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1、实验十二实验十二 氨基酸的薄层层析氨基酸的薄层层析12/18/20221氨基酸的薄层层析一、实验目的一、实验目的 掌握氨基酸的薄层层析氨基酸的薄层层析的方法和原理，学会分析未知样品的氨基酸成分。二、原理二、原理 滤纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。有机相流经固定相支持物时，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离。溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：Rf 物质结构、溶剂系统的物质组成等因素都会影响Rf值。原点到层析斑点中心的距离原点到溶剂前沿的距离12/18/20222氨基酸的薄层层析三、试剂和器材三、试剂和
2、器材 1.试剂 0.5%茚三酮溶液、标准氨基酸溶液 溶剂系统：正丁醇88甲酸水(15：3：2，V/V)2.器材 层析缸、毛细管、电吹风四、操作步骤 如下页所示。12/18/20223氨基酸的薄层层析操作流程：点样层析显色滤纸一边1.5厘米处划线，在线上等距离划6个点毛细管吸样品（约2cm高）点样，直径小于0.5cm，电吹风吹干，重复一次。干燥后将滤纸卷成圆形，缝合滤纸，注意两边缘不能接触。酸层析液放入培养皿中，将滤纸垂直放置在培养皿中，盖紧缸盖。层析纸2/3-3/4处取出滤纸，电吹风吹干，划前沿线。喷雾器均匀喷上茚三酮溶液，电吹风热风吹干至看到AA彩色斑点。用铅笔将图谱上的斑点圈出，测Rf相关值。12/18/20224氨基酸的薄层层析五、注意事项五、注意事项 1.为了防止滤纸被手上的汗液污染，应尽量在操作时带手套。2.重复点样时可用吹风机的冷风吹干样品，喷了茚三酮后的显色则要用热风吹干滤纸。六、思考题六、思考题 1、如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的测定？2、纸层析和柱层析、薄层层析、高效液相层析各有什么特点？12/18/20225氨基酸的薄层层析