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1、高效液相色谱仪的工作原理样品溶液中的各组分在两相(流动相、固定相)中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。高效液相色谱仪的系统组成高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内。柱体为直型不锈钢管，内径1-6mm,柱长5-40cm。发展趋势减小填料粒度和柱径以提高柱效。高效液相色谱的特点高压压力
2、可达150300kg/cm2。色谱柱每米降压为75kg/cm2以上。高速流速为10.0mL/min。高效塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度紫外检测器灵敏度可达。同时消耗样品少。主要分离类型液-固吸附色谱：适用于分离相对分子质量中等的油性试样。液-液分配色谱：主要根据流动相与固定相的极性差异分离。离子交换色谱：应用于离子及可离解的化合物。离子对色谱：离子结合形成疏水性离子化合物。排阻色谱：按分子大小分离。出峰速度？亲和色谱：利用生物大分子与固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择分离。高效液相色谱仪的应用高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制
3、,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。液相色谱-质谱连用技术受到普遍重视,如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等;液相色谱-红外光谱连用也发展很快,如在环境污染分析测定水中的烃类,海水中的不挥发烃类,使环境污染分析得到新的发展。硅胶层析后活性样品的液相分离图谱硅胶层析后活性样品的液相分离图谱色谱图示例色谱图示例操
4、作过程中应注意的事项流动相1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。样品1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的35倍；色谱柱：1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；2、使用符合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；6、不要高压冲洗柱子；7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；