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1、-实验四植物基因组DNA的提取实验目的 通过本实验学习从植物组织中提取DNA的方法。实验原理 利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。实验材料: 新鲜植物叶片【仪器、材料与试剂】（）仪器1低温离心机2恒温水浴器3台式离心机4紫外分光光度计5.液氮灌（二）材料l。三羟甲基氨基甲烷（Tris）2乙二胺四乙酸（EDTA）3氯化钠（NaCl）4-巯基乙醇5氯化钾（KCI）6异丙醇7乙醇8.陶瓷研钵9吸头、小指管（三）试剂（三）试剂1细胞提取液
2、100 mmolL Tris.HCl (pH 8.0)5 mmolL EDTA (pH 8.0)500 mmolL NaCl1.25 SDS1 molL 巯基乙醇25 molL KCI3，TE（见实验二质粒DNA的提取及酶切）实验步骤1. 取4g新鲜叶片，在液氮中研磨成粉末状（越细越好）。2. 转移至50ml离心管中，加入16ml TENbf，充分混匀。65水浴保温20min。3. 从水浴中取出离心管，加入5ml 5 mol/L KCl溶液，混匀，水浴20min。4. 4000r/min 离心 20 min。5. 将上清液转移到另一50ml离心管中。6. 加等体积酚氯仿混匀，12000rmin
3、 离心5min，取上清。7. 加等体积氯仿，混匀，12000rmin 离心5min，取上清。8. 加入0.61倍体积的异丙醇（沉淀DNA），混匀。放置时间9. 离心获得沉淀，70乙醇洗3次。风干沉淀。10. 加入3ml TE缓冲液，溶解DNA。11. 取3ml DNA溶液测定DNA在260nm和280nm的OD值，并分析DNA的纯度和含量实验结果注意事项1.尽量取材幼嫩叶片，如太老，酚类物质 多，必须用10 mM的-ME处理。叶片磨得越细越好。 2.移液器的使用。3.由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA降解。4.研钵预冻，粉末至加CTAB前不要融化。5.氯仿/异戊醇抽提时动作应轻柔。6.所用试剂必需灭菌。-第 2 页-