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1、第1章 发酵工程第2节 微生物的培养技术及应用二 微生物的选择培养和计数选择培养基1.概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。类型条件分离得到的菌种改变培养条件7080的高温添加某种化学物质加入青霉素高浓度食盐特殊碳、氮源石油是唯一碳源营养缺陷不加碳源不加氮源2.类型：水生栖热菌酵母菌、霉菌等真菌金黄色葡萄球菌能消除石油污染的微生物自养型微生物固氮菌思考与讨论选择培养基配方的设计尿素的立体结构尿素的立体结构尿素尿素施入土壤后，会施入土壤后，会被土壤中被土壤中的的某些某些细菌细菌分解成分解成NHNH3 3，再，再被转化为被转化为NO
2、NO3 3-、NHNH4 4+等被植物吸收等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生脲酶催化尿素分解产生NHNH3 3，NHNH3 3可以作为细菌生长的氮源可以作为细菌生长的氮源1、你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行分离2、该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？配方一：配方一：培养培养细菌细菌配方二：配方二：培养可以培养可以分解尿素的细菌分解尿素的细菌1、从物理性质看此培养基属于哪类？从用途上属于哪类培养基？固体培养基配方二是以尿素作唯一
3、氮源的选择培养基微生物的选择培养1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？思考稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。稀释涂布平板法铲取土样，铲取土样，将样品装入纸袋中将样品装入纸袋中将将10g10g土样加入盛有土样加入盛有90mL 90mL 无菌水无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。90mL90mL无菌水无菌水11011021 mL110311041105110611071 mL1 mL1 mL1 mL1 mL取取1mL1mL上清液上清液加入盛有加入盛有9mL9mL无菌水无菌水的试管中，依次的试管中，
4、依次等比稀释。等比稀释。9 mL 9 mL 无菌水无菌水取取0.1mL0.1mL菌液，菌液，滴加到培养基表面。滴加到培养基表面。将涂布器放在火焰将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精上灼烧，待酒精燃尽燃尽、涂布器涂布器冷却冷却后，再进后，再进行涂布。行涂布。用涂布器将菌液用涂布器将菌液均匀地均匀地涂布在培涂布在培养基表面。涂布时可养基表面。涂布时可转动转动培养皿，培养皿，使涂布均匀。使涂布均匀。将涂布器浸在将涂布器浸在盛有酒精的烧杯盛有酒精的烧杯中。中。稀释涂布平板法恒温培养箱恒温培养箱稀释稀释10103 3倍倍稀释稀释10104 4倍倍稀释稀释10105 5倍倍空白对照 待待涂布的菌液被培养基吸收后
5、，将涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置平板倒置，放入，放入30-3730-37的恒温培养的恒温培养箱中，培养箱中，培养1-2d1-2d。菌落培养检验培养基是否受到杂菌污染微生物的数量测定稀释涂布平板法1.测定原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌稀释稀释10103 3倍倍稀释稀释10104 4倍倍稀释稀释10105 5倍倍空白对照空白对照一般选择菌落数在30-300的平板进行计数微生物的数量测定稀释涂布平板法2操作要求：样品的稀释度直接影响平板上的菌落数目通常选择一定稀释范围的样品液进行
6、培养，以保证获得菌落数为30-300，适于计数的平板。在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值3.注意：利用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板观察到的只是一个菌落统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示用平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什么？不不能能，平平板板划划线线法法最最开开始始的的划划线线很很可可能能菌菌类类会会长长成成一一片片，导导致致无无法法计计数数，此此外外灼灼烧烧接接种种环环的的时时候候也会杀死一部分菌类。也会杀死一部分菌类。比较平板划线法稀释涂布平板法工具原理特点平板示图共同点连续划线梯度稀释
7、两种纯化方法的比较接种环涂布器通过接种环在琼脂固体培养基的表面_操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。（不能计数）方法简单，但不适宜计数单菌落更易分开，可以计数，但操作复杂都可形成菌落，用于菌种的分离将菌液进行一系列的_，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞。（可计数）微生物的数量测定显微镜直接计数法原理原理:利用特定的利用特定的_或或_在在_下观察、计下观察、计数，然后再计算数，然后再计算_的样品中微生物的数量。的样品中微生物的数量。细菌计数板细菌计数板血细胞计数板血细胞计数板显微镜显微镜一定体积一定体积优点：优点：缺点：缺点：快速、直观快速、直观统计结果一般是统计结果
8、一般是_，不能区分死菌与活菌，不能区分死菌与活菌活菌数和死菌数的总和活菌数和死菌数的总和（2）按功能分类 培养基选择培养基鉴别培养基特点：作用：根据某种微生物的特殊营养需求配制选择，分离实验设计原则（1）设立重复组统计某一稀释度下平板上的菌落数时，要至少涂布3个平板作重复组，以增强实验结果的说服力和准确性（2）设立两种对照组判断培养基是否有杂菌污染：同时将未接种的培养基进行培养判断选择培养基是否具有筛选作用：同时将接种后的完全培养基进行培养（2）按功能分类 培养基选择培养基鉴别培养基特点：作用：根据某种微生物的特殊营养需求配制选择，分离特点：作用：加入能与目的菌的代谢产物发生显色反应的指示剂鉴定名称主要化学物质变化主要用途刚果红培养基刚果红纤维素被分解后出现透明圈鉴别纤维素分解菌伊红伊红伊红伊红-美蓝培美蓝培美蓝培美蓝培养基养基养基养基伊红 美蓝出现在金属光泽的深紫色菌落鉴别大肠杆菌淀粉培养基可溶性淀粉淀粉被水解后出现淀粉水解圈鉴别产淀粉酶菌株