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1、大连理工大学 环境与生命学院实验四实验四 植物总基因组植物总基因组DNADNA的提取的提取指导老师：苏指导老师：苏 乔乔 副教授副教授 电话：84706356-60684706356-606大连理工大学 环境与生命学院概概 述述1、总基因组、总基因组DNA一般为一般为109左右；所分离的左右；所分离的 DNA大小通常大小通常50Kb2、液氮研磨破壁、液氮研磨破壁3、植物细胞中储存了大量的、种类繁多的次生物质，如多酚等，、植物细胞中储存了大量的、种类繁多的次生物质，如多酚等，与与DNA共沉淀抑制限制性内切酶和共沉淀抑制限制性内切酶和Taq DNA聚合酶的活性，聚合酶的活性，因因 此在提取缓冲液中
2、通常加入此在提取缓冲液中通常加入-巯基乙醇、巯基乙醇、PVP等等大连理工大学 环境与生命学院4、在低浓度琼脂糖凝胶（、在低浓度琼脂糖凝胶（0.65%)中，加入约中，加入约 50-100ng样品样品DNA，并排依次加入，并排依次加入25-200ng未经酶解的未经酶解的 DNA标准，高标准，高相对分子质量相对分子质量DNA应为一条靠近应为一条靠近 DNA的清晰条带。的清晰条带。比较比较样品样品DNA条带与条带与 DNA标准条带的亮度，即可对样品标准条带的亮度，即可对样品DNA进行定量。进行定量。大连理工大学 环境与生命学院CTAB改进提取法提取的植物基因组改进提取法提取的植物基因组DNA M：Ma
3、rker；1-4：烟草；：烟草；5、6：玉米；：玉米；7、8：小麦；小麦；9、10：大豆；：大豆；11、12：红薯：红薯 大连理工大学 环境与生命学院技术要点及注意事项技术要点及注意事项1、新鲜材料、新鲜材料2、液氮研磨后迅速转移到提取缓冲掖中，迅速上下摇晃，、液氮研磨后迅速转移到提取缓冲掖中，迅速上下摇晃，充分混匀，尽量缩短叶片在室温放置的时间充分混匀，尽量缩短叶片在室温放置的时间3、一旦、一旦DNA释放出来，应尽量降低剪切破坏程度：转移上释放出来，应尽量降低剪切破坏程度：转移上清时将微量移液器吸头剪去部分以减少剪切；混合操作清时将微量移液器吸头剪去部分以减少剪切；混合操作时应轻缓时应轻缓大连理工大学 环境与生命学院思思 考考 题题 在实验过程中应注意哪些步骤才能获得较完在实验过程中应注意哪些步骤才能获得较完整的大分子量基因组整的大分子量基因组DNA大连理工大学 环境与生命学院再 见！