过滤滤纸上的物品即为核酸滤纸上的物品即为核酸自然风干一星期自然风干一星期4.取取200mg风干的核酸风干的核酸放入小烧杯放入小烧杯用量筒量取用量筒量取10ml 1.5mol/L H2SO4溶液倒入溶液倒入小烧杯小烧杯用玻璃棒搅拌使其溶解用玻璃棒搅拌使其溶解在在沸水浴中加热沸水浴中加热10min制成水解液制成水解液然后进然后进行各项的组分鉴定行各项的组分鉴定4.1 嘌呤碱鉴定：嘌呤碱鉴定：取取1ml水解液水解液加入过量浓氨水加入过量浓氨水再加再加入入1ml0.1mol/LAgNO3溶液溶液观察有无沉淀观察有无沉淀4.2 核糖鉴定核糖鉴定 取取1ml水解液于试管中水解液于试管中加入三氯化铁浓加入三氯化铁浓盐酸溶液盐酸溶液2ml再加入苔黑酚乙醇溶液再加入苔黑酚乙醇溶液0.2ml放沸水浴中煮放沸水浴中煮10min观察溶液观察溶液是否变绿色是否变绿色4.3 磷酸鉴定磷酸鉴定 取取1ml水解液于试管中水解液于试管中加入加入1ml定磷试定磷试剂剂在水浴中加热在水浴中加热观察溶液是否变蓝观察溶液是否变蓝色色