《质粒DNA提取纯化与鉴定.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《质粒DNA提取纯化与鉴定.pptx（14页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、2 2、载体性质、载体性质 （1）.复制能力；（2）.容纳外源DNA的能力；（3）.选择标记：抗生素耐受。（4）.引入多克隆位点；（5）.引入重组选择标记。第1页/共14页3 3、载体分类：、载体分类：按功能分 1.克隆载体 2.表达载体 按宿主性质 1.原核载体:质粒载体、粘粒、噬 菌粒、噬菌体、噬菌体M13等 2.真核载体:逆转录病毒、腺病毒、昆虫杆状病毒 3.穿梭载体 第2页/共14页第3页/共14页第4页/共14页 4 4、常用质粒载体、常用质粒载体 例如：1.pBR322、pUC 18/19、pUC118/119、pGEM、pBluescript、pBluescript SK/KS等
2、 2.pET、pGEMEX、pGEX等 3.pALTER等 5 5、常用质粒宿主、常用质粒宿主：HB101、DH5、TG1、JM系列等 BL21（DE3）等第5页/共14页第6页/共14页第7页/共14页二、质粒DNA的分离纯化（一）、细菌培养物的生长和收获（二）、质粒DNA的提取 1、碱裂解法小量制备质粒DNA:a、细菌的收集；b、加入100l溶液，重悬细菌；c、加入200l溶液，使细菌悬液清亮；d、加入150l溶液，冰上放置3-5分钟；第8页/共14页 e、加入450l酚：氯仿混匀；f、12000rpm，离心5分钟；g、吸取上清，加入2倍体积无水乙醇，室温 静置2分钟；h、12000rpm离心5分钟，弃上清；i、75%乙醇洗涤，室温晾干；j、溶于适量TE/R中。第9页/共14页三、质粒DNA的鉴定（一）、紫外光谱分析 通常使用样品的吸光度鉴定其浓度和纯度。（二）、EB荧光分析（三）、电泳鉴定 在凝胶电泳中，DNA分子的迁移速度与分子量的对数值成反比关系。质粒DNA经单一酶切后与DNA Marker进行电泳对照，即可知该质粒的分子量大小。第10页/共14页第11页/共14页第12页/共14页质粒的电泳图谱质粒的电泳图谱第13页/共14页感谢您的观看！第14页/共14页