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1、实验三实验三 微生物的分布微生物的分布与消毒灭菌与消毒灭菌实验目的实验目的1 1 了解培养基的种类与细菌的生长现象。了解培养基的种类与细菌的生长现象。2 2 掌握空气及咽喉部的微生物检查方法。掌握空气及咽喉部的微生物检查方法。3 3 掌握皮肤上的微生物检查与皮肤消毒试验。掌握皮肤上的微生物检查与皮肤消毒试验。4 4 掌握紫外线杀菌试验的原理及方法。掌握紫外线杀菌试验的原理及方法。5 5 掌握细菌药敏试验的原理意义及结果判定。掌握细菌药敏试验的原理意义及结果判定。实验内容实验内容2.2.细菌分布（空气及咽喉部的微生物检查细菌分布（空气及咽喉部的微生物检查,操作，每操作，每组一份）组一份）4.4.
2、紫外线杀菌试验（操作，每组一份）紫外线杀菌试验（操作，每组一份）5.5.细菌药敏试验（操作，每组一份）细菌药敏试验（操作，每组一份）实验用品实验用品l 固体、半固体、液体培养基及培养物，固体、半固体、液体培养基及培养物，菌菌种，种，接种环，酒精灯，蜡笔，接种环，酒精灯，蜡笔，3737培养箱，培养箱，7575酒精棉球，紫外线灯，黑纸片，药敏纸酒精棉球，紫外线灯，黑纸片，药敏纸片，镊子等。片，镊子等。培养基的种类及细菌的生长现象培养基的种类及细菌的生长现象培养基按物理性状分为培养基按物理性状分为固体培养基固体培养基(2-3%)(2-3%)半固体培养基半固体培养基 (0.2-0.5%)液体培养基液体
3、培养基鉴别培养基鉴别培养基培养基按用途可分为培养基按用途可分为基础培养基基础培养基营养培养基营养培养基选择培养基选择培养基厌氧培养基厌氧培养基金黄色葡萄球菌菌落 （S型菌落）结核分枝杆菌菌落（R型菌落）肺炎链球菌（M型菌落）细菌细菌在固体培养基上形成在固体培养基上形成的菌落的菌落菌菌苔苔半固体半固体培养基：培养基：观察细菌动力液体液体培养基培养基：可观察到细菌不同的生长现象细菌的分布细菌的分布1.1.原理：原理：细菌无处不在，在空气、自来水、土壤、手指、桌面、货币、手机、毛巾等都有细菌的存在；有普遍或特殊、相同或不同的生长条件2 2.方法方法：(1)空气（把无菌固体培养基打开在空气中暴露15m
4、in，盖好标记，底部朝上放入37培养箱培养24h）(2)咽喉（把无菌固体培养基打开，对准，用力咯三下，盖好标记，底部朝上放入37培养箱培养24h）皮肤上的微生物检查与皮肤消毒皮肤上的微生物检查与皮肤消毒试验试验 2 方法：方法：(1)把无菌固体培养基底面外用蜡笔划成10格并记号 (2)5个同学每人两格，单号格用未消毒的右手食指在培养基上按手印，双号格，用75酒精棉球消毒的手指按手印 (3)盖好标记，底部朝上放入37培养箱培养24h。1 原理：原理：消毒剂对细菌有毒性作用，使菌体蛋白质变性或凝固等。主要用于人体表面和医疗器械、周围环境的消毒。紫外线杀菌实验紫外线杀菌实验原理原理 紫外线中波长为2
5、00-300nm者具有杀菌能力，其中265-266nm265-266nm的杀菌作用最强。其杀菌作用主要是因为DNA吸收了紫外线引起胸腺嘧啶形成二聚体胸腺嘧啶形成二聚体，从而干扰了DNA的复制，轻则发生突变，重则导致死亡。紫外线杀菌力强而稳定，但穿透力弱穿透力弱，不能通过玻璃和纸张，因此，只适用于直接照射的物体表面消毒或空气物体表面消毒或空气消毒。紫外线杀菌实验紫外线杀菌实验方法：方法：（先用无菌接种环取葡萄球菌菌种少许在无菌固体培养基上划线接种）中央，放 置在距紫外线60-100cm处，直接接受紫外线照射30min；3.照射完毕，取出黑纸片，盖好琼脂平板，放37温箱孵育24h，观察结果。药敏试
6、验药敏试验药敏试验的目的：药敏试验的目的：检出细菌对药物的敏感性，以确定病原细菌对哪种药物敏感药物敏感实验的临床意义药物敏感实验的临床意义 指导临床用药、及时控制感染K-B（纸片扩散）法（纸片扩散）法原理原理抑菌圈药物可干扰细菌的代谢，阻碍和影响细菌细胞壁的合成、膜的通透性及核酸和蛋白质的合成，不同的细菌种类或菌株，对同一药物的敏感性不同，通过将药敏纸片放于已接种细菌的培养基上，测量其抑制细菌生长所产生的抑菌圈的大小来判定病原菌对抗菌类药物的敏感性K-B(纸片扩散）法纸片扩散）法方法方法无菌接种环取菌固体培养基上划线接种放置含药纸片37温箱孵育24h24mm15mmK-B法结果结果抑菌圈直径用毫米尺量取用毫米尺量取抑菌圈直径抑菌圈直径,根根据参照表判断据参照表判断结果结果24mm15mmK-B法实验注意事项：实验注意事项：l1 观察液体培养基中细菌的生长现象时不要摇动试管l2 培养基放入温箱时要底部朝上l3 皮肤上微生物检查时食指要轻按，不要压烂培养基l4 紫外线杀菌试验时划线接种不要划烂培养基，照射时间要充分l5 药敏试验要把药敏纸片贴牢固