芳酸及其酯类药物的分析课件.ppt

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1、芳酸及其酯类药物的分析第1页，此课件共41页哦 基 本 要 求 一一、掌掌握握水水杨杨酸酸类类、苯苯甲甲酸酸类类药药物物的的鉴鉴别别和和含含量测定的基本原理与方法。量测定的基本原理与方法。二二、熟熟悉悉其其他他芳芳酸酸类类药药物物鉴鉴别别和和含含量量测测定定的的基本原理与方法。基本原理与方法。三、了解本类药物的体内分析方法。三、了解本类药物的体内分析方法。典型药物 鉴别试验 含量测定 体内药分练习与思考练习与思考 杂质检查第2页，此课件共41页哦苯甲酸（钠）苯甲酸（钠）一、苯甲酸类一、苯甲酸类甲芬那酸甲芬那酸丙磺舒丙磺舒典型药物分类与理化性质典型药物分类与理化性质羟苯乙酯羟苯乙酯第3页，此课件

2、共41页哦阿司匹林阿司匹林水杨酸水杨酸双水杨酯双水杨酯对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠贝诺酯贝诺酯二、水杨酸类二、水杨酸类第4页，此课件共41页哦三、其他芳酸类三、其他芳酸类 氯贝丁酯氯贝丁酯布洛芬布洛芬酸性较弱第5页，此课件共41页哦主要理化性质主要理化性质1.溶解性溶解性:游离型芳酸或酯类不溶于水。游离型芳酸或酯类不溶于水。2.UV和和IR特性：特性：具有苯环，用于鉴别或含量测定。具有苯环，用于鉴别或含量测定。3.酸酸性性：pH 3-6，受受取取代代基基的的影影响响。其其它它芳芳酸酸类类酸酸性性较弱较弱pKa=2.95 pKa=3.49 pKa=4.26第6页，此课件共41页哦一、与铁盐反应一

3、、与铁盐反应二、重氮化二、重氮化-偶合反应偶合反应三、氧化反应三、氧化反应四、水解反应四、水解反应五、分解反应五、分解反应六、紫外分光光度法六、紫外分光光度法七、红外分光光度法七、红外分光光度法八、八、TLC和和HPLC 第二节第二节 鉴别试验鉴别试验第7页，此课件共41页哦 与三氯化铁反应与三氯化铁反应1.水杨酸类：水杨酸类：2.苯甲酸类：苯甲酸类：第8页，此课件共41页哦3.其它芳酸类：其它芳酸类：a）氯贝丁酯）氯贝丁酯b）布洛芬）布洛芬第9页，此课件共41页哦药物类型药物类型反应条件反应条件鉴别要点鉴别要点水杨酸（盐）水杨酸（盐）中性、弱酸性（中性、弱酸性（pH 4-6）紫色配合物紫色配

4、合物苯甲酸盐苯甲酸盐中性或碱性中性或碱性赭色沉淀赭色沉淀丙磺舒丙磺舒少量少量NaOH，溶解，溶解米黄色沉淀米黄色沉淀布洛芬布洛芬高氯酸羟胺高氯酸羟胺+DDC，加，加热热20 min紫色紫色羟肟酸铁配合羟肟酸铁配合物物氯贝丁酯氯贝丁酯盐酸羟胺盐酸羟胺+KOH，加热，加热，+HCl紫色紫色羟肟酸铁配合羟肟酸铁配合物物第10页，此课件共41页哦凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的 药药物均可反应。物均可反应。重氮化重氮化-偶合反应偶合反应第11页，此课件共41页哦1.1.直接反应：直接反应：对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠2.水解后反应：水解后反应：贝诺酯

5、贝诺酯具有潜在芳伯氨基，酸水解后再重氮化具有潜在芳伯氨基，酸水解后再重氮化第12页，此课件共41页哦+K2Cr2O7 深蓝色深蓝色棕绿色棕绿色甲芬那酸甲芬那酸+H2SO4 黄色黄色绿色绿色荧光荧光氧化反应氧化反应第13页，此课件共41页哦 1.1.ASA酸水解生成酸水解生成SA和和CH3COOH：SA的的mp为为156156161161。2.2.双水杨酯水解生成双水杨酯水解生成SA：SA的的mp为为158158。水解反应水解反应第14页，此课件共41页哦 1.苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物，可用于鉴别。苯甲酸升华物，可用于鉴别。2.丙磺舒与丙磺舒与NaOH熔融分解成熔融分

6、解成Na2SO3,经硝酸氧化成经硝酸氧化成 Na2SO4。3.丙磺舒加热分解丙磺舒加热分解，生成，生成SO2气体，有臭味气体，有臭味分解产物反应分解产物反应第15页，此课件共41页哦 1.测定测定max ；min。例如：布洛芬用例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备溶液制备0.25mg/ml；max:265nm,273nm;min:245nm,271nm。2.在在max 处测定一定浓度供试液的吸收度处测定一定浓度供试液的吸收度A。例如：羟苯乙酯，例如：羟苯乙酯，5g/ml max =295 nm;A =0.48 3.在在max 处测定供试液的百分吸收系数。处测定供试液的百分吸收系数。例如：贝诺

7、酯在例如：贝诺酯在max =240nm;E1%1cm=730760 紫外吸收光谱法紫外吸收光谱法第16页，此课件共41页哦 4.在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度 比值法）比值法）例如：对氨基水杨酸钠例如：对氨基水杨酸钠10g/ml;A265/A299 =1.561.56 再例如：甲芬那酸再例如：甲芬那酸14g/ml;A278280/A348352 =1.151.30 第17页，此课件共41页哦七、红外吸收光谱法七、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱33002300cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440

8、C=C775cm-1Ar-H第18页，此课件共41页哦370029001640N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱第19页，此课件共41页哦一、阿司匹林中特殊杂质的检查一、阿司匹林中特殊杂质的检查第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查1.合成工艺合成工艺第20页，此课件共41页哦2.水水杨杨酸酸反反应应中中间间体体与与水水解解产产物物，利利用用SA可可与与高高铁铁盐盐呈呈紫紫堇堇色色，而而乙乙酰酰水水杨杨酸酸不不含含游游离离酚酚羟羟基基，不不与与高高铁铁离离子子反反应应。取取一一定定量样品和水杨酸对照品与硫酸铁铵反

9、应，用比色法检查。量样品和水杨酸对照品与硫酸铁铵反应，用比色法检查。3.易易炭炭化化物物检检查查 主主要要检检查查ASA中中能能被被硫硫酸酸炭炭化化显显色色的的低低分分子子有有机机杂杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。质。采用与标准比色液比色的方法检查。1.溶液的澄清度溶液的澄清度检查原料（检查原料（苯酚苯酚）和副产物（）和副产物（苯酯苯酯），利用这些），利用这些物质不溶于物质不溶于Na2CO3的性质。的性质。2.检查检查第21页，此课件共41页哦1.间氨基酚间氨基酚反应中间体和降解产物，并且容易进一步氧化，反应中间体和降解产物，并且容易进一步氧化，颜色加深。颜色加深。二、对氨基水杨酸钠中特

10、殊杂质的检查二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查2.检查方法：检查方法：1）双相滴定法：）双相滴定法：（Ch.P）间氨基酚溶于乙醚，对氨基水杨酸钠不溶间氨基酚溶于乙醚，对氨基水杨酸钠不溶乙醚；乙醚提取加适量水和指示剂，盐酸滴定，生成物在乙醚中不溶于乙醚；乙醚提取加适量水和指示剂，盐酸滴定，生成物在乙醚中不溶于是转移到水相中。是转移到水相中。2）HPLC法：法：采用内标法，以磺胺作内标采用内标法，以磺胺作内标（USP）第22页，此课件共41页哦 甲芬那酸是以邻甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在二甲基苯胺在Cu的催化下的催化下 缩合而成，因此成品药物中要检查缩合而成，因此成品药

11、物中要检查铜盐铜盐及及有关物质有关物质。分光光度法：利用分光光度法：利用Cu 2+与与Na-DDC呈色后测定呈色后测定A 1.铜盐检查法铜盐检查法 原子吸收分光光度法：原子吸收分光光度法：BP（2000）2.有关物质的检查有关物质的检查 主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲 酸各国药典均采用酸各国药典均采用TLC法中的法中的自身高低浓度对照自身高低浓度对照法。法。三、甲芬那酸中特殊杂质的检查三、甲芬那酸中特殊杂质的检查第23页，此课件共41页哦四、氯贝丁酯中特殊杂质的检查四、氯贝丁酯中特殊杂质的检查n主要检查成品药物中残留的主要检查成品药物中残留的对氯酚

12、对氯酚原料和原料和挥发性杂挥发性杂质质GC-FID法法HPLC法：以对法：以对-羟乙基酚作内标，用正相羟乙基酚作内标，用正相HPLC2.挥发性杂质的检查方法挥发性杂质的检查方法 GC法法1.对氯酚检查对氯酚检查返返 回回第24页，此课件共41页哦（一）直接滴定法（一）直接滴定法基于此药物酸性较强基于此药物酸性较强酸碱滴定法：水杨酸类酸碱滴定法：水杨酸类1.原理：原理：2.条件：条件：在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；。摩尔比为在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；。摩尔比为1:1。3.注意事项：注意事项：1）乙醇对酚酞显酸性使结果偏高，所以乙醇在乙醇对酚酞显酸性使结果偏高，所以乙醇在使用之前需用使用之前需

13、用NaOH中和至对酚酞显中性；中和至对酚酞显中性；2）滴定时振摇要快，滴定时振摇要快，防止局部碱液浓度过高使酯键水解；防止局部碱液浓度过高使酯键水解；3）专属性差，易受降解产专属性差，易受降解产物水杨酸和醋酸的干扰，所以不适合降解产物含量较高的样物水杨酸和醋酸的干扰，所以不适合降解产物含量较高的样品测定。品测定。一、阿司匹林一、阿司匹林第25页，此课件共41页哦（二）水解后剩余滴定法（二）水解后剩余滴定法（USP、JP）原理：原理：条件：条件：水溶液水溶液 第26页，此课件共41页哦（三）两步滴定法（三）两步滴定法（Ch.P用于用于阿司匹林片阿司匹林片的测定）的测定）原因：片剂中有稳定剂酒石酸

14、或枸橼酸，此外工艺中可能产生水原因：片剂中有稳定剂酒石酸或枸橼酸，此外工艺中可能产生水杨酸和醋酸，不能采用直接滴定或水解后剩余滴定。杨酸和醋酸，不能采用直接滴定或水解后剩余滴定。第一步：用第一步：用NaOH中和所有的游离酸，不计量中和所有的游离酸，不计量 第二步：水解与测定，采用剩余滴定法第二步：水解与测定，采用剩余滴定法 第27页，此课件共41页哦 对氨基水杨酸钠有芳伯氨基对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在在HCl中与中与NaNO2发生重氮化反应发生重氮化反应Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O 因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此法在因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含

15、量，此法在下章重点讨论。下章重点讨论。（二）（二）亚硝酸钠滴定法第28页，此课件共41页哦 （三）双相滴定法：（苯甲酸钠）（三）双相滴定法：（苯甲酸钠）这是有机酸碱金属盐类的常用测定方法，在水和与水不相这是有机酸碱金属盐类的常用测定方法，在水和与水不相混溶的有机溶剂（乙醚）中用标准酸进行滴定。混溶的有机溶剂（乙醚）中用标准酸进行滴定。生生成成的的苯苯甲甲酸酸不不溶溶于于水水，终终点点pH突突跃跃不不明明显显，不不易易观观察察。苯苯甲甲酸酸在在乙乙醚醚中中易易溶溶，在在水水相相中中加加入入乙乙醚醚将将滴滴定定中中产产生生的的苯苯甲甲酸酸萃萃取取入入醚醚层层。因此用双相滴定可使反应完全终点明显。因

16、此用双相滴定可使反应完全终点明显。第29页，此课件共41页哦 （一）直接紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法 贝诺酯的含量贝诺酯的含量=CxD/m=紫外分光光度法第30页，此课件共41页哦（二）离子交换（二）离子交换-紫外分光光度法紫外分光光度法氯贝丁酯氯贝丁酯及其制剂及其制剂 USP(2005)采用酸碱滴定法。含有采用酸碱滴定法。含有酸性杂质酸性杂质对氯酚对氯酚时，可采用时，可采用强碱性阴离子强碱性阴离子交换树脂吸交换树脂吸附酸性杂质后紫外测定（附酸性杂质后紫外测定（USP（29）n阴阴离离子子交交换换树树脂脂是在分子中含有碱性基团的离子交换树脂。在水或极性溶剂中能溶胀,在水中具有碱性,能

17、以其氢氧根离子或非金属离子交换溶液中的阴离子。n含有氢氧根离子的树脂,根据电离常数的大小,可分为强强碱碱性性、中中等等碱碱性和弱碱性三类性和弱碱性三类。n强碱性阴离子交换树脂,主要是分子中含有季铵基-N(CH)3OH的树脂。弱碱性阴离子交换树脂,有间苯二胺-甲醛树脂、三聚氰胺-胍甲醛树脂等。第31页，此课件共41页哦第32页，此课件共41页哦（三）柱分配色谱三）柱分配色谱-紫外分光光度法紫外分光光度法 USP(29)采用此法同时测定采用此法同时测定ASA胶囊中胶囊中 ASA和和SA。1.SA的限量测定的限量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试 品溶液的

18、制备。品溶液的制备。第33页，此课件共41页哦供试品液：供试品液：CHCl3液液洗脱液洗脱液1：CHCl3洗脱液洗脱液2：HAC-乙醚乙醚硅藻土，FeCl3-尿素 玻璃棉硅藻土，Na2CO3供试品液：供试品液：CHCl3-HCl液液洗脱液洗脱液1：HAC-CHCl3 (1:10)10ml洗脱液洗脱液2：HAC-CHCl3 (1:100)85ml 1-杂质先洗脱杂质先洗脱2-SA后洗脱后洗脱max=306nm AuAs1-杂质先洗脱杂质先洗脱2-ASA后洗脱后洗脱 max=280nmASA(mg)=C(Au/As)第34页，此课件共41页哦2.2.ASA的含量测定的含量测定 色谱柱的制备；对照品

19、溶液的制备；色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。供试品溶液的制备。第35页，此课件共41页哦Ch.P(2005)ASA的胶囊剂的含量测定采用此法。的胶囊剂的含量测定采用此法。USP（24）ASA片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。五、五、HPLC法法第36页，此课件共41页哦一、血清中一、血清中ASA和和SA浓度的浓度的HPLC法法色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为ODS-C18(150mm 4.6mm,5m)流动相为甲醇流动相为甲醇-水水-正丁醇正丁醇(30:20:1)(30:20

20、:1)检测波长为检测波长为237237nm；内标物为苯甲酸。内标物为苯甲酸。血清样品预处理血清样品预处理血清血清100100l +HClO450 l+不同浓度不同浓度ASA和和SA+内标液内标液涡旋混合涡旋混合2 2min 离心离心5 5min 取上清液取上清液2020l进样。进样。第五节第五节 体内药物分析体内药物分析第37页，此课件共41页哦回归方程：回归方程：以峰高比（以峰高比（H标标/H内内）对浓度回归）对浓度回归 ASA的回归方程：的回归方程：Y=5.810-3+5.2910-2X r=0.9996 SA的回归方程：的回归方程：Y=6.010-3+8.3310-2X r=0.9981

21、 ASA和和SA的线性范围分别为：的线性范围分别为：1 12020g/ml;23030g/ml回收率：回收率：空白血清空白血清+五种不同浓度测定，五种不同浓度测定，ASA为为96.0%96.0%106.0%;106.0%;SA为为92.0%92.0%119.5%;119.5%;（五种不同浓度均应在线性范围内）（五种不同浓度均应在线性范围内）第38页，此课件共41页哦色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为LiChrospher100RP(125mm4mm,5m)流动相为流动相为25%乙腈溶液乙腈溶液-醋酸缓冲溶液梯度洗脱。醋酸缓冲溶液梯度洗脱。检测波长为检测波长为254nm；内标物为依他尼酸。内标

22、物为依他尼酸。尿样品预处理：尿样品预处理：C8固相萃取柱，固相萃取柱，100100mg填料填料/ml用甲醇用甲醇1.01.0ml,然后然后用用0.50.5ml蒸馏水活化。蒸馏水活化。2.02.0ml尿样尿样+内标内标300300l(10g/ml)上柱上柱 1.0ml水洗水洗 脱生物杂质脱生物杂质 再用甲醇再用甲醇0.5ml洗脱保留在柱上的丙磺舒和内洗脱保留在柱上的丙磺舒和内 标。洗脱液标。洗脱液0.45m浸滤膜滤过，取浸滤膜滤过，取5l直接进样分析。直接进样分析。二、尿中丙磺舒的固相萃取净化二、尿中丙磺舒的固相萃取净化-HPLC法法(运动员违禁药物运动员违禁药物)第39页，此课件共41页哦线性

23、关系和回收率线性关系和回收率：取空白尿样取空白尿样2.0ml+不同浓度丙磺舒不同浓度丙磺舒+内标液内标液按上述方法按上述方法分析分析(浓度范围为浓度范围为0.10.1g/ml 100100g/ml);A丙丙/A内内对对C丙丙回归。回归。回收率：回收率：丙磺舒为丙磺舒为100%3%(100%3%(n=14)；内标为内标为101%3%(101%3%(n=12)；人尿样测定人尿样测定：丙磺舒丙磺舒(单剂量单剂量500mg)尿排泄药尿排泄药-时曲线时曲线(见见P136)第40页，此课件共41页哦三、三、HPLC法测定人血浆中布洛芬含量法测定人血浆中布洛芬含量 色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为Shi

24、m-packCLC-ODS(150mm6mm,10m)预柱为预柱为YWG-C18；流动相为甲醇流动相为甲醇-20mol/L磷酸二氢磷酸二氢 钾冲溶液钾冲溶液(70:30,pH=4.0);流速为流速为1.0ml/min;检测波长为检测波长为221nm；内标物为肉桂酸内标物为肉桂酸。样品预处理：样品预处理：取肝素抗凝血浆取肝素抗凝血浆0 0。2424ml+内标液内标液+甲醇甲醇0.50.5ml,振荡振荡混匀，离心混匀，离心(1000(1000r/min)15min,取上清液取上清液1010l直直 接进样分析。布洛芬和肉桂酸接进样分析。布洛芬和肉桂酸tR为为5.15和和2.85min。第41页，此课件共41页哦