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1、芳酸类非甾体抗炎药物的分析1第1页，此课件共102页哦目的要求目的要求 1 1、掌掌握握水水扬扬酸酸类类、苯苯甲甲酸酸类类药药物物的的结结构构与与性质、鉴别和含量测定的基本原理与方法。性质、鉴别和含量测定的基本原理与方法。2 2、熟熟悉悉芳芳酸酸类类药药物物杂杂质质结结构构、危危害害、检检查查方方法与含量限度。法与含量限度。3 3、了解本类药物的体内分析方法。、了解本类药物的体内分析方法。返返 回回2第2页，此课件共102页哦一、化学结构与性质一、化学结构与性质二、鉴别试验二、鉴别试验三、特殊杂质检查三、特殊杂质检查四、含量测定四、含量测定 内容提要内容提要 3第3页，此课件共102页哦共性共
2、性：既有苯环，又有羧基，或另有取代基：既有苯环，又有羧基，或另有取代基分类分类：n羧基直接与苯环相连羧基直接与苯环相连 -苯甲酸类和水杨酸类苯甲酸类和水杨酸类n羧基为磺酸基或通过烃氧基与苯环相连羧基为磺酸基或通过烃氧基与苯环相连 -其他芳酸及其酯类其他芳酸及其酯类 本类药物多为固体，有一定本类药物多为固体，有一定熔点熔点，难溶于水，难溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂，但其易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂，但其钠盐钠盐易溶于水易溶于水,含含游离羧基的药物可溶于游离羧基的药物可溶于NaOHNaOH。4第4页，此课件共102页哦第第一一节节分分类类水水杨杨酸酸类类苯苯甲甲酸酸类类其其他他芳芳酸酸类类氯贝
3、丁酯氯贝丁酯布洛芬布洛芬苯甲酸（钠）苯甲酸（钠）丙磺舒丙磺舒甲芬那酸甲芬那酸羟苯乙酯羟苯乙酯阿司匹林阿司匹林水杨酸水杨酸对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠双水杨酯双水杨酯贝诺酯贝诺酯5第5页，此课件共102页哦一、苯甲酸类药物苯甲酸及其盐苯甲酸及其盐丙磺舒丙磺舒羟苯乙酯羟苯乙酯甲芬那酸甲芬那酸（一）典型药物（一）典型药物6第6页，此课件共102页哦（二）主要性质（二）主要性质酸酸性性：苯苯甲甲酸酸、丙丙磺磺舒舒和和甲甲芬芬那那酸酸有有游游离离的的羧羧基基 ，可用，可用NaOHNaOH直接滴定测定其含量。直接滴定测定其含量。具有苯环和特征官能团具有苯环和特征官能团,有有UVUV和和IRIR特征吸收。特
4、征吸收。化化学学性性质质：苯苯甲甲酸酸（钠钠）的的中中性性溶溶液液与与FeClFeCl3 3反反应应可可生生成成赭赭色色沉沉淀淀；丙丙磺磺舒舒受受热热可可分分解解为为NaNa2 2SOSO3 3或或SOSO2 2。7第7页，此课件共102页哦二、水杨酸类药物乙酰水杨酸乙酰水杨酸对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠水杨酸钠水杨酸钠双水杨酯双水杨酯贝诺酯贝诺酯（一）典型药物（一）典型药物8第8页，此课件共102页哦二氟尼柳二氟尼柳diflunisal水杨酸类药物9第9页，此课件共102页哦n酸性：基本结构为酸性：基本结构为邻羟基苯甲酸邻羟基苯甲酸，具有酸性。水杨，具有酸性。水杨酸酸阿司匹林阿司匹林苯甲酸。
5、可用酸碱滴定法测定含量。苯甲酸。可用酸碱滴定法测定含量。n芳伯氨基特性芳伯氨基特性n酚羟基特性：与酚羟基特性：与FeClFeCl3 3生成紫色配合物生成紫色配合物n水解特性：水解特性：ASAASA、贝诺酯、双水杨酯及其制剂应检查、贝诺酯、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸；水杨酸、对氨基水杨酸钠和贝诺酯分别检查苯水杨酸；水杨酸、对氨基水杨酸钠和贝诺酯分别检查苯酚、间氨基酚和对氨基酚酚、间氨基酚和对氨基酚（二）主要性质（二）主要性质10第10页，此课件共102页哦三、其他芳酸类药物氯贝丁酯氯贝丁酯布洛芬布洛芬（一）典型药物（一）典型药物11第11页，此课件共102页哦（二）主要性质（二）主要性质氯贝丁
6、酯氯贝丁酯：油状油状液体液体，遇光不稳定；具有酯结构，易，遇光不稳定；具有酯结构，易水解。水解。布洛芬布洛芬：酸性较弱；可用中性乙醇溶解，用：酸性较弱；可用中性乙醇溶解，用NaOHNaOH滴定。滴定。都有苯环和特征基团都有苯环和特征基团,具有具有UVUV和和IRIR特征吸收光谱特征吸收光谱12第12页，此课件共102页哦n酸性：酸性：pKa 3pKa 3 6 6无机强酸无机强酸芳酸芳酸碳酸碳酸 酚酚n溶解度：溶解度：游离酸不溶于水，溶于有机溶剂游离酸不溶于水，溶于有机溶剂 碱金属盐溶于水，不溶于有机溶剂碱金属盐溶于水，不溶于有机溶剂n本类药物的性质小结本类药物的性质小结酸酸 +碱碱 盐盐酸酸
7、+醇醇 酯酯pKa 6.3pKa 1013第13页，此课件共102页哦X、NO2、OH等吸电子取代基存在使酸性增强等吸电子取代基存在使酸性增强 CH3、NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱等斥电子取代基存在使酸性减弱 邻邻位位取取代代间间位位、对对位位取取代代，尤尤其其是是邻邻位位取取代代了了酚酚羟羟基基，由由于于形形成成分分子内氢健，酸性大为增强子内氢健，酸性大为增强。14第14页，此课件共102页哦n芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈碱性，但碱性太弱，所以其含量芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈碱性，但碱性太弱，所以其含量测定方法为双相滴定法或非水碱量法。测定方法为双相滴定法或非水碱量法。n
8、芳芳酸酸酯酯可可水水解解，利利用用其其水水解解得得到到酸酸和和醇醇的的性性质质可可进进行行鉴鉴别别；利利用用芳芳酸酸酯酯水水解解定定量量消消耗耗氢氢氧氧化化钠钠的的性性质质，芳芳酸酸酯酯类类药药物物可可用用水水解解后后剩剩余余滴滴定定法法测测定定含含量量；芳芳酸酸酯酯类类药药物物还还应应检检查查因因水水解而引入的特殊杂质。解而引入的特殊杂质。15第15页，此课件共102页哦n取取代代芳芳酸酸类类药药物物可可利利用用其其取取代代基基的的性性质质进进行行鉴鉴别别和和含含量量测测定定。如如具具有有酚酚羟羟基基的的药药物物可可用用FeCl3反反应应鉴鉴别别；具具芳芳伯伯氨氨基基的的药药物物可可用用重重
9、氮化氮化偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。nUV n色谱法色谱法制剂分析制剂分析 nIR16第16页，此课件共102页哦第二节 鉴别试验n与铁盐的反应与铁盐的反应n重氮化重氮化-偶合反应偶合反应n水解反应水解反应n分解产物的反应分解产物的反应n紫外吸收光谱紫外吸收光谱n红外吸收光谱红外吸收光谱17第17页，此课件共102页哦一、FeCl3反应 具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物 18第18页，此课件共102页哦n三氯化铁反应（水杨酸类）：三氯化铁反应（水杨酸类）：R-OH +FeCl3紫色络合物紫色络合物R-OCOCH3+H+R-OH+FeCl3紫色紫
10、色pH4-6pH4-619第19页，此课件共102页哦锗色锗色苯甲酸（钠）苯甲酸（钠）米黄色米黄色丙磺舒丙磺舒n三氯化铁反应（苯甲酸类）：三氯化铁反应（苯甲酸类）：R-COOH +FeCl3 有色沉淀有色沉淀中性中性20第20页，此课件共102页哦 直接直接：水杨酸、对氨基水杨酸钠、双水杨酯、水杨：水杨酸、对氨基水杨酸钠、双水杨酯、水杨酸二乙胺、酚磺乙胺、对乙酰氨基酚酸二乙胺、酚磺乙胺、对乙酰氨基酚 水杨酸水杨酸 ChP（2000）鉴别鉴别 （1 1）取本品的水溶液，加三氯化铁试液）取本品的水溶液，加三氯化铁试液1 1滴，即显紫堇色。滴，即显紫堇色。间接：阿司匹林、贝诺酯间接：阿司匹林、贝诺酯
11、 阿司匹林阿司匹林 ChP（2000）鉴别鉴别 （1 1）取本品约）取本品约0.1g0.1g，加水，加水10ml10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁，煮沸，放冷，加三氯化铁试液试液1 1滴，即显紫堇色。滴，即显紫堇色。21第21页，此课件共102页哦n与羟胺、铁盐反应（其他芳酸类）：与羟胺、铁盐反应（其他芳酸类）：氯贝丁酯（布洛芬）氯贝丁酯（布洛芬）异羟肟酸铁异羟肟酸铁（紫色）（紫色）氯贝丁酯氯贝丁酯22第22页，此课件共102页哦n二、重氮化二、重氮化-偶合反应：偶合反应：具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基药物的反应具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基药物的反应-萘酚橙红色贝诺酯有该贝诺酯有该反应吗？如反应吗？如
12、何进行？何进行？对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠23第23页，此课件共102页哦 直直接接：对对氨氨基基水水杨杨酸酸钠钠、盐盐酸酸普普鲁鲁卡卡因因、苯苯佐佐卡卡因因、盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因胺 间接间接：对乙酰氨基酚（扑热息痛）、醋氨苯砜、贝诺酯：对乙酰氨基酚（扑热息痛）、醋氨苯砜、贝诺酯 24第24页，此课件共102页哦甲芬那酸甲芬那酸对对-硝基苯重硝基苯重氮盐氮盐橙红色橙红色25第25页，此课件共102页哦 +K+K2 2CrCr2 2O O7 7 深蓝色深蓝色 棕绿色棕绿色 甲芬那酸甲芬那酸+H+H2 2SOSO4 4 黄色黄色 绿色绿色荧光荧光三、氧化反应三、氧化反应26第26页，此课件
13、共102页哦n四、水解反应（酯结构可被水解）四、水解反应（酯结构可被水解）阿司匹林阿司匹林醋酸臭气醋酸臭气27第27页，此课件共102页哦28第28页，此课件共102页哦n五、五、分解产物的反应分解产物的反应苯甲酸盐苯甲酸盐 H2SO4 苯甲酸（白色升华物）苯甲酸（白色升华物）丙磺舒丙磺舒 NaOH Na2SO3 HNO3 硫酸盐硫酸盐显硫酸盐反应显硫酸盐反应(含硫含硫)29第29页，此课件共102页哦n六、六、紫外吸收光谱法紫外吸收光谱法药物溶剂max/minE值A值A1/A2贝诺酯无水乙醇240730-760氯贝丁酯甲醇(0.001%)(0.01%)226;280,288460;44,31
14、羟苯乙酯乙醇(5 g/ml)2590.48丙磺舒盐酸-乙醇(20g/ml)225,2490.67布洛芬0.4%NaOH265,273;245,271甲芬那酸盐酸-乙醇279,3500.69-0.74,0.59-0.601.15-1.30对氨基水杨酸钠磷酸盐缓冲液265,2991.50-1.56第30页，此课件共102页哦n七、红外吸收光谱法七、红外吸收光谱法峰位（峰位（cmcm-1-1）峰强度峰强度归属基团或化学键归属基团或化学键3750375030003000强强O-HO-H、N-H N-H(胺基胺基,羟基羟基)3000300027002700弱强弱强C-HC-H（烷基）、（烷基）、-CHO
15、-CHO3300330030003000弱中等弱中等CHCH、=CH=CH、Ar-HAr-H2400240021002100弱中等弱中等CNCN1900190016501650强强C=O(C=O(醛醛,酮酮,羧酸及衍生物羧酸及衍生物)1670167015001500中等强中等强C=CC=C、C=NC=N、N-HN-H1300130010001000强强C-OC-O（醇醇,酚酚,醚醚,酯酯,羧酸）羧酸）10001000650650中等强中等强不同取代形式双键、苯环不同取代形式双键、苯环典型化学键的红外特征吸收峰典型化学键的红外特征吸收峰 31第31页，此课件共102页哦水杨酸的红外吸收图谱水杨酸
16、的红外吸收图谱33002300cm-1O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H32第32页，此课件共102页哦37002900cm-1N-H、O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱33第33页，此课件共102页哦八、八、TLC法法制剂辅料有干扰，采用色谱法分离后鉴别。如：二制剂辅料有干扰，采用色谱法分离后鉴别。如：二氟尼柳胶囊。氟尼柳胶囊。九、九、HPLC法法34第34页，此课件共102页哦第三节 特殊杂质检查n一、
17、阿司匹林中特殊杂质检查一、阿司匹林中特殊杂质检查合成工艺合成工艺35第35页，此课件共102页哦n检查检查酚、苯酯类杂质。酚、苯酯类杂质。n原理原理根据这些杂质与阿司匹林的酸性强弱，利用它们在碳酸根据这些杂质与阿司匹林的酸性强弱，利用它们在碳酸钠溶液中的溶解度差异，规定一定量样品在碳酸钠溶液中应澄清。钠溶液中的溶解度差异，规定一定量样品在碳酸钠溶液中应澄清。酚酚水杨酸苯酯水杨酸苯酯乙酸苯酯乙酸苯酯乙酰水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯溶液的澄清度溶液的澄清度36第36页，此课件共102页哦n为反应中间体和水解产物为反应中间体和水解产物 乙酰化不完全、储藏过程中水解乙酰化不完全、储藏过程中水解n原理原理水
18、杨酸有游离酚羟基，可与高铁离子反应，产水杨酸有游离酚羟基，可与高铁离子反应，产生紫堇色，而阿司匹林不含游离酚羟基，无此反应。生紫堇色，而阿司匹林不含游离酚羟基，无此反应。n方法方法取一定量样品和水杨酸对照品与硫酸铁铵反应，比取一定量样品和水杨酸对照品与硫酸铁铵反应，比较紫色深浅，规定样品液颜色不得较对照品颜色深。较紫色深浅，规定样品液颜色不得较对照品颜色深。n方法灵敏，方法灵敏，可检出可检出1g水杨酸水杨酸n应用范围应用范围原料，片剂原料，片剂水杨酸水杨酸37第37页，此课件共102页哦限量限量原料：0.1%；阿司匹林片：0.3%；阿司匹林肠溶片：1.5%；阿司匹林栓、肠溶胶囊、泡腾片：3.0
19、%（HPLC法）38第38页，此课件共102页哦合成工艺与降解反应合成工艺与降解反应n二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查合成合成降解降解氧化成联苯醌氧化成联苯醌红棕色红棕色39第39页，此课件共102页哦n为反应为反应中间体中间体和和降解产物降解产物n方法方法1双相滴定法双相滴定法ChP(2010)n原理原理利用杂质易溶于乙醚，用乙醚提取，利用杂质易溶于乙醚，用乙醚提取，使两者分离，再用盐酸滴定，以甲基橙为指使两者分离，再用盐酸滴定，以甲基橙为指示剂。示剂。间氨基酚间氨基酚乙醚相乙醚相水相水相40第40页，此课件共102页哦双相滴定法双相滴定法ChP（2010
20、年版）年版）取本品，研细，称取取本品，研细，称取3.0g，置，置50ml烧杯中加入烧杯中加入用熔融氯化钙脱水的乙醚用熔融氯化钙脱水的乙醚25ml，用玻璃棒搅拌，用玻璃棒搅拌1分钟分钟，注意将乙醚溶液滤入分液漏斗中，不溶物再用脱水的，注意将乙醚溶液滤入分液漏斗中，不溶物再用脱水的乙醚提取乙醚提取2次，每次次，每次25ml，乙醚溶液滤入同一分液漏，乙醚溶液滤入同一分液漏斗中，加水斗中，加水10ml与甲基橙指示液与甲基橙指示液1滴，振摇后，用盐滴，振摇后，用盐酸滴定液（酸滴定液（0.02mol/L）滴定，并将滴定的结果用空）滴定，并将滴定的结果用空白实验校正，消耗盐酸滴定液（白实验校正，消耗盐酸滴定
21、液（0.02mol/L）不得超）不得超过过0.3ml。41第41页，此课件共102页哦n方法方法2 2离子对离子对HPLCHPLC法法USP(29)USP(29)色谱条件：色谱条件：分析柱分析柱C18C18；流动相流动相磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液-甲醇甲醇-氢氧化四丁基铵氢氧化四丁基铵流速流速1.5ml/min1.5ml/min检测波长检测波长254nm254nm内标溶液内标溶液磺胺溶液（磺胺溶液（5 5 g/mlg/ml）杂质对照液杂质对照液间氨基酚溶液（间氨基酚溶液（1212 g/mlg/ml）供试品溶液供试品溶液对氨基水杨酸钠样品液（对氨基水杨酸钠样品液（6.9mg/ml6.9mg/ml）
22、42第42页，此课件共102页哦n系统适用性试验：系统适用性试验：杂质对照液杂质对照液10ml+10ml+内标溶液内标溶液10ml10ml100ml100ml（1 1）供试品溶液供试品溶液10ml+10ml+内标溶液内标溶液10ml10ml100ml100ml（2 2）R R取溶液（取溶液（1 1）重复进样）重复进样6 6次，次，间氨基酚与内标磺胺峰的分间氨基酚与内标磺胺峰的分离度应大于离度应大于2.52.5；RSDRSD小于小于7%7%（按（按A A杂杂/A/A内内比值计算）；比值计算）；n测定方法：测定方法：取溶液（取溶液（1 1）和（）和（2 2）分别进样，记录色谱图）分别进样，记录色谱
23、图 计算计算t tR R内内/t/tR R杂，杂，应为应为0.660.66 间氨基酚的含量间氨基酚的含量%=10%=10（C C对对/C/C样样）（）（R R样样/R/R对对）n限量限量0.25%0.25%43第43页，此课件共102页哦44第44页，此课件共102页哦为何采用为何采用ion-pair HPLC法法？对氨基水杨酸钠具碱性，在水溶液中易离解；离子型化合对氨基水杨酸钠具碱性，在水溶液中易离解；离子型化合物或能解离的化合物用常规物或能解离的化合物用常规HPLC分离时，常会出现色谱峰拖尾分离时，常会出现色谱峰拖尾和保留值不稳定等问题，用离子对色谱则能解决以上问题。离和保留值不稳定等问题
24、，用离子对色谱则能解决以上问题。离子对色谱是将离子对提取与色谱技术相结合，适用于子对色谱是将离子对提取与色谱技术相结合，适用于pKa在在2-8的弱酸和弱碱性化合物的分离，其机理尚在研究发展中。通常的弱酸和弱碱性化合物的分离，其机理尚在研究发展中。通常使用反相使用反相ion-pair 色谱，因离子对试剂在极性流动相中易于溶解，色谱，因离子对试剂在极性流动相中易于溶解，并易于调整控制反离子的浓度和流动相的并易于调整控制反离子的浓度和流动相的pH值。值。45第45页，此课件共102页哦n三、二氟尼柳中有关物质的检查三、二氟尼柳中有关物质的检查合成工艺合成工艺46第46页，此课件共102页哦中国药典（
25、中国药典（20102010）分别采用正相和反相）分别采用正相和反相色谱法色谱法自身对照法检查有关物质自身对照法检查有关物质A和和B。有关物质有关物质A：TLC法（正相）法（正相）p142有关物质有关物质B：HPLC法（反相）法（反相）47第47页，此课件共102页哦n四、甲芬那酸中特殊杂质的检查四、甲芬那酸中特殊杂质的检查合成工艺合成工艺邻邻-氯苯氯苯甲酸甲酸2 2，3-3-二甲二甲基苯胺基苯胺甲芬那酸甲芬那酸检查项目：铜盐、检查项目：铜盐、有关物质有关物质48第48页，此课件共102页哦n铜盐检查法铜盐检查法1 1、分光光度法（比色法）、分光光度法（比色法）样品样品炽灼炽灼+H+H2 2SO
26、SO4 4CuCu2+2+调节调节pHpH值值测定吸收测定吸收度度A435nm规定规定A值不得大于值不得大于0.35二乙基二硫代氨基甲酸钠二乙基二硫代氨基甲酸钠 2 2、原子吸收分光光度法、原子吸收分光光度法(BP)(BP)取取1g1g样品测样品测定，以铜标准液为对照，限量定，以铜标准液为对照，限量10ppm10ppm。49第49页，此课件共102页哦n有关物质：中国药典（有关物质：中国药典（2010)n TLCTLC法法薄层板薄层板硅胶硅胶GFGF254254展开剂展开剂异丁醇异丁醇-浓氨水浓氨水检测检测254nm254nm紫外光下检视紫外光下检视样品液样品液1 125mg/ml25mg/m
27、l样品液样品液2 250 50 g/mlg/ml点样点样各各2020 l l规定规定样样1 1杂质斑点强度不得超过杂质斑点强度不得超过样样2 2主斑点主斑点限量限量0.2%0.2%50第50页，此课件共102页哦n中国药典（中国药典（2010）HPLC法法p106n有关物质：中国药典、有关物质：中国药典、USPHPLC法法51第51页，此课件共102页哦n五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查合成工艺合成工艺对氯酚对氯酚对氯苯氧异丁酸对氯苯氧异丁酸52第52页，此课件共102页哦n对氯酚对氯酚GCGC法法ChP(2010)ChP(2010)色谱条件：色谱条件：分析柱分析柱5%
28、SE-305%SE-30（甲基硅橡胶），（甲基硅橡胶），2m2m玻璃柱；玻璃柱；载气载气氮气；柱温氮气；柱温160160 C C；检测器检测器FIDFID杂质对照液杂质对照液0.0025%0.0025%对氯酚的三氯甲烷溶液对氯酚的三氯甲烷溶液供试品溶液制备：供试品溶液制备：样品样品10g+NaOH 10g+NaOH 氯仿洗涤（弃取），氯仿洗涤（弃取），水层水层 +HCl+HCl 用氯仿提取用氯仿提取加氯仿至加氯仿至10ml10ml进样进样取对照液和样品液分别进样测定，取对照液和样品液分别进样测定，规定规定样品中样品中对氯酚峰不得大于对照品峰（对氯酚峰不得大于对照品峰（0.0025%0.0025
29、%）对对氯酚的检查是氯酚的检查是否也可以用否也可以用HPLCHPLC法？法？挥发性杂质检挥发性杂质检查采用什么方查采用什么方法？如何计算法？如何计算限量？限量？53第53页，此课件共102页哦挥发性杂质检查挥发性杂质检查采用什么方法？采用什么方法？如何计算限量？如何计算限量？中国药典（中国药典（2010）GC P10954第54页，此课件共102页哦高效液相色谱法高效液相色谱法JP(14)JP(14)对对氯酚的检查氯酚的检查是否也可以用是否也可以用HPLCHPLC法？法？55第55页，此课件共102页哦第四节 含量测定n酸碱滴定法（以阿司匹林为例）酸碱滴定法（以阿司匹林为例）n双相滴定法双相滴
30、定法(以苯甲酸钠为例以苯甲酸钠为例)n紫外分光光度法紫外分光光度法(丙磺舒丙磺舒,阿司匹林阿司匹林胶囊胶囊)nHPLCHPLC法法(阿司匹林阿司匹林栓剂栓剂)n溴量法溴量法(对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠)56第56页，此课件共102页哦nChPChP用于阿司匹林原料药的测定用于阿司匹林原料药的测定n方法方法以中性乙醇为溶剂，酚酞为指示剂，用以中性乙醇为溶剂，酚酞为指示剂，用NaOHNaOH标准溶液直接滴定。标准溶液直接滴定。T=Mb/a mol/L=180.2 0.1=18.02(mg)n直接滴定法直接滴定法原理原理滴定条件滴定条件应用范围应用范围：水杨酸、二氟尼柳、双水杨酯、苯甲酸、丙磺：水
31、杨酸、二氟尼柳、双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬等舒、布洛芬等一、一、酸碱滴定法酸碱滴定法57第57页，此课件共102页哦讨论讨论 中中性性乙乙醇醇 溶溶解解阿阿司司匹匹林林且且防防止止酯酯键键水水解解。“中中性性”是是对对中中和法所用的指示剂和法所用的指示剂（酚酞）（酚酞）而言而言 优点：简便、快速优点：简便、快速 缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）酸性杂质干扰（如水杨酸）酸性杂质干扰（如水杨酸）适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析。适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析。pKa 36 的药物溶于中性醇的药物溶于中性醇,可可直接用直接用Na
32、OH滴定滴定pKa 69 的药物要用的药物要用非水溶液滴定法非水溶液滴定法58第58页，此课件共102页哦 原理原理利用阿司匹林分子中的酯键，先加过量定利用阿司匹林分子中的酯键，先加过量定量的量的NaOHNaOH溶液使之水解，然后用溶液使之水解，然后用HH2 2SOSO4 4滴定剩余的滴定剩余的NaOHNaOH，同时做空白。，同时做空白。n水解后剩余滴定法（水解后剩余滴定法（USPUSP、JPJP）T=M/2 0.5=45.04(mg)T=M/2 0.5=45.04(mg)过量定量如果以硫酸标如果以硫酸标准液计，准液计，T应应为多少为多少mg？还有哪个药物还有哪个药物也可用此法测也可用此法测定
33、含量？定含量？59第59页，此课件共102页哦 反应摩尔比为反应摩尔比为1 2 优点：消除了酯键水解的干扰优点：消除了酯键水解的干扰 缺点：酸性杂质干扰缺点：酸性杂质干扰 羟苯乙酯含量测定亦可用此法羟苯乙酯含量测定亦可用此法 T=166.2mg/mlT=166.2mg/ml60第60页，此课件共102页哦n ChPChP用于阿司匹林片剂的含量测定用于阿司匹林片剂的含量测定n第第1步步用用NaOH中和所有的游离酸，不计量中和所有的游离酸，不计量n两步滴定法两步滴定法游离酸游离酸61第61页，此课件共102页哦n第第2 2步步水解与测定，采用剩余滴定法水解与测定，采用剩余滴定法T=M 0.1=18
34、.02(mg)应用：阿司匹林肠溶片，氯贝丁酯应用：阿司匹林肠溶片，氯贝丁酯p11262第62页，此课件共102页哦n标示量标示量=规格量规格量=处方量处方量（V空白-V样品）F18.02W100%样样%平均片重平均片重/标示量标示量=相当于标示量相当于标示量%本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰 63第63页，此课件共102页哦二、亚硝酸钠滴定法二、亚硝酸钠滴定法 对氨基水杨酸钠有芳伯氨基对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在在HClHCl中与中与NaNONaNO2 2发生重氮化反应发生重氮化反应Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+N
35、aCl+2H2O注：注：对氨基水杨酸钠的法定方法对氨基水杨酸钠的法定方法重氮化法（详见芳胺类一章）重氮化法（详见芳胺类一章）64第64页，此课件共102页哦n这是有机酸碱金属盐类的常用测定方法，在水和这是有机酸碱金属盐类的常用测定方法，在水和与水不相混溶的有机溶剂（乙醚）中用标准酸进行与水不相混溶的有机溶剂（乙醚）中用标准酸进行滴定。滴定。n例：苯甲酸钠的含量测定，以甲基橙为指示剂，例：苯甲酸钠的含量测定，以甲基橙为指示剂，用盐酸标准液滴定至水层显橙红色。用盐酸标准液滴定至水层显橙红色。p112p112水杨酸钠可否水杨酸钠可否用双相滴定法用双相滴定法测定含量？测定含量？n三、双相滴定法三、双相
36、滴定法65第65页，此课件共102页哦乙乙醚醚的的作作用用是是：萃萃取取反反应应生生成成的的苯苯甲甲酸酸，使使水水相相中中的的中中和和反反应应进进行到底行到底滴滴定定中中要要强强力力振振摇摇。随随着着滴滴定定不不断断进进行行，苯苯甲甲酸酸不不断断被被萃萃取取入入有有机机溶溶剂剂层层，使使滴滴定定反反应应完完全全，终终点清晰。点清晰。优点：消除了反应产物的干扰优点：消除了反应产物的干扰溶剂：水溶剂：水乙醚乙醚 指示剂：甲基橙指示剂：甲基橙 HCl乙醚(苯甲酸)H2O(苯甲酸钠)0.5mol/L25ml1.5g50ml2d甲基橙甲基橙 橙橙红色色66第66页，此课件共102页哦四、紫外分光光度法四
37、、紫外分光光度法n 直接紫外分光光度法直接紫外分光光度法n丙磺舒片剂含量测定丙磺舒片剂含量测定n取取10片，称重，研细，精密称取适量（约相当于丙磺舒片，称重，研细，精密称取适量（约相当于丙磺舒60mg加乙醇稀释至加乙醇稀释至200ml，滤过，取续滤液，滤过，取续滤液5ml，稀释至，稀释至100ml，于，于249nm处测定吸收度，按处测定吸收度，按E=338计算含量。计算含量。AE 100100 2005 1/W平均片重规格=相当于标示量相当于标示量%100%67第67页，此课件共102页哦柱分配色谱-紫外分光光度法阿司匹林胶囊测定（USP）n水杨酸的限量测定水杨酸的限量测定样品的氯样品的氯仿溶
38、液仿溶液冲洗：氯仿分次洗（阿司匹林）冲洗：氯仿分次洗（阿司匹林）洗脱：冰洗脱：冰HAc+HAc+乙醚（解吸）乙醚（解吸）洗脱：氯仿（水杨酸）洗脱：氯仿（水杨酸）测定：测定：306nm306nm，A A样样 A A对对限量：以阿司匹林标示量计，限量：以阿司匹林标示量计，允许水杨酸的量为允许水杨酸的量为0.75%0.75%三氯化铁作用三氯化铁作用与水杨酸形成与水杨酸形成紫色配位物，使水杨酸保留在柱上。紫色配位物，使水杨酸保留在柱上。尿素作用尿素作用高浓度尿素的存在可使高浓度尿素的存在可使配位物在柱上的移动变慢，谱带较窄。配位物在柱上的移动变慢，谱带较窄。磷酸的作用磷酸的作用若有少量若有少量FeCl
39、FeCl3 3被冲被冲洗下来，色带变黄，洗下来，色带变黄，影响结果，磷酸可影响结果，磷酸可与与FeFe3+3+形成不溶性形成不溶性磷酸铁而避免干扰。磷酸铁而避免干扰。对照溶液对照溶液75 g 10ml/50ml,样品液样品液100mg/50ml68第68页，此课件共102页哦n阿司匹林的含量测定阿司匹林的含量测定上样：样品的氯仿溶液上样：样品的氯仿溶液冲洗：氯仿（弃去）冲洗：氯仿（弃去）洗脱：冰洗脱：冰HAc-CHCl3（阿（阿司匹林司匹林+水杨酸）水杨酸）测定测定：280nm计算：对照品比较法计算：对照品比较法（测得的是总量）（测得的是总量）碳酸氢钠的作用：碳酸氢钠的作用：使阿司匹林和水使阿
40、司匹林和水杨酸均成钠盐保杨酸均成钠盐保留在柱上。留在柱上。冰冰HAc作用：解吸作用：解吸69第69页，此课件共102页哦n五、HPLC法n阿司匹林栓剂采用阿司匹林栓剂采用HPLC HPLC 法测定含量法测定含量(ChP2010)n色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（ODSODS）n流动相：甲醇流动相：甲醇-二乙胺水溶液二乙胺水溶液-冰醋酸冰醋酸n检测波长：检测波长：280nm280nmn内标物：咖啡因内标物：咖啡因n系统适用性试验：系统适用性试验：nn n按阿司匹林应不低于按阿司匹林应不低于20002000，nR R阿司匹林、水杨酸与内标物峰的分离度阿司匹林、水杨酸与内
41、标物峰的分离度应大于应大于1.5.1.5.70第70页，此课件共102页哦计算供试液 C样=（R样/R标）C标 溶液配制：溶液配制：内标溶液：内标溶液：4mg/ml4mg/ml对照品溶液：阿司匹林对照品溶液：阿司匹林0.15g0.15g，精密加内标液，精密加内标液5ml5ml，稀释至，稀释至50ml50ml，精密量取，精密量取2ml2ml，稀释至，稀释至50ml50ml。供试品溶液：取供试品溶液：取5 5粒，精密称定，在粒，精密称定，在40-5040-50 C C水浴上熔融，精水浴上熔融，精密量取适量（相当于阿司匹林密量取适量（相当于阿司匹林0.15g0.15g），精密加内标液），精密加内标液
42、5ml5ml，加乙醇至加乙醇至50ml50ml，精密量取，精密量取2ml2ml，稀释至，稀释至50ml50ml。C样稀释倍数平均粒重称样量标示量 100%相当于标示量%=71第71页，此课件共102页哦为什么阿司匹林栓剂采用为什么阿司匹林栓剂采用HPLC 法测定含量法测定含量?其他制剂是否也可以用其他制剂是否也可以用HPLC法测定含量法测定含量?72第72页，此课件共102页哦 中国药典中国药典（20102010年版）阿司匹林肠溶胶囊、年版）阿司匹林肠溶胶囊、栓剂，布洛芬缓释胶囊、口服溶液、滴剂、糖浆栓剂，布洛芬缓释胶囊、口服溶液、滴剂、糖浆剂。剂。USP(29)USP(29)阿司匹林片、缓释
43、片、延时释放片泡阿司匹林片、缓释片、延时释放片泡腾片、腾片、胶囊、缓释胶囊、丸剂及多种复方制剂、胶囊、缓释胶囊、丸剂及多种复方制剂、丙璜舒、甲芬那酸及其胶囊、二氟尼柳及其片、丙璜舒、甲芬那酸及其胶囊、二氟尼柳及其片、对氨基水杨酸钠及其片、双水杨酯及其片和胶囊、对氨基水杨酸钠及其片、双水杨酯及其片和胶囊、布洛芬及其片、口服液、布洛芬为麻黄碱片等。布洛芬及其片、口服液、布洛芬为麻黄碱片等。73第73页，此课件共102页哦n利用对氨基水杨酸钠分子结构中酚羟利用对氨基水杨酸钠分子结构中酚羟基邻对位的氢较活泼，易被卤化，在基邻对位的氢较活泼，易被卤化，在酸性条件下与过量溴定量反应，剩余酸性条件下与过量溴
44、定量反应，剩余的溴用碘量法测定。的溴用碘量法测定。n六、溴量法六、溴量法74第74页，此课件共102页哦原理75第75页，此课件共102页哦n方法方法n本品本品0.2g 100.0mL0.2g 100.0mLn取取20.0mL+Br20.0mL+Br（0.1mol/L0.1mol/L）25.0mL+KBr25.0mL+KBr溶液溶液+HCl-HCl-冰冰HAcHAc 密塞，放置密塞，放置10min+KI 10min+KI 密塞，放密塞，放置置5min 5min 用用NaNa2 2S S2 2OO3 3 （0.1mol/L0.1mol/L）滴定，近终点）滴定，近终点时加时加淀粉指示液淀粉指示液，
45、滴定至蓝色消褪，将结果用，滴定至蓝色消褪，将结果用空白空白试验试验校正。校正。n每每1mL Br1mL Br（0.1mol/L0.1mol/L）相当于）相当于2.9187mg2.9187mg对氨对氨基水杨酸钠。：基水杨酸钠。：100%W（V0 V）F T含量含量%=%=76第76页，此课件共102页哦第五节第五节 体内药物分析体内药物分析一、血清中阿司匹林和水杨酸浓度的高效液相色谱测定法一、血清中阿司匹林和水杨酸浓度的高效液相色谱测定法二、尿中丙璜舒的固相萃取净化二、尿中丙璜舒的固相萃取净化-高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法三、三、HPLCHPLC法测定人血浆中布洛芬含量法测定人血浆中布洛
46、芬含量四、血浆中二氟尼柳的固相萃取四、血浆中二氟尼柳的固相萃取-反相液相色谱测定法反相液相色谱测定法77第77页，此课件共102页哦98：80鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是A.碘化钾 B.碘化汞钾C.三氯化铁 D.硫酸亚铁E.亚铁氰化钾（C）78第78页，此课件共102页哦95：129.乙酰水杨酸片剂可采用的测定方法为乙酰水杨酸片剂可采用的测定方法为A.非水滴定法B.水解后剩余滴定法C.两步滴定法D.柱色谱法E.双相滴定法（CD）79第79页，此课件共102页哦98：134测定阿司匹林片和栓中药物的含量可采用的方法是测定阿司匹林片和栓中药物的含量可采用的方
47、法是A.重量法B.酸碱滴定法C.高效液相色谱法 D.络合滴定法E.高锰酸钾法（BC）80第80页，此课件共102页哦99：81.两两步步滴滴定定法法测测定定阿阿司司匹匹林林片片的的含含量量时时，每每1ml氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液（0.1mol/L）相相当当于于阿阿司司匹匹林林（分分子子量量=180.16）的的量是量是A.18.02mg B.180.2mgC.90.08mg D.45.04mgE.450.0mg（A）81第81页，此课件共102页哦反应摩尔比为11T滴定度，每滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的滴定液相当于被测组分的mg数数c滴定液浓度，滴定液浓度，mol/LM被测物的摩尔质量
48、，被测物的摩尔质量，g/moln1mol样品消耗滴定液的摩尔数，常用反应摩尔比体现，即反应摩尔比为样品消耗滴定液的摩尔数，常用反应摩尔比体现，即反应摩尔比为1 n82第82页，此课件共102页哦96：78苯苯甲甲酸酸钠钠的的含含量量测测定定，中中国国药药典典（2005年年版版）采采用双相滴定法，其所用的溶剂体系为用双相滴定法，其所用的溶剂体系为A.水乙醇 B.水冰醋酸C.水氯仿 D.水乙醚E.水丙酮（D）83第83页，此课件共102页哦99：83.双相滴定法可适用的药物为双相滴定法可适用的药物为A.阿司匹林B.对乙酰氨基酚C.水杨酸D.苯甲酸E.苯甲酸钠（E）84第84页，此课件共102页哦9
49、9x：121125含量测定方法（中国药典2005年版）为A.直接中和滴定法 B.两步滴定法C.两者均可 D.两者均不可99x：121阿司匹林片99x：122阿司匹林原料药99x：123.对氨基水杨酸钠99x：124.阿司匹林栓剂99x：125.阿司匹林肠溶剂（B）（A）（D）（D）（B）85第85页，此课件共102页哦例例15A两步酸碱滴定法两步酸碱滴定法 B直接酸碱滴定法直接酸碱滴定法C两者皆是两者皆是 D两者皆不是两者皆不是1.苯甲酸钠的测定2.氯贝丁酯的测定3.盐酸的测定4.酸碱滴定法5.阿司匹林片的测定（D）（A）（B）（C）（A）86第86页，此课件共102页哦例6.采用直接酸碱滴定
50、法测定阿司匹林的含量时，已知阿司匹林的分子量为180.2，所用氢氧化钠滴定溶液的浓度为0.1mol/L，请问1ml氢氧化钠滴定溶液相当于阿司匹林的量应是A.180.2mg B.180.2gC.18.02 mg D.1.802mg E.9.01mg（C）87第87页，此课件共102页哦例例7.阿阿司司匹匹林林加加碳碳酸酸钠钠试试液液加加热热后后，再再加加稀稀硫硫酸酸酸酸化化，此时产生的白色沉淀应是此时产生的白色沉淀应是 A.苯酚苯酚 B.乙酰水杨酸乙酰水杨酸C.水杨酸水杨酸 D.醋酸钠醋酸钠 E.醋酸苯酯醋酸苯酯（C）88第88页，此课件共102页哦例例8.水水杨杨酸酸与与三三氯氯化化铁铁试试液