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1、第六章 微生物的分布、消毒与灭菌1 了解微生物在自然界及人体内的分布了解微生物在自然界及人体内的分布.掌握掌握灭菌、消毒、防腐、无菌、大肠菌群、正常菌群灭菌、消毒、防腐、无菌、大肠菌群、正常菌群灭菌、消毒、防腐、无菌、大肠菌群、正常菌群灭菌、消毒、防腐、无菌、大肠菌群、正常菌群的概念的概念 掌握掌握高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法的原理、操作、用途、注意事项；熟悉的原理、操作、用途、注意事项；熟悉其他物理灭菌法（其他物理灭菌法（UVUV、干热法、过滤法等）、干热法、过滤法等）掌握化学消毒剂的作用机制，了解常用消毒剂的种类和用途掌握化学消毒剂的作用机制，了解常用消毒剂的种
2、类和用途本 章 要 求2第一节第一节 微生物的分布微生物的分布一、在自然界的分布一、在自然界的分布（一（一）水中的微生物）水中的微生物）水中的微生物）水中的微生物 细菌、真菌、病毒等细菌、真菌、病毒等 判断水的污染程度的方法以测定水中细菌总数和大肠菌群数判断水的污染程度的方法以测定水中细菌总数和大肠菌群数为指标为指标 大肠菌群大肠菌群大肠菌群大肠菌群：一群在：一群在3737、24h24h能发酵乳糖产酸产气，需氧或兼能发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的性厌氧的G G-我国饮用水卫生标准我国饮用水卫生标准:1ml:1ml水中细菌总数不超过水中细菌总数不超过100100个，个，1L1L水中水中大肠菌
3、群数少于大肠菌群数少于3 3个个 水有自净作用。判断自净效果用细菌为指标水有自净作用。判断自净效果用细菌为指标3（二）（二）土壤中的微生物土壤中的微生物土壤中的微生物土壤中的微生物 条件：营养，条件：营养，pHpH，T T，水，水 分布：地面下分布：地面下101030cm30cm，细菌多于放线菌、真菌，细菌多于放线菌、真菌（三）（三）空气中的微生物空气中的微生物空气中的微生物空气中的微生物 条件：缺乏营养、水，有辐射条件：缺乏营养、水，有辐射 分布：近地面空气污染严重，随高度上升数量下降。微生物分布：近地面空气污染严重，随高度上升数量下降。微生物的量随季节变化（夏季多些）；室内微生物的量与空气
4、的流的量随季节变化（夏季多些）；室内微生物的量与空气的流通有关通有关4二、微生物在人体的分布二、微生物在人体的分布 皮肤以及与外界相通的腔道中均有不同种类的微生物皮肤以及与外界相通的腔道中均有不同种类的微生物1 1、正常菌群、正常菌群、正常菌群、正常菌群：正常存在于人体外表和同外界相通的肠道、呼正常存在于人体外表和同外界相通的肠道、呼吸道等腔道中，人体免疫功能正常时，对宿主无害，有些还吸道等腔道中，人体免疫功能正常时，对宿主无害，有些还有利的微生物有利的微生物5人体常见的正常菌群部位部位部位部位主要菌类主要菌类主要菌类主要菌类皮肽皮肽葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、非致病性分枝杆菌、丙酸杆菌、
5、葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、非致病性分枝杆菌、丙酸杆菌、白色念珠菌白色念珠菌口腔口腔表皮葡萄球菌、甲型和丙型链球菌、类杆菌、梭杆菌表皮葡萄球菌、甲型和丙型链球菌、类杆菌、梭杆菌鼻咽腔鼻咽腔葡萄球菌、甲型和丙型链球菌、肺炎球菌、奈瑟菌、乳杆菌葡萄球菌、甲型和丙型链球菌、肺炎球菌、奈瑟菌、乳杆菌眼结膜眼结膜葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、非致病性分枝杆菌葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、非致病性分枝杆菌外耳道外耳道白色葡萄球菌、干燥杆菌白色葡萄球菌、干燥杆菌胃胃一般无菌一般无菌肠道肠道大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、葡萄球菌、粪链球菌、类杆菌、大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、葡萄
6、球菌、粪链球菌、类杆菌、产气荚膜梭菌、破伤风梭菌、双歧杆菌、乳杆菌、白色念珠菌产气荚膜梭菌、破伤风梭菌、双歧杆菌、乳杆菌、白色念珠菌尿道尿道白色葡萄球菌、类白喉杆菌、非致病性分枝杆菌白色葡萄球菌、类白喉杆菌、非致病性分枝杆菌阴道阴道乳杆菌、大肠杆菌、类白喉杆菌、白色念珠菌乳杆菌、大肠杆菌、类白喉杆菌、白色念珠菌6正常菌群的生理作用正常菌群的生理作用1 1、生物拮抗作用生物拮抗作用生物拮抗作用生物拮抗作用：对外原致病菌的侵入有拮抗和防御作用，保护宿主对外原致病菌的侵入有拮抗和防御作用，保护宿主2 2、刺激免疫应答刺激免疫应答刺激免疫应答刺激免疫应答：具有免疫原性，有促分裂和佐剂的作用，是机体抗感
7、染免具有免疫原性，有促分裂和佐剂的作用，是机体抗感染免 疫的重要组成部分疫的重要组成部分3 3、合成维生素合成维生素合成维生素合成维生素：如生物素、叶酸、如生物素、叶酸、B B1212、K K4 4、促进代谢促进代谢促进代谢促进代谢：参与糖、蛋白质、脂肪的代谢，促进消化吸收参与糖、蛋白质、脂肪的代谢，促进消化吸收72 2、菌群失调症：、菌群失调症：由于正常菌群中各菌比例失调而产生的临床症状由于正常菌群中各菌比例失调而产生的临床症状 引起菌群失调的原因：引起菌群失调的原因：机体免疫力下降机体免疫力下降机体免疫力下降机体免疫力下降：慢性病人：慢性病人 位置改变位置改变位置改变位置改变：E.coli
8、E.coli从肠道到腹腔或泌尿从肠道到腹腔或泌尿生殖道生殖道 长期使用抗菌药物长期使用抗菌药物长期使用抗菌药物长期使用抗菌药物：广谱抗生素：广谱抗生素8第二节 消毒与灭菌 对有害微生物的控制方法：消毒和灭菌对有害微生物的控制方法：消毒和灭菌 基本概念：基本概念：Disinfection 杀死物体杀死物体表面上表面上的病原微生物，达到控制微生物传染的病原微生物，达到控制微生物传染 的方法的方法,并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物灭菌：灭菌：Sterilization杀灭物体上杀灭物体上所有微生物所有微生物的方法。的方法。无菌：无菌：Asepsis不存
9、在活菌的意思。不存在活菌的意思。防腐：防腐：Antisepsis防止或抑制防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法体外细菌生长繁殖的方法。消毒：消毒：9热力灭菌法热力灭菌法 一、物理消毒灭菌法一、物理消毒灭菌法一、物理消毒灭菌法一、物理消毒灭菌法利用高温使微生物的蛋白质及核酸变性、破坏，杀灭細菌焚烧焚烧-最彻底的灭菌方法 egeg：衣物、动植物尸体：衣物、动植物尸体灼烧灼烧-直接用火焰灭菌方法 egeg：接种环、针：接种环、针干烤干烤-加热160-180 2小时 eg eg：玻璃器皿、金属制品、药品：玻璃器皿、金属制品、药品 干热灭菌法消毒与灭菌的方法：物理、化学、生物法消毒与灭菌的方法：物理、化学、
10、生物法热力、辐射、过滤等热力、辐射、过滤等10干烤法干烤法注意事项注意事项注意事项注意事项：1 1、洗净后再干烤，防止污物碳化、洗净后再干烤，防止污物碳化2 2、玻璃器皿洗净、干燥后再灭菌，、玻璃器皿洗净、干燥后再灭菌，T40T40时开烤时开烤箱，防止炸裂箱，防止炸裂3 3、物品包装不宜太大，所放物品不宜太多、物品包装不宜太大，所放物品不宜太多（2/32/3），），以利于空气对流以利于空气对流4 4、中途不能打开添加物品、中途不能打开添加物品5 5、t t计算从计算从T T达到时开始达到时开始11湿热灭菌法湿热灭菌法高压蒸汽高压蒸汽灭菌法最有效的灭菌方法 121 20-30 min煮沸煮沸消毒
11、法水煮100 5 min(繁殖体)2 h(芽胞)流通蒸汽流通蒸汽消毒法巴氏巴氏消毒法间歇蒸汽间歇蒸汽灭菌法水蒸汽100 1530 min(繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌较低的温度（6163 30min or72 1530s）杀灭致病菌适用对象：耐高温的物品原理：饱和蒸气压与T成正比注意事项注意事项：加水适量；物品摆放疏松；排尽冷空气；计时时间；压力降至0后，方可开盖用于清洗玻璃器皿食品、食具、不耐高温的物品不耐热的含糖、血清、牛奶等的培养基12湿热灭菌与干热灭菌的比较同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好好原原 因因1 1、有水的环境中细菌菌体蛋白较易变性
12、、有水的环境中细菌菌体蛋白较易变性2 2、湿热的蒸汽穿透力比干热强、湿热的蒸汽穿透力比干热强3 3、湿热的蒸汽有潜热、湿热的蒸汽有潜热13辐射杀菌法辐射杀菌法 紫外线紫外线（UVUV）杀菌机理：杀菌机理：波长200300m的紫外线具有杀菌作用干扰干扰DNADNA的复制与转录的复制与转录（形成（形成TTTT二聚体）二聚体）紫外线穿透力较弱紫外线穿透力较弱 不耐热物品的表面消毒不耐热物品的表面消毒特特 点：点：应用范围：应用范围：空气消毒空气消毒 手术室、传染病房、细菌实验室手术室、传染病房、细菌实验室 原理：利用电磁波杀死微生物包括：微波、UV、X射线、射线14 影响因素：光源的强度；与被照物的
13、距离；照射影响因素：光源的强度；与被照物的距离；照射t t，湿度等，湿度等 一般无菌室内用一般无菌室内用30W30W，30min30min，可杀死空气中的微生物，可杀死空气中的微生物 注意：注意：UVUV的光复活作用的光复活作用T=T T+T可见光光复活酶15过滤除菌过滤除菌过滤除菌过滤除菌原原原原 理理理理：用致密的过滤材料滤去液体或气体中的微生物，：用致密的过滤材料滤去液体或气体中的微生物，但不能杀死微生物但不能杀死微生物常用介质常用介质常用介质常用介质：孔径：孔径0.220.220.45um0.45um的硝酸纤维素滤膜、醋酸纤维的硝酸纤维素滤膜、醋酸纤维 素滤膜、玻璃纤维、棉花等素滤膜、
14、玻璃纤维、棉花等适用对象适用对象适用对象适用对象：不耐热，不能用化学方法除菌的液体、气体：不耐热，不能用化学方法除菌的液体、气体 例：抗生素、血清、酶、生产中的无菌空气例：抗生素、血清、酶、生产中的无菌空气缺缺缺缺 点点点点：无法滤去病毒、支原体等能通过细菌细菌滤汽的微生物：无法滤去病毒、支原体等能通过细菌细菌滤汽的微生物16滤菌过程滤菌过程17低温低温低温低温:主要抑制微生物的生长繁殖主要抑制微生物的生长繁殖常用于菌种保藏常用于菌种保藏egeg：44、-70 -70 、-20-20 其他物理方法其他物理方法其他物理方法其他物理方法1 1、超声波超声波超声波超声波频率高于频率高于2 2万赫兹的
15、超声波，可使细胞壁破裂，万赫兹的超声波，可使细胞壁破裂，是细胞破碎的常用方法是细胞破碎的常用方法2 2、干燥干燥干燥干燥使细胞脱水和胞内盐浓度升高而死亡使细胞脱水和胞内盐浓度升高而死亡用于食品、药品保存，抑制微生物的生长用于食品、药品保存，抑制微生物的生长18二、化学方法二、化学方法化学药品化学药品消毒剂：表面防腐剂：抑制灭菌剂：无活菌针对的对象不同、使用的浓度不同19（一）常用的消毒剂（一）常用的消毒剂 1、醇类1 1）乙醇用于皮肤、器具的消毒（对芽孢效果不好）用于皮肤、器具的消毒（对芽孢效果不好）机制：含水，极性与细胞膜接近，溶解脂质，可机制：含水，极性与细胞膜接近，溶解脂质，可迅速透过细
16、胞膜，使蛋白质变性迅速透过细胞膜，使蛋白质变性(70(70 （w/ww/w）效果好效果好)2 2）苯氧乙醇 无色油状液体，微溶于水无色油状液体，微溶于水 对铜绿假单胞菌有较强的杀灭作用对铜绿假单胞菌有较强的杀灭作用 20 2、醛类原理原理原理原理：破坏蛋白质的氢键或氨基：破坏蛋白质的氢键或氨基1 1）甲醛）甲醛:对芽孢、菌体、病毒、真菌均有杀灭作用对芽孢、菌体、病毒、真菌均有杀灭作用浓浓 度：度：1010的甲醛加热熏蒸的甲醛加热熏蒸适用对象：对密闭容器或房间内的物品、空气进行消适用对象：对密闭容器或房间内的物品、空气进行消毒，不适于食品、药品存放地空气的消毒毒，不适于食品、药品存放地空气的消毒
17、2 2）戊二醛）戊二醛对芽孢、菌体、病毒、真菌均有杀灭作用对芽孢、菌体、病毒、真菌均有杀灭作用浓浓 度：度：2 2（pH8.0pH8.0左右）有强杀菌作用左右）有强杀菌作用适用对象：精密仪器、医疗器械、实验室消毒适用对象：精密仪器、医疗器械、实验室消毒21 3、卤素类原理原理原理原理：有氧化性，使蛋白质变性、酶失活，膜破坏：有氧化性，使蛋白质变性、酶失活，膜破坏1 1）ClCl2 2 适用对象：自来水消毒适用对象：自来水消毒2 2）漂白粉（）漂白粉（Ca(ClO)Ca(ClO)2 2+NaClO+NaClO）5%5%10%10%用于手、家具消毒。芽孢无效用于手、家具消毒。芽孢无效3 3）I I
18、2 2及含及含I I2 2消毒剂（消毒剂（2 2）用于皮肤粘膜、创面的消毒用于皮肤粘膜、创面的消毒Cl2+H2O HClO22 4、酚类原理原理原理原理：蛋白质变性，损伤细胞膜：蛋白质变性，损伤细胞膜1 1 1 1）苯酚）苯酚）苯酚）苯酚（石炭酸）（石炭酸）浓浓 度：度：3 35 5适用对象：地面、家具、器皿的消毒，因其毒性，适用对象：地面、家具、器皿的消毒，因其毒性，现用于评价其他消毒剂的杀菌强度现用于评价其他消毒剂的杀菌强度2 2 2 2）煤酚皂溶液）煤酚皂溶液）煤酚皂溶液）煤酚皂溶液（来苏儿）：甲醛和肥皂水的混合（来苏儿）：甲醛和肥皂水的混合液液1 15 5用于家具、地板、墙面消毒用于家
19、具、地板、墙面消毒23 5、烷化剂气体消毒剂环氧乙烷（第二代消毒剂）环氧乙烷（第二代消毒剂）原原原原 理理理理：与蛋白质、核酸中的：与蛋白质、核酸中的-NH-NH2 2、-OH-OH、-COOH-COOH、-SH-SH反应，使蛋白质和核酸结构改变杀菌反应，使蛋白质和核酸结构改变杀菌适用对象适用对象适用对象适用对象：纸张、木材、皮草、生物制品、医药制：纸张、木材、皮草、生物制品、医药制剂等剂等24 6、氧化剂类原理原理原理原理：氧化蛋白质的活性基团，使蛋白质变性：氧化蛋白质的活性基团，使蛋白质变性1 1）H H2 2O O2 2：3 3的用于伤口及口腔粘膜消毒，的用于伤口及口腔粘膜消毒，1 11
20、.51.5用于漱口，可治疗和预防口腔炎、咽炎用于漱口，可治疗和预防口腔炎、咽炎2 2）过氧乙酸）过氧乙酸0.20.20.5%0.5%用于皮肤、玻璃、纤维等消毒用于皮肤、玻璃、纤维等消毒3 3）臭氧）臭氧O O3 3强氧化剂强氧化剂用于水、空气、设备消毒用于水、空气、设备消毒4 4）KMnOKMnO4 4强氧化剂强氧化剂0.1%0.1%的的KMnOKMnO4 4用于皮肤，水果、蔬菜的消毒用于皮肤，水果、蔬菜的消毒25 7、季铵盐类原理原理：是阳离子表面活性剂（正电），改变细胞膜的渗透而引起菌体破裂，同时使蛋白质变性。0.050.1%的新洁尔灭用于皮肤、粘膜、手术器械的消毒26 8、其他消毒剂甲基
21、紫甲基紫碱性染料，带正电，干扰细胞代谢碱性染料，带正电，干扰细胞代谢重金属汞重金属汞与蛋白质的与蛋白质的-SH-SH结合，使之变性结合，使之变性AgNOAgNO3 3使蛋白质变性，用于皮肤、新生儿使蛋白质变性，用于皮肤、新生儿滴眼睛滴眼睛27（二）化学消毒剂的作用原理（二）化学消毒剂的作用原理1、蛋白质变性2、破坏细胞的表面结构3、干扰和破坏酶的活性，影响细胞的新陈代谢28影响消毒剂作用的因素消毒剂消毒剂细菌细菌 环境环境种类种类浓度浓度作用时间作用时间菌龄菌龄种类种类有机物有机物温度温度酸碱度酸碱度29类类类类 别别别别作用机制作用机制作用机制作用机制代表代表代表代表酚酚 类类蛋白变性，细胞
22、膜损伤蛋白变性，细胞膜损伤石炭酸石炭酸醇醇 类类蛋白变性蛋白变性乙醇乙醇重金属盐重金属盐氧化、蛋白酶变性氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞红汞、硫柳汞氧氧 化化 剂剂氧化、蛋白沉淀氧化、蛋白沉淀过氧乙酸、碘酒过氧乙酸、碘酒表面活性剂表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤蛋白变性，细胞膜损伤新洁而灭新洁而灭染染 料料干扰氧化、抑制繁殖干扰氧化、抑制繁殖龙胆紫龙胆紫常用消毒剂种类30种类种类种类种类使用浓度使用浓度使用浓度使用浓度用途用途用途用途石炭酸石炭酸3%3%5%5%地面、器具表面、皮肤消毒地面、器具表面、皮肤消毒乙醇乙醇7070皮肤、体温计消毒皮肤、体温计消毒高锰酸钾高锰酸钾0.1%0.1%皮肤、尿道、
23、蔬菜、水果消毒皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒红汞红汞2%2%皮肤、粘膜、小创伤消毒皮肤、粘膜、小创伤消毒硫柳汞硫柳汞0.01%0.01%0.1%0.1%皮肤消毒、手术部位消毒皮肤消毒、手术部位消毒过氧乙酸过氧乙酸0.2%0.2%0.5%0.5%塑料、玻璃器材消毒塑料、玻璃器材消毒碘酒碘酒2.5%2.5%皮肤消毒皮肤消毒新洁而灭新洁而灭0.05%0.05%0.1%0.1%手术洗手、浸泡手术器械手术洗手、浸泡手术器械龙胆紫龙胆紫2%2%4%4%浅表创伤消毒浅表创伤消毒各种消毒剂的应用各种消毒剂的应用31选择适当的消毒剂低毒低毒价廉价廉低破坏低破坏易贮藏易贮藏方便方便有效有效32三、保持无菌状态三、保持无菌状态 掌握无菌操作技术掌握无菌操作技术33