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1、商业化产品中常见的化学发光系统 鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统HH2 2OO2 2+NHNH2 2OOOONHNHNHNHN N2 2OHOH-HRPHRPNHNH2 2COCO2 2-COCO2 2-+Photon(425nm)+Photon(425nm)R ROHOHR ROHOHN NS SR RB BOHOHOHOH增强剂增强剂增强剂增强剂（EnhancerEnhancer）商业化产品中常见的化学发光系统商业化产品中常见的化学发光系统发光信号检测发光信号检测光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（光敏二极管、光敏电池、光
2、电偶合器（光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（CCDCCD）结构简单、性能稳定结构简单、性能稳定结构简单、性能稳定结构简单、性能稳定但灵敏度低、线性范围较窄。但灵敏度低、线性范围较窄。但灵敏度低、线性范围较窄。但灵敏度低、线性范围较窄。主要特点主要特点主要特点主要特点原理原理原理原理光信号光信号光信号光信号光电转换器件光电转换器件光电转换器件光电转换器件电压或电流信号电压或电流信号电压或电流信号电压或电流信号放大放大放大放大单光子计数式发光检测仪单光子计数式发光检测仪计计计计算算算算机机机机打打打打印印印印机机机机发光仪控制模块发光仪控制模块发光仪控制模块发光仪控制模块发光仪执行模块发光仪执行模
3、块发光仪执行模块发光仪执行模块控制器控制器控制器控制器程控高压程控高压程控高压程控高压计数计数计数计数/贮存器贮存器贮存器贮存器单光子计数器单光子计数器单光子计数器单光子计数器样品运动样品运动样品运动样品运动/定位装置定位装置定位装置定位装置程控自动门锁及检测装置程控自动门锁及检测装置程控自动门锁及检测装置程控自动门锁及检测装置原位注射泵原位注射泵原位注射泵原位注射泵光生物学技术的应用范围光生物学技术的应用范围军事侦测军事侦测军事侦测军事侦测公安稽查公安稽查公安稽查公安稽查卫生检疫卫生检疫卫生检疫卫生检疫药物筛查药物筛查药物筛查药物筛查医学诊断医学诊断医学诊断医学诊断环境检测环境检测环境检测环
4、境检测航天遥感航天遥感航天遥感航天遥感生命科学生命科学生命科学生命科学 已成为现代生物技术最活跃的领已成为现代生物技术最活跃的领已成为现代生物技术最活跃的领已成为现代生物技术最活跃的领域之一域之一域之一域之一光生物学检测技术的优越性光生物学检测技术的优越性彻底消除了放射性危害彻底消除了放射性危害彻底消除了放射性危害彻底消除了放射性危害无半衰期限制，试剂稳定无半衰期限制，试剂稳定无半衰期限制，试剂稳定无半衰期限制，试剂稳定性和有效期大大延长性和有效期大大延长性和有效期大大延长性和有效期大大延长容易实现连续、动态、重容易实现连续、动态、重容易实现连续、动态、重容易实现连续、动态、重复测定复测定复测
5、定复测定适合于复合标记系统进行多指适合于复合标记系统进行多指适合于复合标记系统进行多指适合于复合标记系统进行多指标并行测定标并行测定标并行测定标并行测定操作简单，反应速度快，容易操作简单，反应速度快，容易操作简单，反应速度快，容易操作简单，反应速度快，容易实现自动化实现自动化实现自动化实现自动化灵敏度和线性范围超过以往技灵敏度和线性范围超过以往技灵敏度和线性范围超过以往技灵敏度和线性范围超过以往技术术术术几种标记几种标记/检测技术灵敏度的比较检测技术灵敏度的比较酶标酶标酶标酶标荧光荧光荧光荧光放免放免放免放免发光发光发光发光灵敏度灵敏度灵敏度灵敏度(mol/L)(mol/L)1010-18-1
6、81010-15-151010-12-121010-9-9几种标记几种标记/检测技术线性范围的比较检测技术线性范围的比较酶标酶标酶标酶标荧光荧光荧光荧光放免放免放免放免发光发光发光发光线性范围线性范围线性范围线性范围10105 510104 410103 310102 2几种标记几种标记/检测试剂的有效期比较检测试剂的有效期比较酶标酶标酶标酶标荧光荧光荧光荧光放免放免放免放免发光发光发光发光有效期（月）有效期（月）有效期（月）有效期（月）1818181815151515121212129 9 9 96 6 6 63 3 3 30 0 0 0020,00040,00060,00080,00010
7、0,000试剂盒试剂盒仪器仪器特殊防护特殊防护治理污染治理污染人民币人民币人民币人民币三种免疫测定技术的成本及费用三种免疫测定技术的成本及费用三种免疫测定技术的成本及费用三种免疫测定技术的成本及费用放免放免放免放免酶标酶标酶标酶标发光发光发光发光抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物质
8、的球蛋白。质的球蛋白。质的球蛋白。质的球蛋白。免疫分析技术基本原理免疫分析技术基本原理利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法均相法均相法（HomogeneousHomogeneous）免疫凝集法：免疫凝集法：免疫凝集法：免疫凝集法：自然凝集：血型测定自然凝集：血型测定自然凝集：血型测定自然凝集：血型测定肥达氏反应；肥达氏反应；肥达氏反应；肥达氏反应；敏化凝集：血球凝集法敏化凝集：血球凝集法敏化凝集：血球凝集法敏
9、化凝集：血球凝集法凝胶（微粒）比浊法凝胶（微粒）比浊法凝胶（微粒）比浊法凝胶（微粒）比浊法免疫扩散法；免疫电泳法近场液闪法，免疫扩散法；免疫电泳法近场液闪法，免疫扩散法；免疫电泳法近场液闪法，免疫扩散法；免疫电泳法近场液闪法，酶酶酶酶-辅酶（亚基）配位法辅酶（亚基）配位法辅酶（亚基）配位法辅酶（亚基）配位法荧光偏振法，荧光共振法荧光偏振法，荧光共振法荧光偏振法，荧光共振法荧光偏振法，荧光共振法吖啶酯水解法，生物传感器吖啶酯水解法，生物传感器吖啶酯水解法，生物传感器吖啶酯水解法，生物传感器非均相法非均相法（HeterogeneousHeterogeneous）免疫印迹（免疫印迹（免疫印迹（免疫印
10、迹（Western-blotWestern-blot）：）：）：）：基因表达分析、基因表达分析、基因表达分析、基因表达分析、HIVHIV感染确认实验感染确认实验感染确认实验感染确认实验免疫组织化学技术：原位基因表达分析、临床病理学分析免疫组织化学技术：原位基因表达分析、临床病理学分析免疫组织化学技术：原位基因表达分析、临床病理学分析免疫组织化学技术：原位基因表达分析、临床病理学分析纸片法：早孕快速检测、吸毒检测快速、献血快速检测纸片法：早孕快速检测、吸毒检测快速、献血快速检测纸片法：早孕快速检测、吸毒检测快速、献血快速检测纸片法：早孕快速检测、吸毒检测快速、献血快速检测放射免疫法（放射免疫法（
11、放射免疫法（放射免疫法（RIARIA）：）：）：）：沉降法（放免）、固相法（免放，沉降法（放免）、固相法（免放，沉降法（放免）、固相法（免放，沉降法（放免）、固相法（免放，IRMAIRMA）荧光免疫法（荧光免疫法（荧光免疫法（荧光免疫法（FIAFIA）；）；）；）；酶联免疫法（酶联免疫法（酶联免疫法（酶联免疫法（EIAEIA，ELISAELISA）酶联荧光法（酶联荧光法（酶联荧光法（酶联荧光法（FEIAFEIA）、）、）、）、化学发光法（化学发光法（化学发光法（化学发光法（LIALIA）酶联化学发光法（酶联化学发光法（酶联化学发光法（酶联化学发光法（ELIAELIA）、）、）、）、时间分辨荧光
12、法（时间分辨荧光法（时间分辨荧光法（时间分辨荧光法（DELFIADELFIA）、）、）、）、电化学发电化学发电化学发电化学发光法（光法（光法（光法（ECLIAECLIA）；）；）；）；夹心法的剂量夹心法的剂量-反应关系曲线反应关系曲线信号强度（信号强度（信号强度（信号强度（Y Y Y Y）线性范围线性范围线性范围线性范围待测物浓度（待测物浓度（待测物浓度（待测物浓度（X X X X）Hook(Hook(Hook(Hook(前滞前滞前滞前滞)效应效应效应效应分析灵敏度（最低检测限）（分析灵敏度（最低检测限）（分析灵敏度（最低检测限）（分析灵敏度（最低检测限）（95%95%95%95%可信度）：可
13、信度）：可信度）：可信度）：S0 S0 S0 S0+2SD2SD2SD2SD在该曲线上所对应的浓度值。在该曲线上所对应的浓度值。在该曲线上所对应的浓度值。在该曲线上所对应的浓度值。功能灵敏度：功能灵敏度：功能灵敏度：功能灵敏度：测定误差（变异）测定误差（变异）测定误差（变异）测定误差（变异）20%20%20%20%的最低可检测浓度。的最低可检测浓度。的最低可检测浓度。的最低可检测浓度。线性范围：线性范围：线性范围：线性范围：（分析）（分析）（分析）（分析）功能灵敏度功能灵敏度功能灵敏度功能灵敏度-变异变异变异变异20%20%20%20%的最高检测浓度的最高检测浓度的最高检测浓度的最高检测浓度相
14、关系数相关系数相关系数相关系数0.990.990.990.99的曲线范围的曲线范围的曲线范围的曲线范围竞争法的剂量竞争法的剂量-反应关系曲线反应关系曲线待测物浓度（待测物浓度（待测物浓度（待测物浓度（X X X X）信号强度（信号强度（信号强度（信号强度（Y Y Y Y）线性范围线性范围线性范围线性范围分析灵敏度（最低检测限）（分析灵敏度（最低检测限）（分析灵敏度（最低检测限）（分析灵敏度（最低检测限）（95%95%95%95%可信度）：可信度）：可信度）：可信度）：S0-2SD S0-2SD S0-2SD S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值在该曲线上所对应的浓度值在该曲线上所对应的浓度值在
15、该曲线上所对应的浓度值功能灵敏度：功能灵敏度：功能灵敏度：功能灵敏度：测定误差（变异）测定误差（变异）测定误差（变异）测定误差（变异）20%20%20%20%的最低可检测浓度的最低可检测浓度的最低可检测浓度的最低可检测浓度线性范围：线性范围：线性范围：线性范围：（分析）（分析）（分析）（分析）功能灵敏度功能灵敏度功能灵敏度功能灵敏度-变异变异变异变异20%20%20%20%的最高检测浓度的最高检测浓度的最高检测浓度的最高检测浓度相关系数相关系数相关系数相关系数0.990.990.990.99的曲线范围的曲线范围的曲线范围的曲线范围发光免疫分析基本操作步骤（一步法）发光免疫分析基本操作步骤（一步
16、法）待测样品待测样品待测样品待测样品标记抗体或抗原标记抗体或抗原标记抗体或抗原标记抗体或抗原洗涤去除未结合的反应物洗涤去除未结合的反应物洗涤去除未结合的反应物洗涤去除未结合的反应物发光底物发光底物发光底物发光底物仪器检测仪器检测仪器检测仪器检测包被抗体或抗原的反应管包被抗体或抗原的反应管包被抗体或抗原的反应管包被抗体或抗原的反应管反应反应反应反应30-6030-6030-6030-60分钟分钟分钟分钟反应反应反应反应0-50-50-50-5分钟分钟分钟分钟发光免疫分析基本操作步骤（二步法）发光免疫分析基本操作步骤（二步法）待测样品待测样品待测样品待测样品洗涤去除未结合的反应物洗涤去除未结合的反
17、应物洗涤去除未结合的反应物洗涤去除未结合的反应物发光底物发光底物发光底物发光底物仪器检测仪器检测仪器检测仪器检测包被抗体或抗原的反应管包被抗体或抗原的反应管包被抗体或抗原的反应管包被抗体或抗原的反应管反应反应反应反应30-6030-6030-6030-60分钟分钟分钟分钟反应反应反应反应0-50-50-50-5分钟分钟分钟分钟标记抗体或抗原标记抗体或抗原标记抗体或抗原标记抗体或抗原洗涤去除未结合的反应物洗涤去除未结合的反应物洗涤去除未结合的反应物洗涤去除未结合的反应物反应反应反应反应30-6030-6030-6030-60分钟分钟分钟分钟发光免疫分析技术发光免疫分析技术的现状及应注意的问题的现
18、状及应注意的问题目前已商品化的光生物学标目前已商品化的光生物学标记检测技术整体性能比较记检测技术整体性能比较技术类型技术类型 标记、反应体系标记、反应体系 主要优点主要优点主要不足主要不足化化学学发发光光酶酶促促过氧化物酶、鲁米过氧化物酶、鲁米诺、氧化剂、增强诺、氧化剂、增强剂等剂等测量方式简单（速率测量方式简单（速率法）成本较低、灵敏法）成本较低、灵敏度较高度较高工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移螺旋金刚烷环氧化螺旋金刚烷环氧化物、碱性磷酸酶物、碱性磷酸酶测量方式简单（速率测量方式简单（速率法）灵敏度较高法）灵敏度较高非非酶酶促促吖啶酯、过氧化氢吖啶
19、酯、过氧化氢灵敏度较高灵敏度较高试剂成本高、发光时间短测量方式复杂（积试剂成本高、发光时间短测量方式复杂（积分法）需原位进样分法）需原位进样(In Situ Injector)(In Situ Injector)仪器仪器成本及维护费用较高试剂成本较高成本及维护费用较高试剂成本较高时间分辨荧光时间分辨荧光铕（铕（EuEu）、镝）、镝(Dy)(Dy)、钐（、钐（SmSm）、铽）、铽（TbTb）、等络合物）、等络合物脉冲光源激发脉冲光源激发灵敏度较高、试剂较灵敏度较高、试剂较稳定稳定测量方式复杂（脉冲激发、间歇式测量、流测量方式复杂（脉冲激发、间歇式测量、流动池）仪器成本及维护费用高环境及样品中动池
20、）仪器成本及维护费用高环境及样品中同类元素可导致本底干扰同类元素可导致本底干扰电化学发光电化学发光钌钌(Ru)(Ru)的络合物脉的络合物脉冲电场激发冲电场激发时间分辨荧光（也称时间延迟光致发光）：时间分辨荧光（也称时间延迟光致发光）：Time Resolved FluorescenceTime Resolved Fluorescence （Time Delayed PhotoluminescenceTime Delayed Photoluminescence）解离增强荧光免疫分析（）解离增强荧光免疫分析（DEFIADEFIA）电化学发光（也称场致发光）：电化学发光（也称场致发光）：Electr
21、ochemiluminescenceElectrochemiluminescence（ElectroluminescenceElectroluminescence）化学发光：化学发光：ChemiluminescenceChemiluminescence例如：电化学发光例如：电化学发光TSHTSH检测试剂的分析灵敏度为检测试剂的分析灵敏度为0.005mIU/L0.005mIU/L 第四代化学发光第四代化学发光TSHTSH检测试剂的分析灵敏度为检测试剂的分析灵敏度为0.001mIU/L0.001mIU/L 原因在于抗体的亲合力，而不是检测技术。原因在于抗体的亲合力，而不是检测技术。筛选抗体、屏蔽干
22、扰，生产工艺、管理筛选抗体、屏蔽干扰，生产工艺、管理水平和技术服务是试剂生产的关键水平和技术服务是试剂生产的关键这些发光检测技术的灵敏度及线性范这些发光检测技术的灵敏度及线性范围都已经接近了免疫反应的极限。围都已经接近了免疫反应的极限。灵敏度的瓶颈在于抗体亲合力和干扰灵敏度的瓶颈在于抗体亲合力和干扰免疫反应的因素，而不是检测技术。免疫反应的因素，而不是检测技术。片面宣扬检测技术灵敏度和线性范围的强片面宣扬检测技术灵敏度和线性范围的强弱，不仅毫无意义，而且也是荒谬的。弱，不仅毫无意义，而且也是荒谬的。发光技术发光技术临床免疫分析划时代的进步临床免疫分析划时代的进步以以以以TSH(TSH(TSH(
23、TSH(促甲状腺素促甲状腺素促甲状腺素促甲状腺素)为例为例为例为例第一代第一代第一代第一代TSHTSH检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒普通放免普通放免普通放免普通放免功能灵敏度功能灵敏度功能灵敏度功能灵敏度1-2mIU/L1-2mIU/L1-2mIU/L1-2mIU/L基本无法测到基本无法测到基本无法测到基本无法测到正常值下限以下正常值下限以下正常值下限以下正常值下限以下的血清的血清的血清的血清TSHTSHTSHTSH浓度浓度浓度浓度对甲亢的诊断意义不大对甲亢的诊断意义不大对甲亢的诊断意义不大对甲亢的诊断意义不大固相放免固相放免固相放免固相放免功能灵敏度功能灵敏度功能灵敏度功能灵敏度0
24、.1-0.2mIU/L0.1-0.2mIU/L0.1-0.2mIU/L0.1-0.2mIU/L在甲亢的诊断中在甲亢的诊断中在甲亢的诊断中在甲亢的诊断中开始发挥作用开始发挥作用开始发挥作用开始发挥作用第二代第二代第二代第二代TSHTSH检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒发光免疫发光免疫发光免疫发光免疫功能灵敏度功能灵敏度功能灵敏度功能灵敏度0.01-0.02mIU/L0.01-0.02mIU/L0.01-0.02mIU/L0.01-0.02mIU/L成为甲亢诊断的成为甲亢诊断的成为甲亢诊断的成为甲亢诊断的首选指标之一首选指标之一首选指标之一首选指标之一发光免疫发光免疫发光免疫发光免疫功能灵
25、敏度功能灵敏度功能灵敏度功能灵敏度0.001-0.002mIU/L 0.001-0.002mIU/L 0.001-0.002mIU/L 0.001-0.002mIU/L 一系列新的临床现象一系列新的临床现象一系列新的临床现象一系列新的临床现象改写了垂体甲状腺轴改写了垂体甲状腺轴改写了垂体甲状腺轴改写了垂体甲状腺轴的调控状态的调控状态的调控状态的调控状态第三代第三代第三代第三代TSHTSH检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒第四代第四代第四代第四代TSHTSH检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒目前商品化发光免疫分析产品的几个特点目前商品化发光免疫分析产品的几个特点大多采用全自动工作方式
26、，部分采用微孔板半自动方式大多采用全自动工作方式，部分采用微孔板半自动方式大多采用全自动工作方式，部分采用微孔板半自动方式大多采用全自动工作方式，部分采用微孔板半自动方式多数采用磁性或非磁性微粒包被，以增加表面积，使灵敏度进一多数采用磁性或非磁性微粒包被，以增加表面积，使灵敏度进一多数采用磁性或非磁性微粒包被，以增加表面积，使灵敏度进一多数采用磁性或非磁性微粒包被，以增加表面积，使灵敏度进一步提高，反应时间大大缩短步提高，反应时间大大缩短步提高，反应时间大大缩短步提高，反应时间大大缩短使用内建标准曲线加校正的办法产生工作曲线使用内建标准曲线加校正的办法产生工作曲线使用内建标准曲线加校正的办法产
27、生工作曲线使用内建标准曲线加校正的办法产生工作曲线部分产品采用流动池测定方式部分产品采用流动池测定方式部分产品采用流动池测定方式部分产品采用流动池测定方式(适合于闪光型发光或电化学发光适合于闪光型发光或电化学发光适合于闪光型发光或电化学发光适合于闪光型发光或电化学发光)流动池检测方式示意图流动池检测方式示意图检测器检测器检测器检测器检测池检测池检测池检测池负压泵负压泵负压泵负压泵废液废液废液废液四通阀四通阀四通阀四通阀冲洗液冲洗液冲洗液冲洗液样品管样品管样品管样品管计量泵计量泵计量泵计量泵干燥空气干燥空气干燥空气干燥空气原位进样泵原位进样泵原位进样泵原位进样泵氧化剂氧化剂氧化剂氧化剂使用商品化
28、发光免疫分析产品使用商品化发光免疫分析产品可能遇到的几个问题可能遇到的几个问题与以往方法（放免等）在检测指标的正常值及临床意义上的差异。与以往方法（放免等）在检测指标的正常值及临床意义上的差异。与以往方法（放免等）在检测指标的正常值及临床意义上的差异。与以往方法（放免等）在检测指标的正常值及临床意义上的差异。如：免疫源性胰岛素与真胰岛素、如：免疫源性胰岛素与真胰岛素、如：免疫源性胰岛素与真胰岛素、如：免疫源性胰岛素与真胰岛素、HCGHCG、性激素等性激素等性激素等性激素等采用不同的单抗或多抗时检测结果也有较大差异。采用不同的单抗或多抗时检测结果也有较大差异。采用不同的单抗或多抗时检测结果也有较
29、大差异。采用不同的单抗或多抗时检测结果也有较大差异。（单抗特异性好，受干扰小，因此测值低）（单抗特异性好，受干扰小，因此测值低）（单抗特异性好，受干扰小，因此测值低）（单抗特异性好，受干扰小，因此测值低）不同厂家产品测定结果之间一致性差（未与国家标准品比对）。不同厂家产品测定结果之间一致性差（未与国家标准品比对）。不同厂家产品测定结果之间一致性差（未与国家标准品比对）。不同厂家产品测定结果之间一致性差（未与国家标准品比对）。所使用的内建标准曲线结合校正的方法不尽完善。所使用的内建标准曲线结合校正的方法不尽完善。所使用的内建标准曲线结合校正的方法不尽完善。所使用的内建标准曲线结合校正的方法不尽完
30、善。部分产品不显示原始数据，无法监控其准确性。部分产品不显示原始数据，无法监控其准确性。部分产品不显示原始数据，无法监控其准确性。部分产品不显示原始数据，无法监控其准确性。同一干扰因素对不同检测方法的不同影响同一干扰因素对不同检测方法的不同影响待测物待测物包被（结合）包被（结合）抗体抗体放免法放免法免放或免放或发光法发光法标记抗原标记抗原TBG离心沉降离心沉降洗洗涤涤祛祛除除以甲状腺素结合蛋白（以甲状腺素结合蛋白（以甲状腺素结合蛋白（以甲状腺素结合蛋白（TBGTBGTBGTBG）干扰竞争法测定）干扰竞争法测定）干扰竞争法测定）干扰竞争法测定T3T3T3T3为例为例为例为例信号信号结果结果信号信
31、号结果结果使用商品化发光免疫分析产品使用商品化发光免疫分析产品必须做好的几个工作必须做好的几个工作在厂家提供的数据基础上，自行建立正常参考值系统。在厂家提供的数据基础上，自行建立正常参考值系统。在厂家提供的数据基础上，自行建立正常参考值系统。在厂家提供的数据基础上，自行建立正常参考值系统。明确各个试剂盒的特异性及交叉反应情况明确各个试剂盒的特异性及交叉反应情况明确各个试剂盒的特异性及交叉反应情况明确各个试剂盒的特异性及交叉反应情况如：小分子激素之间，以及与自身前体或代谢物之间的交叉如：小分子激素之间，以及与自身前体或代谢物之间的交叉如：小分子激素之间，以及与自身前体或代谢物之间的交叉如：小分子
32、激素之间，以及与自身前体或代谢物之间的交叉胰岛素与胰岛素与胰岛素与胰岛素与C-C-肽、胰岛素原之间的交叉肽、胰岛素原之间的交叉肽、胰岛素原之间的交叉肽、胰岛素原之间的交叉FSHFSH、LHLH、HCGHCG之间的交叉。之间的交叉。之间的交叉。之间的交叉。充分利用现有国标参考品校正结果（注意防腐剂干扰）充分利用现有国标参考品校正结果（注意防腐剂干扰）充分利用现有国标参考品校正结果（注意防腐剂干扰）充分利用现有国标参考品校正结果（注意防腐剂干扰）（可以从国家药品生物制品检定所或临床检验中心得到）（可以从国家药品生物制品检定所或临床检验中心得到）（可以从国家药品生物制品检定所或临床检验中心得到）（可
33、以从国家药品生物制品检定所或临床检验中心得到）自行建立多点质控（自行建立多点质控（自行建立多点质控（自行建立多点质控（2-32-3点）监控每次实验的准确性。点）监控每次实验的准确性。点）监控每次实验的准确性。点）监控每次实验的准确性。尽可能避免干扰因素尽可能避免干扰因素尽可能避免干扰因素尽可能避免干扰因素 采样：清洁样品管（防止还原剂干扰）、不使用酶抑制剂、及时送检采样：清洁样品管（防止还原剂干扰）、不使用酶抑制剂、及时送检采样：清洁样品管（防止还原剂干扰）、不使用酶抑制剂、及时送检采样：清洁样品管（防止还原剂干扰）、不使用酶抑制剂、及时送检 实验室：恒温、避免强光和强磁场、严格操作规程、及时
34、维护、报修实验室：恒温、避免强光和强磁场、严格操作规程、及时维护、报修实验室：恒温、避免强光和强磁场、严格操作规程、及时维护、报修实验室：恒温、避免强光和强磁场、严格操作规程、及时维护、报修正常值参考的意义及灰色区域的存在正常值参考的意义及灰色区域的存在 如果测定结果处于灰色区域（约在正常值上下限以内如果测定结果处于灰色区域（约在正常值上下限以内如果测定结果处于灰色区域（约在正常值上下限以内如果测定结果处于灰色区域（约在正常值上下限以内20%20%）内，）内，）内，）内，则需要进一步追踪检查。则需要进一步追踪检查。则需要进一步追踪检查。则需要进一步追踪检查。95%95%或或或或99%99%-2
35、0%-20%+20%+20%保证检验结果准确性的保证检验结果准确性的保证检验结果准确性的保证检验结果准确性的对该检验项目或其检验结果普遍意义的解释对该检验项目或其检验结果普遍意义的解释对该检验项目或其检验结果普遍意义的解释对该检验项目或其检验结果普遍意义的解释不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终诊断不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终诊断不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终诊断不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终诊断建立和完善实验室面向临床大夫乃至患者的咨询制度建立和完善实验室面向临床大夫乃至患者的咨询制度建立和完善实验室面向临床大夫乃至患者的咨询制度建立和完善实验室面向临床大
36、夫乃至患者的咨询制度检验医师检验医师检验医师检验医师必须牢记必须牢记必须牢记必须牢记检验医师给临床所提供的一切检验医师给临床所提供的一切检验医师给临床所提供的一切检验医师给临床所提供的一切服务服务服务服务仅限于仅限于仅限于仅限于不同实验方法，不同实验方法，不同实验方法，不同实验方法，或同一方法的不同厂家产品之间，或同一方法的不同厂家产品之间，或同一方法的不同厂家产品之间，或同一方法的不同厂家产品之间，其测定结果和临床正常值都会有所差异其测定结果和临床正常值都会有所差异其测定结果和临床正常值都会有所差异其测定结果和临床正常值都会有所差异不同实验室环境和不同人群条件下，不同实验室环境和不同人群条件
37、下，不同实验室环境和不同人群条件下，不同实验室环境和不同人群条件下，其测定结果和临床正常值也会有所不同其测定结果和临床正常值也会有所不同其测定结果和临床正常值也会有所不同其测定结果和临床正常值也会有所不同在厂家提供的正常参考值基础上在厂家提供的正常参考值基础上在厂家提供的正常参考值基础上在厂家提供的正常参考值基础上建立自己的正常参考系统建立自己的正常参考系统建立自己的正常参考系统建立自己的正常参考系统待测物质的降解待测物质的降解待测物质的降解待测物质的降解及其与血清蛋白结合状态的改变，及其与血清蛋白结合状态的改变，及其与血清蛋白结合状态的改变，及其与血清蛋白结合状态的改变，某些化验项目的检测结
38、果往往受某些化验项目的检测结果往往受某些化验项目的检测结果往往受某些化验项目的检测结果往往受标本存放时间及其贮存条件的影响标本存放时间及其贮存条件的影响标本存放时间及其贮存条件的影响标本存放时间及其贮存条件的影响及时采样、送检，及时采样、送检，及时采样、送检，及时采样、送检，实验室及时完成化验，实验室及时完成化验，实验室及时完成化验，实验室及时完成化验，严格按照试剂盒说明书要求存放严格按照试剂盒说明书要求存放严格按照试剂盒说明书要求存放严格按照试剂盒说明书要求存放常见临床免疫检测指标的意义常见临床免疫检测指标的意义及其限制因素及其限制因素激素类型激素类型激素类型激素类型氨基酸：甲状腺激素氨基酸
39、：甲状腺激素氨基酸：甲状腺激素氨基酸：甲状腺激素蛋白（肽）：甲状旁腺激素、蛋白（肽）：甲状旁腺激素、蛋白（肽）：甲状旁腺激素、蛋白（肽）：甲状旁腺激素、下丘脑激素、下丘脑激素、下丘脑激素、下丘脑激素、垂体激素、垂体激素、垂体激素、垂体激素、降钙素、降钙素、降钙素、降钙素、胎盘激素、胎盘激素、胎盘激素、胎盘激素、心肌激素、心肌激素、心肌激素、心肌激素、胃肠激素胃肠激素胃肠激素胃肠激素类固醇：性激素和皮质激素类固醇：性激素和皮质激素类固醇：性激素和皮质激素类固醇：性激素和皮质激素儿茶酚胺：肾上腺素儿茶酚胺：肾上腺素儿茶酚胺：肾上腺素儿茶酚胺：肾上腺素下丘脑下丘脑-垂体垂体-内分泌轴及内分泌轴及其调
40、节关系其调节关系 长反馈：垂体或下丘脑激素受靶细胞长反馈：垂体或下丘脑激素受靶细胞长反馈：垂体或下丘脑激素受靶细胞长反馈：垂体或下丘脑激素受靶细胞 分泌激素的反馈调节，以负分泌激素的反馈调节，以负分泌激素的反馈调节，以负分泌激素的反馈调节，以负 反馈为主，但排卵时雌激素反馈为主，但排卵时雌激素反馈为主，但排卵时雌激素反馈为主，但排卵时雌激素 为正反馈。为正反馈。为正反馈。为正反馈。短反馈：垂体激素对于下丘脑的反馈短反馈：垂体激素对于下丘脑的反馈短反馈：垂体激素对于下丘脑的反馈短反馈：垂体激素对于下丘脑的反馈 负反馈负反馈负反馈负反馈超短反馈：下丘或垂体激素直接负反馈超短反馈：下丘或垂体激素直接
41、负反馈超短反馈：下丘或垂体激素直接负反馈超短反馈：下丘或垂体激素直接负反馈 自身的合成和分泌自身的合成和分泌自身的合成和分泌自身的合成和分泌 类固醇激素的合成类固醇激素的合成男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成、代谢途径，男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成、代谢途径，男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成、代谢途径，男女性激素和皮质激素均来源于共同的前体和合成、代谢途径，其结构也非常相似。因此皮质功能紊乱、肝肾功能紊乱、某些遗其结构也非常相似。因此皮质功能紊乱、肝肾功能紊乱、某些遗其结构也非常相似。因此皮质功能紊乱、肝肾功能紊乱、某些遗其结构也非常相似。因此皮质功能紊乱
42、、肝肾功能紊乱、某些遗传缺陷、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。传缺陷、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。传缺陷、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。传缺陷、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。甲状腺功能指标评价甲状腺功能指标评价甲亢的诊断价值依次为：甲亢的诊断价值依次为：甲亢的诊断价值依次为：甲亢的诊断价值依次为：TSH=FT3TSH=FT3TSH=FT3TSH=FT3FT4FT4FT4FT4TT3TT3TT3TT3TT4TT4TT4TT4甲低的诊断价值依次为：甲低的诊断价值依次为：甲低的诊断价值依次为：甲低的诊断价值依次为：FT4=TSH
43、FT4=TSHFT4=TSHFT4=TSHTT4TT4TT4TT4FT3FT3FT3FT3TT3TT3TT3TT3发光法发光法发光法发光法TSHTSH、FT3 FT3、FT4 FT4提高了灵敏度，使得其临床意义大于提高了灵敏度，使得其临床意义大于提高了灵敏度，使得其临床意义大于提高了灵敏度，使得其临床意义大于TT4TT4和和和和TT3TT3两步法两步法操作时间长操作时间长灵敏度差灵敏度差准确性差准确性差类似物法类似物法操作时间短操作时间短灵敏度较好灵敏度较好准确性较好准确性较好反向竞争法反向竞争法（标记抗体）（标记抗体）操作时间短操作时间短灵敏度更好灵敏度更好准确性更好准确性更好第一代第一代第
44、二代第二代第三代第三代血清血清FT3 FT3、FT4 FT4试剂盒的发展试剂盒的发展（消除结合蛋白对测定的影响消除结合蛋白对测定的影响）TGAb TGAb TMAb=TPOTMAb=TPO抗体抗体抗体抗体其生理作用需要通过生长介素其生理作用需要通过生长介素其生理作用需要通过生长介素其生理作用需要通过生长介素(SM)SM)介导介导介导介导SMSM也称胰岛素样生长因子也称胰岛素样生长因子也称胰岛素样生长因子也称胰岛素样生长因子(IGF)IGF)，主要在肝脏及多种主要在肝脏及多种主要在肝脏及多种主要在肝脏及多种GHGH靶细胞合成靶细胞合成靶细胞合成靶细胞合成SM-CSM-C即即即即IGFIIGFI，
45、结构与胰岛素有近一半的氨基酸残基相同。结构与胰岛素有近一半的氨基酸残基相同。结构与胰岛素有近一半的氨基酸残基相同。结构与胰岛素有近一半的氨基酸残基相同。生长激素（生长激素（GHGH）生长激素紊乱生长激素紊乱生长激素紊乱生长激素紊乱生长激素缺乏症（侏儒）生长激素缺乏症（侏儒）生长激素缺乏症（侏儒）生长激素缺乏症（侏儒）巨人症及肢端肥大症巨人症及肢端肥大症巨人症及肢端肥大症巨人症及肢端肥大症GHGHGHGH测定的临床意义测定的临床意义测定的临床意义测定的临床意义垂体腺瘤、肾癌、肺癌垂体腺瘤、肾癌、肺癌垂体腺瘤、肾癌、肺癌垂体腺瘤、肾癌、肺癌运动刺激试验运动刺激试验运动刺激试验运动刺激试验药物刺激试
46、验药物刺激试验药物刺激试验药物刺激试验 （胰岛素（胰岛素（胰岛素（胰岛素-低血糖试验）低血糖试验）低血糖试验）低血糖试验）GHGH分泌的抑制试验分泌的抑制试验分泌的抑制试验分泌的抑制试验胰岛素胰岛素免疫源性胰岛素：免疫源性胰岛素：免疫源性胰岛素：免疫源性胰岛素：采用多抗或普通单抗采用多抗或普通单抗采用多抗或普通单抗采用多抗或普通单抗与胰岛素原和与胰岛素原和与胰岛素原和与胰岛素原和C C肽有交叉肽有交叉肽有交叉肽有交叉正常值较高正常值较高正常值较高正常值较高糖尿病分型：糖尿病分型：糖尿病分型：糖尿病分型：型空腹胰岛素低，型空腹胰岛素低，型空腹胰岛素低，型空腹胰岛素低，OGTTOGTTOGTTOG
47、TT后变化缓慢，甚至无变化；后变化缓慢，甚至无变化；后变化缓慢，甚至无变化；后变化缓慢，甚至无变化；型空腹高胰岛素，型空腹高胰岛素，型空腹高胰岛素，型空腹高胰岛素，OGTTOGTTOGTTOGTT后胰岛素释放延迟，总量不低。后胰岛素释放延迟，总量不低。后胰岛素释放延迟，总量不低。后胰岛素释放延迟，总量不低。肝硬变：空腹胰岛素高于正常肝硬变：空腹胰岛素高于正常肝硬变：空腹胰岛素高于正常肝硬变：空腹胰岛素高于正常2 2 2 23 3 3 3倍。倍。倍。倍。OGTT OGTT OGTT OGTT各个时相胰岛素升高。各个时相胰岛素升高。各个时相胰岛素升高。各个时相胰岛素升高。胰岛素瘤：静脉注入亮氨酸后
48、血中胰岛素水平明显升高。胰岛素瘤：静脉注入亮氨酸后血中胰岛素水平明显升高。胰岛素瘤：静脉注入亮氨酸后血中胰岛素水平明显升高。胰岛素瘤：静脉注入亮氨酸后血中胰岛素水平明显升高。甲亢：初期空腹胰岛素水平高，甲亢：初期空腹胰岛素水平高，甲亢：初期空腹胰岛素水平高，甲亢：初期空腹胰岛素水平高，OGTT OGTT OGTT OGTT与正常人相似；与正常人相似；与正常人相似；与正常人相似；长期严重甲亢可导致胰岛长期严重甲亢可导致胰岛长期严重甲亢可导致胰岛长期严重甲亢可导致胰岛细胞功能衰竭，发展为糖尿病。细胞功能衰竭，发展为糖尿病。细胞功能衰竭，发展为糖尿病。细胞功能衰竭，发展为糖尿病。真胰岛素：真胰岛素：
49、真胰岛素：真胰岛素：采用胰岛素原掩蔽性胰岛素单抗采用胰岛素原掩蔽性胰岛素单抗采用胰岛素原掩蔽性胰岛素单抗采用胰岛素原掩蔽性胰岛素单抗与胰岛素原和与胰岛素原和与胰岛素原和与胰岛素原和C C肽无交叉肽无交叉肽无交叉肽无交叉正常值较低正常值较低正常值较低正常值较低胰岛素抗体胰岛素抗体胰岛素抗体胰岛素抗体GADGAD是是是是型糖尿病的关键型糖尿病的关键型糖尿病的关键型糖尿病的关键始动靶自身抗原始动靶自身抗原始动靶自身抗原始动靶自身抗原其抗体是其抗体是其抗体是其抗体是型糖尿病及前期型糖尿病及前期型糖尿病及前期型糖尿病及前期的重要标志的重要标志的重要标志的重要标志长期用胰岛素的病人可产生长期用胰岛素的病人
50、可产生长期用胰岛素的病人可产生长期用胰岛素的病人可产生未用过胰岛素的未用过胰岛素的未用过胰岛素的未用过胰岛素的I I型糖尿病人胰岛型糖尿病人胰岛型糖尿病人胰岛型糖尿病人胰岛素抗体阳性是自身免疫性细胞损素抗体阳性是自身免疫性细胞损素抗体阳性是自身免疫性细胞损素抗体阳性是自身免疫性细胞损害的标志害的标志害的标志害的标志谷氨酸脱羧酶（谷氨酸脱羧酶（谷氨酸脱羧酶（谷氨酸脱羧酶（GADGADGADGAD）抗体）抗体）抗体）抗体与抗胰岛细胞抗体（与抗胰岛细胞抗体（与抗胰岛细胞抗体（与抗胰岛细胞抗体（ICAICA）相比，）相比，）相比，）相比，GAD-AbGAD-Ab阳性率高、持续时间长、测定方法简单，阳性