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1、基础学问基础学问（一）（一）固定化酶的应用实例固定化酶的应用实例生产高果糖浆生产高果糖浆（1）高果糖浆的生产原理：）高果糖浆的生产原理：葡萄糖异构酶葡萄糖异构酶果糖果糖葡萄糖葡萄糖(2)葡萄糖异构酶固定：葡萄糖异构酶固定：将葡萄糖异构酶固定在颗粒状载体将葡萄糖异构酶固定在颗粒状载体上，装入反应柱中。上，装入反应柱中。(3)高果糖浆的生产操作：高果糖浆的生产操作：从反应柱上端注入葡萄糖溶液，从从反应柱上端注入葡萄糖溶液，从下端流出果糖溶液，一个反应柱可连续下端流出果糖溶液，一个反应柱可连续运用半年。运用半年。2.固定化酶的反应柱示意图固定化酶的反应柱示意图（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术
2、1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法包埋法包埋法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋将酶（或细胞）包埋在微小网格里在微小网格里包埋法包埋法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋将酶（或细胞）包埋在微小网格里在微小网格里包埋法包埋法化学结合法化学结合法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋将酶（
3、或细胞）包埋在微小网格里在微小网格里将酶（或细胞）相将酶（或细胞）相互连接起来互连接起来包埋法包埋法化学结合法化学结合法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋将酶（或细胞）包埋在微小网格里在微小网格里将酶（或细胞）相将酶（或细胞）相互连接起来互连接起来包埋法包埋法化学结合法化学结合法吸附法吸附法（二）固定化细胞技术（二）固定化细胞技术1.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋将酶（或细胞）包埋在微小网格里在微小网格里将酶（或细胞）相将酶（或细胞）相互连接起来互连接起来将酶（或细胞）吸附将酶（或细胞）吸附
4、在载体表面上在载体表面上包埋法包埋法化学结合法化学结合法吸附法吸附法【比较比较】酶和细胞的固定方法和特点酶和细胞的固定方法和特点固定对象固定对象酶酶细胞细胞适宜固定法适宜固定法化学结合法、化学结合法、物理吸附法物理吸附法包埋法包埋法特特 点点体积小，固定体积小，固定一种酶。一种酶。包埋法容易丢包埋法容易丢失失体积大，固定体积大，固定一系列酶。一系列酶。难以化学结合难以化学结合和吸附和吸附2.固定化酶和固定化细胞的联系与区分固定化酶和固定化细胞的联系与区分2.固定化酶和固定化细胞的联系与区分固定化酶和固定化细胞的联系与区分联系：联系：应用相同，都能催化某些反应应用相同，都能催化某些反应2.固定化
5、酶和固定化细胞的联系与区分固定化酶和固定化细胞的联系与区分联系：联系：应用相同，都能催化某些反应应用相同，都能催化某些反应区分：区分：1)固定化细胞技术操作简洁，成本低，固定化细胞技术操作简洁，成本低，简洁回收；简洁回收；2)固定化细胞技术对酶活性影响更小；固定化细胞技术对酶活性影响更小；3)固定化细胞固定的一系列酶；固定化细胞固定的一系列酶；4)由于大分子难以通过细胞膜，因此固由于大分子难以通过细胞膜，因此固定化细胞的应用有确定的限制；定化细胞的应用有确定的限制；思索将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨思索将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应酸的发酵过程变为连续的酶反应，应当固定（酶
6、、细胞）；若将蛋白质变当固定（酶、细胞）；若将蛋白质变成氨基酸，应当固定（酶、细胞）。成氨基酸，应当固定（酶、细胞）。思索将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨思索将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应酸的发酵过程变为连续的酶反应，应当固定（酶、细胞）；若将蛋白质变当固定（酶、细胞）；若将蛋白质变成氨基酸，应当固定（酶、细胞）。成氨基酸，应当固定（酶、细胞）。3.固定化细胞的材料：固定化细胞的材料：固定化细胞时应当选用不溶于固定化细胞时应当选用不溶于水的多孔性载体材料，如明胶、琼水的多孔性载体材料，如明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等丙烯酰胺等1
7、.制备固定化酵母细胞制备固定化酵母细胞（1）酵母细胞的活化：）酵母细胞的活化：1g干酵母干酵母10mL蒸馏水蒸馏水50mL烧杯烧杯搅拌匀整搅拌匀整放置放置1h，使之活化。，使之活化。2.试验设计试验设计思索思索2活化是指什么？活化是指什么？1.制备固定化酵母细胞制备固定化酵母细胞（1）酵母细胞的活化：）酵母细胞的活化：1g干酵母干酵母10mL蒸馏水蒸馏水50mL烧杯烧杯搅拌匀整搅拌匀整放置放置1h，使之活化。，使之活化。2.试验设计试验设计活化是指让处于休眠状态的微生活化是指让处于休眠状态的微生物重新复原正常生活状态的过程。物重新复原正常生活状态的过程。思索思索2活化是指什么？活化是指什么？1
8、.制备固定化酵母细胞制备固定化酵母细胞（1）酵母细胞的活化：）酵母细胞的活化：1g干酵母干酵母10mL蒸馏水蒸馏水50mL烧杯烧杯搅拌匀整搅拌匀整放置放置1h，使之活化。，使之活化。2.试验设计试验设计（2）配制）配制CaCl2溶液：溶液：0.83gCaCl2150mL蒸馏水蒸馏水 200mL烧杯烧杯溶解备用。溶解备用。（3）配制海藻酸钠溶液：）配制海藻酸钠溶液：0.7g海藻酸海藻酸钠钠10mL水水50mL烧杯烧杯酒精灯微火（或间断）加热，并不断酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化搅拌，使之溶化蒸馏水定容到蒸馏水定容到10mL。（3）配制海藻酸钠溶液：）配制海藻酸钠溶液：0.7g海藻
9、酸海藻酸10mL水水50mL烧杯烧杯酒酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化使之溶化蒸馏水定容到蒸馏水定容到10mL。思索思索3微火加热并不断搅拌的目微火加热并不断搅拌的目的是什么？的是什么？防止海藻酸钠焦糊。防止海藻酸钠焦糊。（3）配制海藻酸钠溶液：）配制海藻酸钠溶液：0.7g海藻酸海藻酸10mL水水50mL烧杯烧杯酒酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化使之溶化蒸馏水定容到蒸馏水定容到10mL。思索思索3微火加热并不断搅拌的目微火加热并不断搅拌的目的是什么？的是什么？(4)海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：
10、海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。入到注射器中。(4)海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。入到注射器中。思索思索4为什么要海藻酸钠溶液冷为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？却后才能加入酵母细胞？(4)海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室将溶化的海藻酸钠
11、溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。入到注射器中。思索思索4为什么要海藻酸钠溶液冷为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？却后才能加入酵母细胞？防止高温杀死酵母细胞。防止高温杀死酵母细胞。（5）固定化酵母细胞：）固定化酵母细胞：以恒定速度缓慢地将注射器以恒定速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到中的溶液滴加到CaCl2溶液中，溶液中，形成凝胶珠状颗粒。形成凝胶珠状颗粒。（6）冲洗：将固定的酵母细胞凝）冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗胶珠用蒸馏水冲洗23次。次。（二）（二）固定化酵母细胞的发酵固定化酵母细胞的发酵（二）（二）固定化酵母细
12、胞的发酵固定化酵母细胞的发酵（6）冲洗：将固定的酵母细胞凝）冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗胶珠用蒸馏水冲洗23次。次。（7）发酵：）发酵：150mL10葡萄糖葡萄糖固定化酵母细胞固定化酵母细胞200mL锥形瓶锥形瓶密封密封25发酵发酵24h。思索思索5发酵过程中锥形瓶为什么要发酵过程中锥形瓶为什么要密封？密封？思索思索6锥形瓶中的气泡和酒精是怎锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？样形成的？思索思索7在利用固定化酶或固定化细在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，须要无菌操作胞进行生产的过程中，须要无菌操作吗？吗？思索思索5发酵过程中锥形瓶为什么要发酵过程中锥形瓶为什么要密封？密封？
13、思索思索6锥形瓶中的气泡和酒精是怎锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？样形成的？思索思索7在利用固定化酶或固定化细在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，须要无菌操作胞进行生产的过程中，须要无菌操作吗？吗？酵母菌的酒精发酵须要缺氧条件。酵母菌的酒精发酵须要缺氧条件。思索思索5发酵过程中锥形瓶为什么要发酵过程中锥形瓶为什么要密封？密封？思索思索6锥形瓶中的气泡和酒精是怎锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？样形成的？思索思索7在利用固定化酶或固定化细在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，须要无菌操作胞进行生产的过程中，须要无菌操作吗？吗？酵母菌的酒精发酵须要缺氧条件。酵母菌的酒精发酵须要缺氧
14、条件。酵母菌进行无氧呼吸产生的。酵母菌进行无氧呼吸产生的。思索思索5发酵过程中锥形瓶为什么要发酵过程中锥形瓶为什么要密封？密封？思索思索6锥形瓶中的气泡和酒精是怎锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？样形成的？思索思索7在利用固定化酶或固定化细在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，须要无菌操作胞进行生产的过程中，须要无菌操作吗？吗？酵母菌的酒精发酵须要缺氧条件。酵母菌的酒精发酵须要缺氧条件。酵母菌进行无氧呼吸产生的。酵母菌进行无氧呼吸产生的。须要。须要。干脆运用酶、固定化酶和固定化细胞区分干脆运用酶、固定化酶和固定化细胞区分类型类型优点优点不足不足直接直接使用酶使用酶 固定固定化酶化酶 固定
15、化固定化细胞细胞 类型类型优点优点不足不足直接直接使用酶使用酶 类型类型优点优点不足不足直接直接使用酶使用酶 催化效率催化效率高，低耗高，低耗能、低污能、低污染等。染等。类型类型优点优点不足不足直接直接使用酶使用酶 催化效率催化效率高，低耗高，低耗能、低污能、低污染等。染等。对环境条件特别敏对环境条件特别敏感，简洁失活；溶感，简洁失活；溶液中的酶很难回收，液中的酶很难回收，不能被次利用，提不能被次利用，提高了生产成本；反高了生产成本；反应后酶会混在产物应后酶会混在产物中，可能影响产品中，可能影响产品质量。质量。类型类型优点优点不足不足固定固定化酶化酶 类型类型优点优点不足不足固定固定化酶化酶
16、酶既能与反酶既能与反应物接触，应物接触，又能与产物又能与产物分别，同时，分别，同时，固定在载体固定在载体上的酶还可上的酶还可以被反复利以被反复利用。用。类型类型优点优点不足不足固定固定化酶化酶 酶既能与反酶既能与反应物接触，应物接触，又能与产物又能与产物分别，同时，分别，同时，固定在载体固定在载体上的酶还可上的酶还可以被反复利以被反复利用。用。一种酶只能催一种酶只能催化一种化学反化一种化学反应，而在生产应，而在生产实践中，很多实践中，很多产物的形成都产物的形成都通过一系列的通过一系列的酶促反应才能酶促反应才能得到的。得到的。类型类型优点优点不足不足固定固定化细化细胞胞 类型类型优点优点不足不足
17、固定固定化细化细胞胞 成本低，成本低，操作更简操作更简洁。洁。类型类型优点优点不足不足固定固定化细化细胞胞 成本低，成本低，操作更简操作更简洁。洁。固定后的细胞固定后的细胞与反应物不简与反应物不简洁接近，可能洁接近，可能导致反应效果导致反应效果下降等。下降等。例例1下列有关固定化技术的叙述，正下列有关固定化技术的叙述，正确的是（确的是（）A.固定化酶只是在细胞内才能发挥作用固定化酶只是在细胞内才能发挥作用B.固定化酶能提高酶的利用率固定化酶能提高酶的利用率C.酶的固定是酶分别纯化的常用方法酶的固定是酶分别纯化的常用方法D.固定化酶的固定化方式就是吸附在固定化酶的固定化方式就是吸附在固体表面上。
18、固体表面上。例例1下列有关固定化技术的叙述，正下列有关固定化技术的叙述，正确的是（确的是（）A.固定化酶只是在细胞内才能发挥作用固定化酶只是在细胞内才能发挥作用B.固定化酶能提高酶的利用率固定化酶能提高酶的利用率C.酶的固定是酶分别纯化的常用方法酶的固定是酶分别纯化的常用方法D.固定化酶的固定化方式就是吸附在固定化酶的固定化方式就是吸附在固体表面上。固体表面上。例例2.溶解海藻酸钠，最好接受溶解海藻酸钠，最好接受_加加热的方法热的方法A.小火间断小火间断B.小火持续小火持续 C.大火间断大火间断D.大火持续大火持续例例2.溶解海藻酸钠，最好接受溶解海藻酸钠，最好接受_加加热的方法热的方法A.小
19、火间断小火间断B.小火持续小火持续 C.大火间断大火间断D.大火持续大火持续例例3.关于酵母菌的叙述，正确的是关于酵母菌的叙述，正确的是A.酵母菌在养分物质足够时、环境适宜酵母菌在养分物质足够时、环境适宜时，依靠有性生殖进行繁殖时，依靠有性生殖进行繁殖B.酵母菌的代谢类型时异养厌氧型酵母菌的代谢类型时异养厌氧型C.酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核膜、各种的细胞器膜等膜膜、各种的细胞器膜等膜D.用酵母菌酿酒时，应先密封后通气用酵母菌酿酒时，应先密封后通气例例3.关于酵母菌的叙述，正确的是关于酵母菌的叙述，正确的是A.酵母菌在养分物质足够时、环境适宜酵母菌在养分物质
20、足够时、环境适宜时，依靠有性生殖进行繁殖时，依靠有性生殖进行繁殖B.酵母菌的代谢类型时异养厌氧型酵母菌的代谢类型时异养厌氧型C.酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核膜、各种的细胞器膜等膜膜、各种的细胞器膜等膜D.用酵母菌酿酒时，应先密封后通气用酵母菌酿酒时，应先密封后通气例例4.将酵母菌的培育液由富氧状态变为将酵母菌的培育液由富氧状态变为缺氧状态，下面加快的一项是缺氧状态，下面加快的一项是A.CO2的释放的释放B.丙酮酸的氧化丙酮酸的氧化 C.葡萄糖的利用葡萄糖的利用D.ATP的形成的形成例例4.将酵母菌的培育液由富氧状态变为将酵母菌的培育液由富氧状态变为缺氧状态，
21、下面加快的一项是缺氧状态，下面加快的一项是A.CO2的释放的释放B.丙酮酸的氧化丙酮酸的氧化 C.葡萄糖的利用葡萄糖的利用D.ATP的形成的形成例例5固定化酶的优点是固定化酶的优点是A有利于增加酶的活性有利于增加酶的活性 B有利于产物的纯化有利于产物的纯化C有利于提高反应速度有利于提高反应速度 D有利于酶发挥作用有利于酶发挥作用例例5固定化酶的优点是固定化酶的优点是A有利于增加酶的活性有利于增加酶的活性 B有利于产物的纯化有利于产物的纯化C有利于提高反应速度有利于提高反应速度 D有利于酶发挥作用有利于酶发挥作用例例6 下列不是用于包埋法固定化下列不是用于包埋法固定化细胞的载体是细胞的载体是A琼脂糖琼脂糖B醋酸纤维素醋酸纤维素 C聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺D聚乙烯树脂聚乙烯树脂例例6 下列不是用于包埋法固定化下列不是用于包埋法固定化细胞的载体是细胞的载体是A琼脂糖琼脂糖B醋酸纤维素醋酸纤维素 C聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺D聚乙烯树脂聚乙烯树脂例例7固定化细胞技术不包括固定化细胞技术不包括A包埋法包埋法B化学结合化化学结合化C物理法物理法D生物法生物法例例7固定化细胞技术不包括固定化细胞技术不包括A包埋法包埋法B化学结合化化学结合化C物理法物理法D生物法生物法