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1、关于高效液相色谱仪的原理及应用第一张，PPT共五十二页，创作于2022年6月高效液相色谱高效液相色谱 high performance liquid chromatograph，HPLC第二张，PPT共五十二页，创作于2022年6月第三张，PPT共五十二页，创作于2022年6月Agilent 1100第四张，PPT共五十二页，创作于2022年6月气相色谱法气相色谱法：较易挥发、且热稳定的有机化合物。20%20%液相色谱法液相色谱法：用气相色谱法难以分析的物质，如难挥发、热不稳定、分子量大、具有生物活性的物质。80%80%第一节第一节 高效液相色谱法的原理高效液相色谱法的原理一、高效液相色谱法的
2、特点一、高效液相色谱法的特点第五张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 高效高效液相色谱法液相色谱法与与经典经典液相色谱法液相色谱法经典液相色经典液相色经典液相色经典液相色谱法谱法谱法谱法高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪经典液相色谱HPLC固定相粒径150-200 m3-10 m流动相驱动方式重力或低压泵高压泵流动相流速很慢快(1-10mL/min)例：分离例：分离例：分离例：分离2020种氨基酸种氨基酸种氨基酸种氨基酸柱长：柱长：柱长：柱长：170 cm170 cm柱径：柱径：柱径：柱径：0.9 cm0.9 cmF F：30 mL/h30 mL/ht t :20
3、h:20 h经典柱色谱经典柱色谱HPLCHPLCt t ：1 h高压、高效、高速高压、高效、高速高压、高效、高速高压、高效、高速 第六张，PPT共五十二页，创作于2022年6月吸附色谱吸附色谱 分配色谱分配色谱 离子交换色谱离子交换色谱 排阻色谱排阻色谱二、高效液相色谱法的分类二、高效液相色谱法的分类正相色谱正相色谱 反相色谱反相色谱1、按分离原理分类、按分离原理分类2、按极性分类、按极性分类第七张，PPT共五十二页，创作于2022年6月1)1)吸附色谱（吸附色谱（液液-固固）固固固固定定定定相相相相：固固体体吸吸附附剂剂，如如硅硅胶胶、氧氧化化铝铝等等，较较常常使使用的是用的是510m的硅胶
4、吸附剂；的硅胶吸附剂；的硅胶吸附剂；的硅胶吸附剂；流动相流动相流动相流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理基本原理：组分在固定相上的：组分在固定相上的吸附与解吸吸附与解吸吸附与解吸吸附与解吸。适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样。适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样。适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样。适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样。1、按分离原理分类、按分离原理分类第八张，PPT共五十二页，创作于2022年6月2)2)分配色谱（分配色谱（液液-液液）固定相与流动相均为液体（互不相溶）；固定相与流动相均为液体（互不相溶）；固定相与流动相均
5、为液体（互不相溶）；固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理基本原理基本原理基本原理：组分在固定相和流动相上的：组分在固定相和流动相上的：组分在固定相和流动相上的：组分在固定相和流动相上的分配分配分配分配；固固固固定定定定相相相相：由由由由氧氧氧氧化化化化硅硅硅硅、氧氧氧氧化化化化铝铝铝铝、硅硅硅硅藻藻藻藻土土土土等等等等制制制制成成成成的的的的多多多多孔孔孔孔球球球球体体体体表表表表面面面面涂涂涂涂渍固定液，固定液易流失，较少采用；渍固定液，固定液易流失，较少采用；渍固定液，固定液易流失，较少采用；渍固定液，固定液易流失，较少采用；化化化化学学学学键键键键合合合合固固固固定定定定相相相相
6、：将将将将各各各各种种种种不不不不同同同同基基基基团团团团通通通通过过过过化化化化学学学学反反反反应应应应键键键键合合合合到到到到硅硅硅硅胶胶胶胶（担担担担体）表面。体）表面。体）表面。体）表面。C-18C-18柱柱柱柱:第九张，PPT共五十二页，创作于2022年6月3)3)离子交换色谱离子交换色谱 固定相固定相固定相固定相：阴离子离子交换树脂阴离子离子交换树脂阴离子离子交换树脂阴离子离子交换树脂 或或或或阳离子离子交换树脂阳离子离子交换树脂阳离子离子交换树脂阳离子离子交换树脂；流动相流动相流动相流动相：酸性或碱性水溶液；：酸性或碱性水溶液；：酸性或碱性水溶液；：酸性或碱性水溶液；基基基基本本
7、本本原原原原理理理理：利利利利用用用用不不不不同同同同离离离离子子子子对对对对树树树树脂脂脂脂的的的的离离离离子交换能力子交换能力子交换能力子交换能力不同来实现分离。不同来实现分离。不同来实现分离。不同来实现分离。应用应用应用应用：离子及可离解的化合物，：离子及可离解的化合物，：离子及可离解的化合物，：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。氨基酸、核酸等。氨基酸、核酸等。氨基酸、核酸等。第十张，PPT共五十二页，创作于2022年6月4)4)排阻色谱（又称凝胶色谱）排阻色谱（又称凝胶色谱）固定相：固定相：固定相：固定相：凝胶凝胶凝胶凝胶(具有一定大小孔隙分布具有一定大小孔隙分布具有一定大小孔隙分
8、布具有一定大小孔隙分布)；原理原理原理原理：按：按：按：按分子大小分子大小分子大小分子大小分离。分离。分离。分离。小小小小分分分分子子子子可可可可以以以以扩扩扩扩散散散散到到到到凝凝凝凝胶胶胶胶空空空空隙隙隙隙，由由由由其其其其中中中中通通通通过过过过，出出出出峰峰峰峰最最最最慢慢慢慢；中中中中等等等等分分分分子子子子只只只只能能能能通通通通过过过过部部部部分分分分凝凝凝凝胶胶胶胶空空空空隙隙隙隙，中中中中速速速速通通通通过过过过；而而而而大大大大分分分分子子子子被被被被排排排排斥斥斥斥在在在在外外外外，出出出出峰峰峰峰最快。最快。最快。最快。可可可可对对对对相相相相对对对对分分分分子子子子质
9、质质质量量量量在在在在100-10100-105 5范范范范围围围围内的化合物按质量分离。内的化合物按质量分离。内的化合物按质量分离。内的化合物按质量分离。第十一张，PPT共五十二页，创作于2022年6月1)正相色谱：正相色谱：是是是是由由由由极极性性固固定定相相和和和和非非极极性性（或或弱弱极极性性）流流动动相相所所组组成成的的色色谱谱体体系系。其其代代表表性性的的固固定定相相是是改改性性硅硅胶胶、氰氰氰氰基基基基柱等，代表性的流动相是柱等，代表性的流动相是柱等，代表性的流动相是柱等，代表性的流动相是正己烷正己烷。2)反相色谱：反相色谱：由由非非非非极极极极性性性性固固固固定定定定相相相相和
10、和极极性性流流动动相相所所所所组组组组成成成成的的的的色色色色谱谱谱谱体体体体系系系系，与与与与正正正正相相相相色色色色谱谱谱谱体体体体系系系系正正正正好好好好相相相相反反反反。其其其其代代代代表表表表性性性性的的的的固固固固定定定定相相相相是是是是十十十十八八八八烷烷烷烷基基基基键键键键合合合合硅硅硅硅胶胶胶胶(ODSODS柱柱柱柱），代代代代表表表表性性性性的的的的流流流流动动动动相相相相是是是是甲甲醇醇和和乙乙腈腈。是是当当今今HPLCHPLC最主要的分离模式。最主要的分离模式。2、按极性分类、按极性分类:第十二张，PPT共五十二页，创作于2022年6月第十三张，PPT共五十二页，创作于
11、2022年6月第二节第二节 高效液相色谱仪的组成高效液相色谱仪的组成输液系统输液系统进样系统进样系统进样系统进样系统分离系统分离系统检测系统检测系统数据处理系统数据处理系统第十四张，PPT共五十二页，创作于2022年6月一、输液系统一、输液系统 高压输液泵高压输液泵脱气装置脱气装置梯度淋洗系统梯度淋洗系统第十五张，PPT共五十二页，创作于2022年6月1 1、高压输液泵、高压输液泵、高压输液泵、高压输液泵 主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：15015035010350105 5 PaPa。为为为为了了了了获获获获得得得得高高高高柱柱柱柱效效效效而而
12、而而使使使使用用用用粒粒粒粒度度度度很很很很小小小小的的的的固固固固定定定定相相相相（1010mm），液液液液体体体体的的的的流流流流动动动动相相相相高高高高速速速速通通通通过过过过时时时时，将将将将产产产产生生生生很很很很高高高高的的的的压压压压力力力力，因因因因此此此此高高高高压压压压、高高高高速速速速是是是是高高高高效效效效液液液液相相相相色色色色谱谱谱谱的特点之一。的特点之一。的特点之一。的特点之一。L/minL/min几千几千几千几千mL/minmL/min 应具有应具有应具有应具有压力平稳、流量稳定可调、耐腐蚀压力平稳、流量稳定可调、耐腐蚀压力平稳、流量稳定可调、耐腐蚀压力平稳、流
13、量稳定可调、耐腐蚀等特性等特性等特性等特性第十六张，PPT共五十二页，创作于2022年6月2、脱气装置、脱气装置 用于脱去流动相中的溶解气体，流动相先经过脱气装置用于脱去流动相中的溶解气体，流动相先经过脱气装置用于脱去流动相中的溶解气体，流动相先经过脱气装置用于脱去流动相中的溶解气体，流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。再输送到色谱柱。再输送到色谱柱。再输送到色谱柱。脱气机、超声脱气、真空脱气等。脱气机、超声脱气、真空脱气等。第十七张，PPT共五十二页，创作于2022年6月3、梯度淋洗装置、梯度淋洗装置第十八张，PPT共五十二页，创作于2022年6月等度洗脱等度洗脱输液泵输液泵输液泵输液泵进样
14、器进样器进样器进样器色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱柱温箱柱温箱柱温箱柱温箱检测器检测器检测器检测器单一或混合溶剂单一或混合溶剂第十九张，PPT共五十二页，创作于2022年6月分析分析时间长时间长分离度差分离度差 MeOH/H2O=O=6/4MeOH/HMeOH/H2 2O=O=8/2等度洗脱等度洗脱怎怎样样解决呢？解决呢？第二十张，PPT共五十二页，创作于2022年6月梯度洗脱梯度洗脱 A A A A 泵泵泵泵进样器进样器进样器进样器色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱柱温箱柱温箱柱温箱柱温箱检测器检测器检测器检测器 B B B B泵泵泵泵A A A AB B B B时间时间时间时间 B B 浓度浓度浓度浓度第
15、二十一张，PPT共五十二页，创作于2022年6月95%95%30%30%MMe eOOHH梯度洗脱梯度洗脱优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度。第二十二张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 流路中为高压力工作状态，流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置：通常使用耐高压的六通阀进样装置：二、进样系统二、进样系统第二十五张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 色谱柱：色谱柱：填料：填料：C18 C18色谱柱色谱柱 十八烷基硅基化学键合十八烷基硅基化学键合十八烷基硅基化学键合十八烷基硅基化学键合 到多孔硅胶或陶瓷微粒到多孔硅胶或陶瓷微粒到多孔硅胶或
16、陶瓷微粒到多孔硅胶或陶瓷微粒 SIL SIL 多孔硅胶微粒多孔硅胶微粒多孔硅胶微粒多孔硅胶微粒 XDB-C8 辛基硅烷化学键合到辛基硅烷化学键合到 多孔硅胶微粒上多孔硅胶微粒上多孔硅胶微粒上多孔硅胶微粒上三、分离系统三、分离系统第二十六张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 目前应用最广、性能最佳的固定相。目前应用最广、性能最佳的固定相。a.a.硅氧碳键型：硅氧碳键型：硅氧碳键型：硅氧碳键型：SiSiOOC C b.b.硅氧硅碳键型：硅氧硅碳键型：硅氧硅碳键型：硅氧硅碳键型：SiSiOOSi Si C C c.c.硅碳键型：硅碳键型：硅碳键型：硅碳键型：SiSiC C d.d.硅氮键型：硅
17、氮键型：硅氮键型：硅氮键型：SiSiN N化学键合固定相化学键合固定相化学键合固定相化学键合固定相:第二十七张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 1、紫外检测器、紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。参考二极管参考二极管参考二极管参考二极管UV UV 灯灯灯灯光栅光栅光栅光栅样品池样品池样品池样品池采样二极管采样二极管采样二极管采样二极管滤光片滤光片滤光片滤光片狭缝狭缝狭缝狭缝镜镜镜镜2 2镜镜镜镜1 1四、检测系统四、检测系统第二十八张，PPT共五十二页，创作于2022
18、年6月2、光电二极管阵列检测器、光电二极管阵列检测器 DAD 紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；光光光光电电电电二二二二极极极极管管管管阵阵阵阵列列列列检检检检测测测测器器器器：10241024个个个个二二二二极极极极管管管管阵阵阵阵列列列列，各各各各检检检检测测测测特特特特定定定定波波波波长，计算机快速处理，三维立体谱图。长，计算机快速处理，三维立体谱图。长，计算机快速处理，三维立体谱图。长，计算机快速处理，三维立体谱图。第二十九张，PPT共五十二页，创作于2022年6月3、荧光检测器、荧光检测器 高灵敏度、高选择性；高灵敏度、高选择性；
19、高灵敏度、高选择性；高灵敏度、高选择性；对对对对多多多多环环环环芳芳芳芳烃烃烃烃、维维维维生生生生素素素素B B、黄黄黄黄曲曲曲曲霉霉霉霉素素素素、卟卟卟卟啉啉啉啉类类类类化化化化合合合合物物物物、农农农农药药药药、药药药药物物物物、氨基酸、甾类化合物等有响应。氨基酸、甾类化合物等有响应。氨基酸、甾类化合物等有响应。氨基酸、甾类化合物等有响应。第三十张，PPT共五十二页，创作于2022年6月4、质谱检测器、质谱检测器 第三十一张，PPT共五十二页，创作于2022年6月一、定性分析一、定性分析(1)(1)保留值定性保留值定性(2)(2)相对保留值定性相对保留值定性(3)(3)与其他仪器联用与其他
20、仪器联用标准品：标准品：标准品：标准品：A-A-甲醇；甲醇；甲醇；甲醇；B-B-乙醇；乙醇；乙醇；乙醇；C-C-正丙醇；正丙醇；正丙醇；正丙醇；D-D-正丁醇；正丁醇；正丁醇；正丁醇；E-E-正戊醇正戊醇正戊醇正戊醇第三节第三节 高效液相色谱法的应用高效液相色谱法的应用第三十二张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 组分的峰面积越大,在样品中所占比例越大?1、校正因子定量：、校正因子定量：fi 称为称为校正因子校正因子。fi 0？同一检测器，对不同组分的敏感度不同同一检测器，对不同组分的敏感度不同。Wi =fi AiWi =fi Ai二、定量分析方法：二、定量分析方法：第三十三张，PPT共
21、五十二页，创作于2022年6月校正因子校正因子校正因子校正因子fi i 分为分为分为分为绝对绝对绝对绝对和和和和相对相对相对相对校正因子校正因子两种。两种。绝对校正因子：绝对校正因子：由于受到仪器及操作条件的影响程度很大，由于受到仪器及操作条件的影响程度很大，由于受到仪器及操作条件的影响程度很大，由于受到仪器及操作条件的影响程度很大，实际定量分析时，基本上不使用。实际定量分析时，基本上不使用。第三十四张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 相对校正因子相对校正因子相对校正因子相对校正因子 f fi ：某物质某物质某物质某物质 i i 与一选择的与一选择的标准物质标准物质 S 的的 绝对校正
22、因子绝对校正因子绝对校正因子绝对校正因子之比之比之比之比:相对校正因子相对校正因子相对校正因子相对校正因子只与检测器类型有关，而与色谱条件无关。只与检测器类型有关，而与色谱条件无关。只与检测器类型有关，而与色谱条件无关。只与检测器类型有关，而与色谱条件无关。常用于作为标准物质常用于作为标准物质常用于作为标准物质常用于作为标准物质S S的有的有苯（热导检测器）苯（热导检测器）苯（热导检测器）苯（热导检测器）和和和和庚烷（氢火焰离子化检测器）庚烷（氢火焰离子化检测器）等。等。等。等。选择的标准物质选择的标准物质选择的标准物质选择的标准物质S一起加入试样中一起加入试样中 内标法：内标法：第三十五张，
23、PPT共五十二页，创作于2022年6月2、内标法、内标法 标准物质在未知样内部标准物质在未知样内部内标物应满足的要求（内标物应满足的要求（内标物应满足的要求（内标物应满足的要求（p55)：准确称取一定量的准确称取一定量的准确称取一定量的准确称取一定量的未知样未知样未知样未知样WWi i，加入已准确定量的加入已准确定量的加入已准确定量的加入已准确定量的内标物内标物内标物内标物WWS S。SampleSampleStandardStandards si i校正曲线：校正曲线：校正曲线：校正曲线：A Ai i/A/As sC Cii is s第三十六张，PPT共五十二页，创作于2022年6月例：例：
24、一含一含氯霉素氯霉素试样，称取此样试样，称取此样试样，称取此样试样，称取此样 1.000g1.000g，以，以对硝基苯酚对硝基苯酚对硝基苯酚对硝基苯酚作内标，称取作内标，称取 0.100g 对硝基苯酚对硝基苯酚加到试样中，混合均匀加到试样中，混合均匀加到试样中，混合均匀加到试样中，混合均匀后进样，测得后进样，测得后进样，测得后进样，测得氯霉素氯霉素氯霉素氯霉素峰面积是峰面积是2020，对硝基苯酚对硝基苯酚对硝基苯酚对硝基苯酚峰面积是峰面积是峰面积是峰面积是120，已知，已知，已知，已知氯霉素氯霉素氯霉素氯霉素相对于相对于相对于相对于对硝基苯酚对硝基苯酚对硝基苯酚对硝基苯酚的相对校正因子是的相对
25、校正因子是1.2，求试样中，求试样中，求试样中，求试样中氯霉素氯霉素氯霉素氯霉素的含量。的含量。的含量。的含量。f i =（Wi/20/20）/（0.100/120）=1.2=1.2 w i =0.020 g =0.020 g Ci =0.020/1.000=2.0%第四十张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 3、外标法、外标法 标准物质在未知样外部标准物质在未知样外部即即标准曲线法标准曲线法标准曲线法标准曲线法。特点：特点：特点：特点：不必使用校正因子不必使用校正因子不必使用校正因子不必使用校正因子。操作条件变化对结果准确性影操作条件变化对结果准确性影操作条件变化对结果准确性影操作条件
26、变化对结果准确性影响较大。响较大。响较大。响较大。对进样量的准确性控制要求较对进样量的准确性控制要求较对进样量的准确性控制要求较对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快速分析。高，适用于大批量试样的快速分析。高，适用于大批量试样的快速分析。高，适用于大批量试样的快速分析。第四十一张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 4、归一化法：、归一化法：i i前提：所有组分都能从柱上洗脱并能被检测器检测。前提：所有组分都能从柱上洗脱并能被检测器检测。第四十二张，PPT共五十二页，创作于2022年6月例例1、高效液相色谱法测定奶粉中的三聚氰胺、高效液相色谱法测定奶粉中的三聚氰胺（1 1）提取
27、：）提取：）提取：）提取：称取称取称取称取0.53 g0.53 g奶粉奶粉奶粉奶粉试样试样试样试样，加入，加入，加入，加入0.1 mol/L0.1 mol/L盐酸至盐酸至盐酸至盐酸至15 ml15 ml，混，混，混，混匀，超声提取匀，超声提取匀，超声提取匀，超声提取30 min30 min后加入后加入后加入后加入60 g/L60 g/L磺基水杨酸磺基水杨酸磺基水杨酸磺基水杨酸34 ml34 ml，再用，再用，再用，再用0.1 0.1 mol/Lmol/L盐酸定容至盐酸定容至盐酸定容至盐酸定容至20 ml20 ml，混匀后以，混匀后以，混匀后以，混匀后以4000 r/min4000 r/min离
28、心离心离心离心5 min5 min，上清液经，上清液经，上清液经，上清液经0.45m0.45m的微孔滤膜过滤后进样。的微孔滤膜过滤后进样。的微孔滤膜过滤后进样。的微孔滤膜过滤后进样。（2 2）分析：）分析：）分析：）分析：色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱:色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱Kromasil KR100-5C8(250 mm4.6 mmKromasil KR100-5C8(250 mm4.6 mm，5m5m，Eka ChemicalsEka Chemicals公司，瑞典公司，瑞典公司，瑞典公司，瑞典)柱温柱温柱温柱温:40:40。流动相流动相流动相流动相:缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液+乙腈乙腈乙腈乙腈
29、(85+15(85+15，体积比，体积比，体积比，体积比););流速流速流速流速:1.0 ml/min;:1.0 ml/min;进样量进样量进样量进样量:20l:20l。二极管阵列检测器，二极管阵列检测器，二极管阵列检测器，二极管阵列检测器，波长范围波长范围波长范围波长范围200400 nm200400 nm。第四十三张，PPT共五十二页，创作于2022年6月第四十四张，PPT共五十二页，创作于2022年6月例例2、液相色谱法测定食品中苯并、液相色谱法测定食品中苯并(a)芘芘原理：原理：原理：原理：样品经过提取、皂化以及柱层析净化，除去脂肪类物质、样品经过提取、皂化以及柱层析净化，除去脂肪类物
30、质、样品经过提取、皂化以及柱层析净化，除去脂肪类物质、样品经过提取、皂化以及柱层析净化，除去脂肪类物质、色素等杂质后，再通过液相色谱仪中的色谱柱，将苯并芘从多环芳烃物质中色素等杂质后，再通过液相色谱仪中的色谱柱，将苯并芘从多环芳烃物质中色素等杂质后，再通过液相色谱仪中的色谱柱，将苯并芘从多环芳烃物质中色素等杂质后，再通过液相色谱仪中的色谱柱，将苯并芘从多环芳烃物质中分离出来。求出样品中苯并芘的含量。分离出来。求出样品中苯并芘的含量。分离出来。求出样品中苯并芘的含量。分离出来。求出样品中苯并芘的含量。仪器：仪器：(1)(1)液相色谱仪：液相色谱仪：液相色谱仪：液相色谱仪：色谱柱：色谱柱：色谱柱：
31、色谱柱：ODSODS柱，柱长柱，柱长柱，柱长柱，柱长250250mmmm，4mm4mm；柱温：柱温：柱温：柱温：3030；流动相：流动相：流动相：流动相：7575甲醇；甲醇；甲醇；甲醇；流速：流速：流速：流速：2 2mLmLminmin。(2)(2)检测器：荧光检测器，激发波长检测器：荧光检测器，激发波长检测器：荧光检测器，激发波长检测器：荧光检测器，激发波长369369nmnm，荧光波长，荧光波长，荧光波长，荧光波长405405nmnm。第四十五张，PPT共五十二页，创作于2022年6月操作步骤：操作步骤：操作步骤：操作步骤：(1)(1)定性测定定性测定定性测定定性测定 用微量注射器吸取一定
32、量的苯并芘标准溶液和样用微量注射器吸取一定量的苯并芘标准溶液和样用微量注射器吸取一定量的苯并芘标准溶液和样用微量注射器吸取一定量的苯并芘标准溶液和样液，注入色谱仪内，根据苯并芘的出峰保留时间和样品中加标准液，注入色谱仪内，根据苯并芘的出峰保留时间和样品中加标准液，注入色谱仪内，根据苯并芘的出峰保留时间和样品中加标准液，注入色谱仪内，根据苯并芘的出峰保留时间和样品中加标准样产生重叠的情况进行定性。样产生重叠的情况进行定性。样产生重叠的情况进行定性。样产生重叠的情况进行定性。(2)(2)标准曲线的绘制标准曲线的绘制标准曲线的绘制标准曲线的绘制 用微量注射器准确吸取每用微量注射器准确吸取每用微量注射
33、器准确吸取每用微量注射器准确吸取每1 1mLmL含含含含1 1gg的苯并芘的苯并芘的苯并芘的苯并芘标准溶液标准溶液标准溶液标准溶液1 1、2 2、3 3、4 4、5 5uLuL按照上述实验条件进行操作，以获得相应按照上述实验条件进行操作，以获得相应按照上述实验条件进行操作，以获得相应按照上述实验条件进行操作，以获得相应的色谱图。然后分别测量各个色谱的峰面积，以峰面积为纵坐标，的色谱图。然后分别测量各个色谱的峰面积，以峰面积为纵坐标，的色谱图。然后分别测量各个色谱的峰面积，以峰面积为纵坐标，的色谱图。然后分别测量各个色谱的峰面积，以峰面积为纵坐标，标准苯并芘量为横坐标，绘制标准曲线。标准苯并芘量
34、为横坐标，绘制标准曲线。标准苯并芘量为横坐标，绘制标准曲线。标准苯并芘量为横坐标，绘制标准曲线。(3)(3)样品的测定：样品的测定：样品的测定：样品的测定：在上述实验条件下，吸取一定量经过柱净化在上述实验条件下，吸取一定量经过柱净化在上述实验条件下，吸取一定量经过柱净化在上述实验条件下，吸取一定量经过柱净化的样品提取液，注入液相色谱仪中进行分离、分析，测得峰面积，的样品提取液，注入液相色谱仪中进行分离、分析，测得峰面积，的样品提取液，注入液相色谱仪中进行分离、分析，测得峰面积，的样品提取液，注入液相色谱仪中进行分离、分析，测得峰面积，然后从标准曲线上查出相应于此面积的苯并芘含量。然后从标准曲线
35、上查出相应于此面积的苯并芘含量。然后从标准曲线上查出相应于此面积的苯并芘含量。然后从标准曲线上查出相应于此面积的苯并芘含量。第四十六张，PPT共五十二页，创作于2022年6月例例3、稠环芳烃的分析、稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。稠环芳烃多为致癌物质。稠环芳烃多为致癌物质。稠环芳烃多为致癌物质。固定相固定相固定相固定相：十八烷基硅烷化键合相十八烷基硅烷化键合相十八烷基硅烷化键合相十八烷基硅烷化键合相 流动相：流动相：流动相：流动相：20%20%甲醇甲醇甲醇甲醇-水水水水 100%100%甲醇甲醇甲醇甲醇 线性梯度淋洗，线性梯度淋洗，线性梯度淋洗，线性梯度淋洗，2%/2%/minmin 流
36、流流流 速：速：速：速：1 1mL/minmL/min 柱柱柱柱 温：温：温：温：50 50 C C 柱柱柱柱 压：压：压：压：70 70 10104 4 PaPa 检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器第四十七张，PPT共五十二页，创作于2022年6月 Waters 515Waters 515高效液相色谱泵，高效液相色谱泵，高效液相色谱泵，高效液相色谱泵，Waters 717Waters 717自动进样器，自动进样器，自动进样器，自动进样器，Waters 2487Waters 2487双波长紫外检测器，双波长紫外检测器，联想数据处理机，联想数据处理机，联想数
37、据处理机，联想数据处理机，Waters 3.9 X 150 mm C18Waters 3.9 X 150 mm C18不锈钢柱不锈钢柱流动相：甲醇、水体积比流动相：甲醇、水体积比流动相：甲醇、水体积比流动相：甲醇、水体积比3030：70 70 和和和和1515：8585两种，两种，两种，两种，超声波除气泡超声波除气泡超声波除气泡超声波除气泡例例4、鱼组织中喹乙醇残留量的检测、鱼组织中喹乙醇残留量的检测第四十八张，PPT共五十二页，创作于2022年6月无喹乙醇的鲤肌肉无喹乙醇的鲤肌肉无喹乙醇的鲤肌肉无喹乙醇的鲤肌肉喹乙醇标准品喹乙醇标准品喹乙醇标准品喹乙醇标准品含喹乙醇的鲤肌肉含喹乙醇的鲤肌肉含喹乙醇的鲤肌肉含喹乙醇的鲤肌肉第四十九张，PPT共五十二页，创作于2022年6月例例5 5、中药质量检测、中药质量检测芍药苷芍药苷芍药苷芍药苷白芍药材白芍药材白芍药材白芍药材第五十张，PPT共五十二页，创作于2022年6月血竭素血竭素 血竭药材血竭药材第五十一张，PPT共五十二页，创作于2022年6月2023/4/82023/4/8感谢大家观看第五十二张，PPT共五十二页，创作于2022年6月