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1、实验目的实验目的n1.1.学会不同部位细菌的检查方法。学会不同部位细菌的检查方法。n2.2.掌握常用的消毒灭菌方法及其仪器的使用。掌握常用的消毒灭菌方法及其仪器的使用。n3.3.了解药敏实验的结果及意义。了解药敏实验的结果及意义。第1页/共17页实验内容与方法实验内容与方法n一、细菌的分布检查一、细菌的分布检查n1.1.空气中细菌检查空气中细菌检查n2.2.咽喉部细菌的检查咽喉部细菌的检查n二、消毒灭菌的实验二、消毒灭菌的实验n1.1.皮肤消毒实验皮肤消毒实验n2.2.热力灭菌实验热力灭菌实验n3.3.紫外线杀菌实验紫外线杀菌实验n4.4.常用消毒灭菌器及除菌滤器介绍常用消毒灭菌器及除菌滤器介
2、绍n三、药物敏感实验三、药物敏感实验 n常用消毒器械的介绍常用消毒器械的介绍 第2页/共17页一、细菌的分布检查一、细菌的分布检查n1.1.空气中细菌的检查空气中细菌的检查 材料材料:琼脂平板琼脂平板 方法方法:将制作好的琼脂平板敞开放置在空气中将制作好的琼脂平板敞开放置在空气中5min-10min,5min-10min,后盖上皿盖，然后分别做好标记，后盖上皿盖，然后分别做好标记，3737度温箱内培养度温箱内培养18-2418-24小时后观察结果。小时后观察结果。意义：意义：检测环境达标与否检测环境达标与否第3页/共17页 2.2.咽喉部细菌的检查咽喉部细菌的检查(1)(1)咽喉拭子法：咽喉拭
3、子法：材料：材料：血平皿、咽拭子血平皿、咽拭子 方法：方法：n1.1.用干净棉签咽部取材；用干净棉签咽部取材；n2.2.将取得样本以分区划线形式接种在血平皿上；将取得样本以分区划线形式接种在血平皿上；n3.37 3.37 温箱内孵育温箱内孵育2424小时后观察结果。小时后观察结果。第4页/共17页(2)(2)咳碟法咳碟法取血平板一个，将盖打开，置于距口腔取血平板一个，将盖打开，置于距口腔1010厘米处，用力咳嗽数次，然后盖好，置厘米处，用力咳嗽数次，然后盖好，置3737度温箱培养度温箱培养18-2418-24小时观察结果。小时观察结果。第5页/共17页二、消毒灭菌的实验二、消毒灭菌的实验l1.
4、1.皮肤消毒试验（操作）皮肤消毒试验（操作）l每两名学生用一个琼脂平板，先在平板底部用蜡笔每两名学生用一个琼脂平板，先在平板底部用蜡笔画分画分5 5格，标明序号。格，标明序号。l两人用未消毒手指分别在两人用未消毒手指分别在1 1、2 2格内涂布。格内涂布。l然后用然后用2%2%碘酒消毒手指后再分别涂抹碘酒消毒手指后再分别涂抹3 3、4 4格，余下格，余下第第5 5格作为空白对照。格作为空白对照。l盖上皿盖，置盖上皿盖，置3737度温箱培养度温箱培养2424小时观察结果。小时观察结果。第6页/共17页n皮肤消毒实验皮肤消毒实验 材料：材料：琼脂平板、琼脂平板、2.5%2.5%碘酒、碘酒、75%7
5、5%酒精棉球酒精棉球 方法：方法：3737温箱内培养温箱内培养2424小时小时 意义：意义：比较皮肤消毒前后细菌分布情况比较皮肤消毒前后细菌分布情况 消毒前消毒后第7页/共17页2.2.热力灭菌实验（示教）热力灭菌实验（示教）l取取4 4支肉汤培养基标以支肉汤培养基标以1 1、2 2、3 3、4 4号号l1 1、2 2号接种大肠埃希菌（无芽孢菌）号接种大肠埃希菌（无芽孢菌）l3 3号接种枯草芽胞杆菌（芽胞菌）号接种枯草芽胞杆菌（芽胞菌）l4 4号管不接种细菌作对照。号管不接种细菌作对照。l将其中将其中1 1、3 3号同时放入号同时放入100100度水浴内煮沸度水浴内煮沸5 5分钟。分钟。l然后
6、将然后将4 4支管同时置支管同时置3737度温箱培养度温箱培养2424小时观察结果。小时观察结果。第8页/共17页3.3.紫外线杀菌实验紫外线杀菌实验 材料：材料：琼脂平板、细菌培养物、灭菌长方形纸片琼脂平板、细菌培养物、灭菌长方形纸片方法：方法：n取普通琼脂平板一个，密集画线接种大肠埃希菌。取普通琼脂平板一个，密集画线接种大肠埃希菌。n用无菌镊子把灭菌长方形纸片贴于平板表面中央。用无菌镊子把灭菌长方形纸片贴于平板表面中央。n打开平皿盖的打开平皿盖的2/32/3，置于紫外灯下距离约，置于紫外灯下距离约20-3020-30厘米处厘米处照射照射3030分钟，分钟，n除去纸片，盖好平皿盖，置除去纸片
7、，盖好平皿盖，置3737度温箱培养度温箱培养2424小时观察小时观察结果。结果。原理：原理：损伤损伤DNADNA，阻止，阻止DNADNA的复制的复制第9页/共17页4.4.常用消毒灭菌器及除菌滤器介常用消毒灭菌器及除菌滤器介绍绍n高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器 n干烤箱（干热灭菌器）干烤箱（干热灭菌器）n滤器滤器 第10页/共17页三、药物敏感实验（纸片法）三、药物敏感实验（纸片法）方法：方法：u1.1.取琼脂平板一个用记号笔在平板底部标记贴抗生素纸片的位置。取琼脂平板一个用记号笔在平板底部标记贴抗生素纸片的位置。u2.2.点燃酒精灯。用棉签蘸取菌液，在琼脂平板上密集而均匀地涂点燃酒精灯。用棉签
8、蘸取菌液，在琼脂平板上密集而均匀地涂布。布。u3.3.待培养基稍干后，无菌操作用镊子分别取抗生素纸片按标记位待培养基稍干后，无菌操作用镊子分别取抗生素纸片按标记位置贴在涂布细菌的培养基表面，各纸片距离大致相等。纸片放置后置贴在涂布细菌的培养基表面，各纸片距离大致相等。纸片放置后不要再挪动，因挪动将影响实验结果。不要再挪动，因挪动将影响实验结果。u4.4.把平板倒放在把平板倒放在 3737温箱内培养温箱内培养 181824 24 小时后取出观察结果，小时后取出观察结果，测定抑菌环的大小。测定抑菌环的大小。第11页/共17页三、药物敏感实验（纸片法）三、药物敏感实验（纸片法）抑菌环的形成：抑菌环的
9、形成：琼脂平板内含有大量的水分，纸片琼脂平板内含有大量的水分，纸片上的药物具有水溶性。因此可逐渐扩散到周围的培上的药物具有水溶性。因此可逐渐扩散到周围的培养基中，其浓度将随与纸片距离的增加而逐渐降低，养基中，其浓度将随与纸片距离的增加而逐渐降低，从而形成了以纸片为中心，药物浓度逐渐减小的浓从而形成了以纸片为中心，药物浓度逐渐减小的浓度剃度。当药物浓度降低到某一程度时，细菌足以度剃度。当药物浓度降低到某一程度时，细菌足以抵抗其抑菌杀菌作用；在此范围以外，细菌将正常抵抗其抑菌杀菌作用；在此范围以外，细菌将正常生长，而在此范围以内则无细菌生长。以此界线为生长，而在此范围以内则无细菌生长。以此界线为边
10、缘所形成的抑菌杀菌的区域称为抑菌环。边缘所形成的抑菌杀菌的区域称为抑菌环。第12页/共17页三、药物敏感实验（纸片法）三、药物敏感实验（纸片法）l测量抑菌环的大小，初步判定并比较细菌对不测量抑菌环的大小，初步判定并比较细菌对不同药物的敏感情况，判断药物的敏感度，一般同药物的敏感情况，判断药物的敏感度，一般以敏感、中度敏感、耐药三个等级报告结果。以敏感、中度敏感、耐药三个等级报告结果。第13页/共17页 药药 敏敏 实实 验验材料：材料：琼脂平板、细菌培养物、药敏纸片琼脂平板、细菌培养物、药敏纸片 方法：方法：1.1.挑取少量细菌培养物密集划线；挑取少量细菌培养物密集划线；2.2.夹取青霉素及庆大霉素药敏片各一片，夹取青霉素及庆大霉素药敏片各一片，置于琼脂平板表面（注意间隔）；置于琼脂平板表面（注意间隔）；3.37 3.37 温箱内孵育温箱内孵育2424小时后观察结果。小时后观察结果。意义：意义：为临床针对性合理用药提供依据为临床针对性合理用药提供依据第14页/共17页第15页/共17页抑菌圈药敏试验药敏试验 第16页/共17页感谢您的观看！第17页/共17页