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1、大黄中葱醍类成分的提取、别离和鉴定实验目的（1）熟悉葱醍类成分的提取别离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习慈醍类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO Na CO x NaOH浓盐酸、乙酸乙酯、石油醴、乙323醴、普通滤纸 薄层层析硅胶板（2.5 cmX10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺 子 点样毛细管 样品管等。仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯 滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分 液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子 循环水式多用真空泵、铁架 台等。三、实验原理大黄为蓼科植物，味苦，性
2、寒，具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要成分为 为葱醍化合物，含量约为3%5%,大局部与葡萄糖结合昔，游离昔元有大黄酸、大黄 素、芦荟大黄素 大黄酚 大黄素甲醴等。其中，大黄酸具有竣基，酸性最强；大 黄素具有p -酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醴 和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进 行梯度萃取别离。OH O OH大黄酸R 二H1R二COOH2大黄素R 二CH1 3R 二OH2芦荟大黄素R =CH 0H 12R 二H2大黄素甲醴大黄酚U!R 二CH13R 二CH13实验内容R=OCH23R 二H2大黄粗粉10g大黄素的提
3、取、别离流程图20%HSO 150 ml24加热1h,抽滤、干燥滤饼I 150ml乙醛回流提取1 h乙醴层5%NaHC0 萃取3水层（紫红色）|hci乙醴层5%Na CO23大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙隧0 NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醴沉淀（混合物）具体操作步骤1.游离蕙酿的提E（1）酸水解：称取大黄粗粉10g,加20%H SO水溶液150mL,在水浴上加热1小时，放 24冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6）,于70干燥后，研碎，置250mL圆 底烧瓶中，加入乙醴150mL回流提取1小时（调45,回流即可），得到乙醴提取液。（2）葱醍
4、类成分的提取：乙醴提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、 大黄素甲醴和大黄酚。薄层板为硅胶一CMC粘合板，展开剂为石油醴（6090）：乙酸乙 酯（7： 3）近水平或直立展开，在可见光下，可看到四个斑点。其中最上面黄色斑点为大黄 酚和大黄素甲醴的混合物,在此条件下,不能分开,其余3个斑点依Rf值（由大到小）的顺序 是大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点），记录图谱并计算 Rf值。2 . PH梯度萃取别离（1）将乙醴提取液加入250mL分液漏斗中（使用前先检漏），以35 mL 5 % NaHCO水3溶液萃取三次，乙醴层经薄层层析检查（展开剂同上），指示已提尽大期
5、叁后，合并三次NaHCO 3萃取液，用浓盐酸酸化至PH 2-3左右，析出大黄酸沉淀。（注意：加酸时应缓慢加入，以防酸液溢出，如出现分层现象，需将上层乙醴蒸去才能析出固体）。抽滤后，刮下颗粒并称重。（2）经5% NaHCO水溶液萃取后的乙醴层，继以35 mL 5 % NaCO水溶液萃取三次，乙 323醴层经薄层检查（展开剂同上），指示已提尽大黄素后，合并三次Na C0萃取液，用浓盐酸 23酸化至PH2-3左右，析出大黄素沉淀。（酸化时注意操作同前）。抽滤后，刮下颗粒并称重。（3）经5% NaCO水溶液萃取过后乙醴层以35 mL % NaOH水溶液萃取四次，乙醴层经 23薄层检查（展开剂同上），指
6、示已提尽后，合并三次NaOH萃取液，用浓盐酸酸化至PH2-3左右，析出芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醴沉淀混合物。（酸化时注意操作同前）。抽滤后，刮下颗粒并称重。3 .样品鉴定（1）碱液试验 分别取各菌:醍结晶数毫克置于样品管中，加2%氢氧化钠溶液1ml,观察颜色变化。凡有互为邻位或对位羟基的葱醍呈蓝紫至蓝色，其它羟基慈醍呈红色。五、考前须知:（1）游离慈醍的提取要控制温度，回流不宜太剧烈。（2） pH梯度萃取别离时，以保证提取充分，可以用薄层色谱作监测。（3）注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。六、数据记录、结果讨论与分析：Rf大黄素二5二Rf芦荟大黄素=5=1、大黄酸沉淀2、大黄
7、素沉淀3、芦荟大黄素、大黄酚、 大黄素甲醛沉淀混合物分别取各上述沉淀（慈醍结晶）数毫克置于样品管中，加2%氢氧化钠溶液1ml后，观察到各样品管中溶液均呈红色、但第1根管中颜色略淡。七、思考题1、简述大黄中5种游离羟基慈酿化合物的酸性与结构的关系。答:A大黄酸R二COOH2B大黄素R=CHR=OH132C芦荟大黄素R=CH OHR二H122D大黄素甲醴R=CHR二OCH1323E大黄酚R=CHR二H132酸性：ABCED梯度萃取法的原理是什么如何利用该方法别离大黄中的5种游离羟基葱醍化合物答：pH梯度萃取法的原理是由于溶剂系统pH变化而改变了它们的存在状态(游离型或 解离型)，从而改变了他们在溶
8、剂系统中的分配系数。由于各羟基葱醍结构上的不同所表现的酸性不同，用pH梯度萃取法别离他们；大黄酚 和大黄素甲醴酸性相近，利用其极性的差异，用柱色谱别离之。3 .结合本实验，思考设计实验方案所需因素答：游离慈醍的提取要控制温度，回流不宜太剧烈。要注意碱液浓度及萃取时的静置时间对 实验结果的影响。八、参考文献(1)吴立军主编，天然药物化学实验指导北京；人民卫生出版社，2011(2)康廷国主编，中成药薄层色谱鉴别.北京：人民出版社，1995(3)徐选明，刘新 大黄中大黄素提取工艺的优化中国中医药信息杂志2004, 11, 5(4)李乃明，丁宙大黄素的别离和结构鉴定 广州医学院学报1985, 13, 3(5)朱庆玲，李瑞和大黄中大黄素的提取工艺研究 时珍国医国药2006, 17, 3