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1、关于实验三培养基的制备与灭菌第一页，讲稿共十三页哦一、实验目的一、实验目的 明确培养基的配制原理 通过对基础培养基的配制，掌握配 制培养基的一般方法和步骤第二页，讲稿共十三页哦 培养基是人工按一定比例配制的供微生物 生长繁殖和合成代谢产物所需要的 营养物质的混合物 培养基的原材料：碳源、氮源、无机盐、生长因素、水二、基本原理二、基本原理第三页，讲稿共十三页哦根据微生物的种类和实验目的不同，培养基有不同的种类按成分：天然培养基，合成培养基，半合成培养基按物理状态分：固体培养基，半固体培养基，液体培养基牛肉膏蛋白胨培养基第四页，讲稿共十三页哦三、实验器材与试剂三、实验器材与试剂溶液和试剂：牛肉膏、
2、蛋白胨、NaCl、琼脂 1mol/L NaOH、1mol/L HCl仪器或其它用具：三脚架、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等第五页，讲稿共十三页哦 称量溶化调pH 过滤分装加塞 包扎灭菌搁置斜面四、操作步骤四、操作步骤第六页，讲稿共十三页哦 1）称量：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧 杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热 水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随 后放人热水中，牛肉膏便会与称量纸分离，立即取 出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。2）加热溶化：在烧杯中加入少于所需要的水量，并用玻棒 搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需 量。若配制固体培养
3、基，则加入琼脂再加热 融化，此过程中需不断搅拌，以防琼脂糊底 或溢出，最后补足所失的水分。第七页，讲稿共十三页哦3）调pH：检测培养基的pH，若偏酸，可逐滴滴加1molL-1NaOH 边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH 范围。若偏碱，则用1molL-1HCl进行调节。pH的调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过 头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。4）过滤 趁热过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结 果的观察。但是供一般使用的培养基，该步可省略。第八页，讲稿共十三页哦固体分装固体分装5）分装：披实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角 瓶内。分装时可用漏斗以免
4、使培养基沾在管口或瓶 口上面造成污染 分装量：固体培养基约为试管高度的15，灭菌后制成斜 面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的1/3为宜。灭菌后垂直 待凝 半固体半固体 液体分装液体分装试管试管 三角烧瓶三角烧瓶试管试管 三角烧瓶三角烧瓶 1/3 1/31/41/4 1/21/21/51/51/21/2第九页，讲稿共十三页哦6）加塞：试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制 作的棉塞。以阻止外界微生物进入培养，并保 持良好通气性7）包扎：加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸，以防 灭菌时冷凝水沾湿棉塞8）灭菌：将上述培养基以0.103MPa，121，20mi
5、n高压蒸气灭菌9）搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷至50左右（以防 斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻 棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面 长度以不超过试管总长的一半为宜。第十页，讲稿共十三页哦 培养基分装培养基分装斜面制作斜面制作包扎成捆挂标签包扎成捆挂标签第十一页，讲稿共十三页哦附：高压蒸汽灭菌法1加水 将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的 水，以水面与三角架相平为至。2装料 将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培 养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧 贴桶壁，以防冷凝水沾湿棉塞。3加盖 将盖上的排气软管插人内层的排气槽内，再以两 两对称的方式同时旋转相对的两个螺栓，使螺栓 松紧一致，勿使漏气。4排气 加热，待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔 排出。一般认为，当水沸后约5min，表明锅内空 气已排净。5升压 当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始 上升。第十二页，讲稿共十三页哦感谢大家观看感谢大家观看第十三页，讲稿共十三页哦