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1、酵母核糖核酸的分离酵母核糖核酸的分离及组份鉴定及组份鉴定实 验 七生物化学实验一 实 验 目 的1.了解并掌握稀碱法提取RNA的基本 原理及方法。2.了解RNA的化学组成及定性鉴定的 原理与操作过程。生物化学实验二 实 验 原 理 实验室：工业生产：核酸提取方法（有活性的）（无活性的）苯酚法去污剂法盐酸胍法 稀碱法-本实验浓盐法生物化学实验 组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后,上清液用乙醇
2、沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA。二 实 验 原 理生物化学实验 酵母含RNA达2.67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。酵母中的核糖核酸可溶于碱，在碱提取液中加酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此得到粗核糖核酸。核糖核酸含有核糖，嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。二 实 验 原 理生物化学实验鉴定方法：(1)磷酸与定磷试剂作用能产生蓝色的钼蓝沉淀。(2)核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。(3)嘌呤碱与硝酸银产生白色的嘌呤银化
3、合物沉淀。嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键易于水解 二 实 验 原 理生物化学实验仪器：试管；试管架；烧杯；移液管；量筒；滴管；水浴锅；离心机；离心管；锥形瓶。原料：干酵母粉试剂：（1）0.04molL氢氧化钠溶液；（2）酸性乙醇溶液；（3）1.5molL硫酸；（4）硝酸银溶液；（5）1mol/L浓氨水；（6）三氯化铁-浓盐酸溶液；（7）苔黑酚乙醇溶液；（8）抗坏血酸；（9）钼酸铵试剂。三 仪器、原料和试剂 生物化学实验四 操 作 步 骤（一）酵母RNA的提取（1）将2g酵母悬浮于10ml 0.04 molL氢氧化钠溶液中；（2）在沸水浴上加热30分钟后，将匀浆液转移至10ml离心管中，冷却。配
4、平离心(3000rmin)15分钟；（3）将上清液缓缓倾人盛有4ml酸性乙醇溶液的另一10ml离心管中。注意要缓缓倾入，且用胶头吸管吹匀；（4）离心(3000rmin)3分钟，弃去上清液；生物化学实验四 操 作 步 骤（二）RNA成分的鉴定 在沉淀中，加入1.5 molL硫酸溶液3ml，在沸水浴中加热至少10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。（1）戊糖：取1支试管加入水解液5滴、三氯化铁浓盐酸溶液10滴和苔黑酚乙醇溶液2滴。用木夹夹好后放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。（2）嘌呤碱：在1支干净试管内加入水解液5滴，再逐滴加入15滴氨水，然后加入约5滴硝酸银溶液，放置片刻，观察有无白色嘌呤碱的银化合物沉淀。（3）磷酸：取1支试管，加入水解液10滴和定磷试剂10滴。在水浴中加热，观察溶液颜色变化，溶液变蓝色，说明磷酸的存在。生物化学实验五 思 考 题1、如何得到高产量RNA的粗制品？2、本实验RNA组分是什么？怎样验证的？