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1、肿肿瘤瘤的的基基因因治治疗疗一一.基因与肿瘤基因与肿瘤与与遗遗传传疾疾病病不不同同,与与肿肿瘤瘤相相关关的的基基因因突突变变大大多多是是获获得得的的、多多发发的的，并并且且在在很很大大程程度度上上尚尚未未被被清清楚楚地地认认识识，与与肿肿瘤瘤发发生生直直接接相相关关的的基基因包括癌基因及肿瘤抑癌基因。因包括癌基因及肿瘤抑癌基因。（一）、癌基因（一）、癌基因近近年年来来的的研研究究表表明明，癌癌基基因因是是正正常常细细胞胞生生长长和和发发育育的的必必要要成成分分。在在进进化化过过程程中中，这这些些癌癌基基因因从从真真菌菌到到人人类类保保持持高高度度的的保保守守性性。在在生生理理条条件件下下，这这
2、些些基基因因被被称称为为原原癌癌基基因因。原原癌癌基基因因蛋蛋白白产产物物在在细细胞胞的的生生长长与与发发育育的的信信号号传传递递过过程程中中发发挥挥重重要要作作用用。这这种种作作用用一一旦旦失失控控，常常常常使使细细胞胞走走向向恶恶性性转转化化。在在100余余种种已已被被确确定定的的原原癌癌基基因中，只有一小部分被证明与人类肿瘤的形成密切相关。因中，只有一小部分被证明与人类肿瘤的形成密切相关。一些常见的癌基因及其相关的人类肿瘤一些常见的癌基因及其相关的人类肿瘤功能功能癌基因癌基因相关的人类肿瘤相关的人类肿瘤生长因子生长因子HST胃癌胃癌生长因子受体生长因子受体NEU/ERB-B2乳腺癌、卵巢
3、癌、胃癌乳腺癌、卵巢癌、胃癌ERB-B乳腺癌、神经系肿瘤乳腺癌、神经系肿瘤信号传导蛋白信号传导蛋白Ha-RAS膀胱癌膀胱癌Ki-RAS肺癌、结肠癌肺癌、结肠癌N-RAS白血病白血病蛋白蛋白RAF胃癌胃癌ABL白血病白血病/淋巴瘤淋巴瘤转录因之转录因之Myc淋巴瘤、多种癌症淋巴瘤、多种癌症L-Myc小细胞肺癌小细胞肺癌膜蛋白膜蛋白MAS乳腺癌乳腺癌BCL-2滤泡型、未分化的淋巴瘤滤泡型、未分化的淋巴瘤这些原癌基因一经异常激活，常常导致细胞的恶变，其作用机制如下：这些原癌基因一经异常激活，常常导致细胞的恶变，其作用机制如下：1过量的生长因子可导致细胞的增殖失控。过量的生长因子可导致细胞的增殖失控。
4、2过过多多的的或或异异常常的的生生长长因因子子受受体体可可以以持持续续地地处处于于激激活活状状态态，甚甚至至不不需需要要与与相关的生长因子结合。相关的生长因子结合。3.异常的蛋白激酶会扰乱细胞的正常调控。异常的蛋白激酶会扰乱细胞的正常调控。4过过多多的的或或异异常常的的转转录录因因子子可可导导致致基基因因的的异异常常转转录录，从从而而刺刺激激细细胞胞的的异异常常生长与复制。生长与复制。癌基因与人类肿瘤癌基因与人类肿瘤目前已鉴定出许多与肿瘤细胞相关的癌基因，进一步研究癌基因目前已鉴定出许多与肿瘤细胞相关的癌基因，进一步研究癌基因在肿瘤中的作用。在肿瘤中的作用。（1）Ras基因变异与肿瘤基因变异与
5、肿瘤研究表明，约研究表明，约10%15%的肿瘤至少的肿瘤至少有三种有三种Ras，因中一种的点突变，其中，因中一种的点突变，其中K-Ras基因更易称为突变基因更易称为突变的基因。的基因。K-Ras基因点突变集中在第基因点突变集中在第12位氨基酸残基，少数病位氨基酸残基，少数病理中也有第理中也有第13位及第位及第61位点突变。约位点突变。约50%结肠癌、结肠癌、70%90%胰胰腺癌、腺癌、30%的肺癌均有的肺癌均有Ras点突变。在正常细胞中，每一种点突变。在正常细胞中，每一种Ras基基因都分别编码一种鸟苷酸结合蛋白。因都分别编码一种鸟苷酸结合蛋白。Ras蛋白在细胞增殖分化信蛋白在细胞增殖分化信号从
6、激活的跨膜受体传递到下游蛋白激酶的过程中起作用。其结号从激活的跨膜受体传递到下游蛋白激酶的过程中起作用。其结果导致果导致Ras蛋白与蛋白与GTP（三磷酸鸟苷）的持续结合具有促进细胞（三磷酸鸟苷）的持续结合具有促进细胞增殖作用。研究表明，采用针对增殖作用。研究表明，采用针对Ras基因的变异将基因的变异将Ras基因的功能基因的功能失活，可抑制肿瘤的恶性生长，进一步证明纠正突变型失活，可抑制肿瘤的恶性生长，进一步证明纠正突变型Ras引起引起的信号传导通路的异常可能是一条控制肿瘤细胞恶性化增殖的的信号传导通路的异常可能是一条控制肿瘤细胞恶性化增殖的有效途径。有效途径。（2）Myc基因变异与肿瘤基因变异
7、与肿瘤Myc基因是一种癌基因。通过染色体基因是一种癌基因。通过染色体易位而活化，通常通过第易位而活化，通常通过第8号染色体与第号染色体与第14号染色体间易位，破号染色体间易位，破坏坏Myc基因的调控，在某些肿瘤细胞中基因的调控，在某些肿瘤细胞中Myc基因还受基因还受DNA扩增的扩增的影响。影响。Myc基因在细胞生长调控中具有重要作用，一旦发生突变，基因在细胞生长调控中具有重要作用，一旦发生突变，导致细胞恶性增殖。导致细胞恶性增殖。此外：此外：Nen基因变异与卵巢癌、乳腺癌及胃癌等，基因变异与卵巢癌、乳腺癌及胃癌等，c-Met基因变异基因变异与胃粘膜病变，与胃粘膜病变，Bcl-2基因与细胞凋亡等
8、都是研究热点。基因与细胞凋亡等都是研究热点。（3）端粒酶）端粒酶端粒是真核细胞线形染色体末端由段粒端粒是真核细胞线形染色体末端由段粒DNA和端粒和端粒蛋白质构成的一种特殊结构。人的端粒蛋白质构成的一种特殊结构。人的端粒DNA序列由序列由5向向3方向的方向的（TTAGGG）n重复串联组成。正常情况下，随着细胞分裂，端粒重复串联组成。正常情况下，随着细胞分裂，端粒的进行性缩短并诱发一系列分子事件，最终导致细胞凋亡。端粒的进行性缩短并诱发一系列分子事件，最终导致细胞凋亡。端粒酶是一种能延长端粒末端的核糖蛋白酶，以自身酶是一种能延长端粒末端的核糖蛋白酶，以自身RNA为模板合成为模板合成端粒端粒DNA并
9、整合到染色体末端，使染色体延长，从而延长细胞的并整合到染色体末端，使染色体延长，从而延长细胞的寿命甚至是细胞永生化。绝大多数正常体细胞端粒酶为阴性，普寿命甚至是细胞永生化。绝大多数正常体细胞端粒酶为阴性，普遍认为端粒酶的激活与恶性肿瘤的发生与发展密切相关。端粒酶遍认为端粒酶的激活与恶性肿瘤的发生与发展密切相关。端粒酶的活化涉及一系列基因的表达和调控的变化，从而导致细胞增殖的活化涉及一系列基因的表达和调控的变化，从而导致细胞增殖分化的异常。分化的异常。癌基因与肿瘤的预防诊断和治疗癌基因与肿瘤的预防诊断和治疗（1）环境致病因素抑癌基因变异的积累）环境致病因素抑癌基因变异的积累目前认为，任何一目前认
10、为，任何一种肿瘤都与一种致病微生物相关，并往往伴某一类型的慢性种肿瘤都与一种致病微生物相关，并往往伴某一类型的慢性炎症。去除致病因素，阻断细胞癌变是预防肿瘤发生的关键。炎症。去除致病因素，阻断细胞癌变是预防肿瘤发生的关键。如早期发现如早期发现RNA病毒通过影响宿主细胞的基因而与肿瘤发生病毒通过影响宿主细胞的基因而与肿瘤发生相关，煤焦油中的化学物质作用于相关，煤焦油中的化学物质作用于DNA引起细胞癌变及诱发引起细胞癌变及诱发肿瘤。这些被确定为细胞癌变的重要因素。同时多种肿瘤具肿瘤。这些被确定为细胞癌变的重要因素。同时多种肿瘤具有家族聚集现象，因此遗传易感性是另一个致癌因素。在这有家族聚集现象，因
11、此遗传易感性是另一个致癌因素。在这些因素作用下，癌基因发生突变等导致肿瘤发生。说明肿瘤些因素作用下，癌基因发生突变等导致肿瘤发生。说明肿瘤的发生发展是全身代谢障碍性导致的疾病。肿瘤的发生与发的发生发展是全身代谢障碍性导致的疾病。肿瘤的发生与发展是多基因以多种形式变异积累的病变过程，任何一个单基展是多基因以多种形式变异积累的病变过程，任何一个单基因都不能从基因水平阐明肿瘤发病的分子机制。因都不能从基因水平阐明肿瘤发病的分子机制。（2）细胞癌变的分子模型与肿瘤相关基因的鉴定）细胞癌变的分子模型与肿瘤相关基因的鉴定以胃癌研究为例：胃粘膜慢性病变不同阶段中某些肿瘤相以胃癌研究为例：胃粘膜慢性病变不同阶
12、段中某些肿瘤相关基因变异方式、频率给与病变演化关系。根据对处在不关基因变异方式、频率给与病变演化关系。根据对处在不同阶段的胃粘膜组织的分析（正常胃粘膜、浅表性胃炎、同阶段的胃粘膜组织的分析（正常胃粘膜、浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生、胃癌），初步慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生、胃癌），初步确定在胃癌中检出高频率的基因变异，包括癌基因的扩增、确定在胃癌中检出高频率的基因变异，包括癌基因的扩增、重排、点突变、过量表达。抑癌基因缺失、点突变、过量重排、点突变、过量表达。抑癌基因缺失、点突变、过量表达和基因甲基化改变，此外，在胃粘膜病变异型性增生表达和基因甲基化改变，此外，在胃
13、粘膜病变异型性增生和肠上皮化生中也检测到和肠上皮化生中也检测到p53和和Ras基因的点突变及基因基因的点突变及基因Met、ErbB2、Akt2过量表达。研究表明，基因过量表达多发生过量表达。研究表明，基因过量表达多发生在细胞癌变的起始阶段，基因点突变可能是细胞癌变启动在细胞癌变的起始阶段，基因点突变可能是细胞癌变启动阶段的一个主要事件，这一阶段的可逆性较大；基因扩增、阶段的一个主要事件，这一阶段的可逆性较大；基因扩增、重排多发生在癌变的促进阶段，癌变细胞可能开始向不同重排多发生在癌变的促进阶段，癌变细胞可能开始向不同的生物学行为分化，可能表现出多样性和异质性；基因缺的生物学行为分化，可能表现出
14、多样性和异质性；基因缺失不仅能导致癌变细胞生物学行为的多样化并导致癌变细失不仅能导致癌变细胞生物学行为的多样化并导致癌变细胞增值分化平衡失调，促使肿瘤迅速发展。胞增值分化平衡失调，促使肿瘤迅速发展。癌基因与肿瘤生物学的关键科学问题癌基因与肿瘤生物学的关键科学问题随着基因组、蛋白组学研究的进展和生物芯片技术的随着基因组、蛋白组学研究的进展和生物芯片技术的发展，以下几个科学为题有助于进一步阐明癌基因与肿瘤发展，以下几个科学为题有助于进一步阐明癌基因与肿瘤的关系：的关系：（1）基因与不同肿瘤细胞的信号传导；）基因与不同肿瘤细胞的信号传导；（2）癌基因变异与肿瘤的易感性；）癌基因变异与肿瘤的易感性；(
15、3）癌基因与不同个体肿瘤的生物学特性；）癌基因与不同个体肿瘤的生物学特性；（4）癌基因与机体内外环境平衡调控的分子机制；）癌基因与机体内外环境平衡调控的分子机制；（5）癌基因表达时空性与细胞的更新换代；）癌基因表达时空性与细胞的更新换代；（6）癌基因与肿瘤的临床病理学基因分型。）癌基因与肿瘤的临床病理学基因分型。抑抑癌癌基基因因在肿瘤发生中，有一种通过纯合缺失或失活而引以恶化的基因，在肿瘤发生中，有一种通过纯合缺失或失活而引以恶化的基因，被称之为抑癌基因，这类基因在控制细胞生长、增殖及分化过程中被称之为抑癌基因，这类基因在控制细胞生长、增殖及分化过程中起着十分重要的负调节作用，并能潜在的抑制肿
16、瘤生长，如果其功起着十分重要的负调节作用，并能潜在的抑制肿瘤生长，如果其功能失活或出现基因缺失、突变等异常，可导致能失活或出现基因缺失、突变等异常，可导致细胞恶性转化而发细胞恶性转化而发生肿瘤。生肿瘤。抑癌基因的生物学功能与癌基因相反，他们是机体细胞在增殖、抑癌基因的生物学功能与癌基因相反，他们是机体细胞在增殖、分化、凋亡等生命过程中正和负两类调控信号，癌基因的调控属正分化、凋亡等生命过程中正和负两类调控信号，癌基因的调控属正信号，而抑癌基因的调控属负信号范围。确定一种抑癌基因需要在信号，而抑癌基因的调控属负信号范围。确定一种抑癌基因需要在理论上符合三个条件：理论上符合三个条件：（1）该恶性肿
17、瘤的相应正常组织中该基因必须正常表达；）该恶性肿瘤的相应正常组织中该基因必须正常表达；（2）该恶性肿瘤中这种基因应有功能失活、结构改变、表达缺陷；）该恶性肿瘤中这种基因应有功能失活、结构改变、表达缺陷；（3）将这种基因的野生型导入基因异常的肿瘤细胞内，可部分或全）将这种基因的野生型导入基因异常的肿瘤细胞内，可部分或全部改变其恶性表型。目前研究，还未发现任何一种抑癌基因的异常存部改变其恶性表型。目前研究，还未发现任何一种抑癌基因的异常存在与人类全部肿瘤中，均表现为不同频率的异常。在与人类全部肿瘤中，均表现为不同频率的异常。抑癌基因大多属于一类对细胞增殖产生负调控作用的基因及其产物，抑癌基因大多属
18、于一类对细胞增殖产生负调控作用的基因及其产物，其促癌作用一般是在两个等位基因都丢失或失活后才显示出来，其促癌作用一般是在两个等位基因都丢失或失活后才显示出来，故发现和分离都比较困难。目前已被克隆的抑癌基因和未被可隆故发现和分离都比较困难。目前已被克隆的抑癌基因和未被可隆的候选抑癌基因已达的候选抑癌基因已达30余种，而且新的抑癌基因还在不断出现。余种，而且新的抑癌基因还在不断出现。例如：例如：基因名称基因名称染色体定位染色体定位基因产物定位基因产物定位常见主要肿瘤常见主要肿瘤P5317P13细胞核细胞核多种肿瘤多种肿瘤P169q21细胞核细胞核多种肿瘤多种肿瘤P1919p13。2细胞核细胞核多种
19、肿瘤多种肿瘤Rb13q14细胞核细胞核视网膜母细胞瘤视网膜母细胞瘤APC5q21细胞膜细胞膜结肠癌结肠癌FHIT3p14。2细胞质细胞质消化道肿瘤、肾癌、肺癌等消化道肿瘤、肾癌、肺癌等等。等。以以p53基因为例：基因为例：p53基因是基因研究最为深入的肿瘤基因之一。人类肿瘤中约基因是基因研究最为深入的肿瘤基因之一。人类肿瘤中约50%以上与以上与p53基因变化有关，仅基因变化有关，仅19912002年年1月的相关文献超过月的相关文献超过9800余篇，余篇，p53基因也被基因也被Science杂志评为杂志评为1993年的明星分之子。年的明星分之子。P53基因的结构和生物学特性基因的结构和生物学特性
20、P53基因全长约基因全长约20kb，定位在人类染色体，定位在人类染色体17p13.1，由，由11个外显子组个外显子组成，编码成，编码393个氨基酸组成的个氨基酸组成的53kb的核内磷酸化蛋白，具有蛋白的核内磷酸化蛋白，具有蛋白质质-DNA和蛋白质和蛋白质-蛋白质结合的功能。现已明确蛋白质结合的功能。现已明确p53是细胞生长周是细胞生长周期中负调节因子，与细胞周期的调控、期中负调节因子，与细胞周期的调控、DNA修复、细胞分化、细修复、细胞分化、细胞凋亡等重要的生物学功能有关。胞凋亡等重要的生物学功能有关。P53可正调节一些在细胞增殖周可正调节一些在细胞增殖周期调控过程中起关键作用的基因，包括可调
21、期调控过程中起关键作用的基因，包括可调CDK活性的活性的p21和和DNA损伤导致的细胞生长受阻相关的损伤导致的细胞生长受阻相关的GADD45基因。基因。P53突变可影响与突变可影响与DNA相互作用的关键氨基酸，也可由于相互作用的关键氨基酸，也可由于p53基因突变蛋白发生错误基因突变蛋白发生错误重叠而不能与特定的重叠而不能与特定的DNA识别序列相互结合。识别序列相互结合。P53在细胞内的核心在细胞内的核心作用是介导作用是介导DNA顺伤后的细胞应激反应，维持遗传稳定性。对细顺伤后的细胞应激反应，维持遗传稳定性。对细胞周期的调节主要是在胞周期的调节主要是在G1/S控制点起作用，以决定细胞是否启动控制
22、点起作用，以决定细胞是否启动DNA合成，而在另一些情况下，却决定细胞是否进行程序化死亡。合成，而在另一些情况下，却决定细胞是否进行程序化死亡。P53的失活可使肿瘤细胞进一步出现基因组的不稳定性，突变型的失活可使肿瘤细胞进一步出现基因组的不稳定性，突变型p53则具有癌基因的作用，促进细胞恶性化。则具有癌基因的作用，促进细胞恶性化。P53基因异常与肿瘤基因异常与肿瘤P53基因的缺失或突变已被证实是许多肿瘤发生的原因基因的缺失或突变已被证实是许多肿瘤发生的原因之一。之一。自自1989年以来，人们发现在多种不同类型的肿瘤中发现了年以来，人们发现在多种不同类型的肿瘤中发现了p53基因的突变，其频率可达基
23、因的突变，其频率可达50%60%，其突变的形式可，其突变的形式可表现为点突变、缺失突变、插入突变、移码突变、基因重表现为点突变、缺失突变、插入突变、移码突变、基因重排等。目前已知的突变位点约有排等。目前已知的突变位点约有3500余种，大多数集中于余种，大多数集中于第第58外显子。外显子。P53基因异常的另一个形势为等位基因的缺基因异常的另一个形势为等位基因的缺失，特别是当一个等位基因发生突变时，另一个等位基因失，特别是当一个等位基因发生突变时，另一个等位基因便存在缺失的倾向，这种两个等位基因都缺失的现象在结便存在缺失的倾向，这种两个等位基因都缺失的现象在结肠癌、乳腺癌发生频率较高。另外，肠癌、
24、乳腺癌发生频率较高。另外，p53基因甲基化状态的基因甲基化状态的变化也是较为常见的基因异常。变化也是较为常见的基因异常。P53基因产物的研究进展基因产物的研究进展P53蛋白具有与双链或单链蛋白具有与双链或单链DNA结合的能力，同时还具结合的能力，同时还具有与有与DNA病毒编码产物结合的能力。病毒编码产物结合的能力。P53基因突变和等基因突变和等位基因缺失是导致位基因缺失是导致p53蛋白表达异常的主要原因，由于蛋白表达异常的主要原因，由于突变型突变型p53蛋白的半衰期可延长至蛋白的半衰期可延长至612小时，所以用抗小时，所以用抗p53蛋白的抗体通过免疫组化法检测肿瘤组织，过表达蛋白的抗体通过免疫
25、组化法检测肿瘤组织，过表达常提示常提示p53基因存在错义突变，应用这一方法可为一些基因存在错义突变，应用这一方法可为一些肿瘤如乳腺癌提供临床预后的指标。然而新近的研究表肿瘤如乳腺癌提供临床预后的指标。然而新近的研究表明明,，除突变性，除突变性p53蛋白可以增加在细胞内积聚外，如果蛋白可以增加在细胞内积聚外，如果以某种结合的方式存在，特别是与肿瘤性以某种结合的方式存在，特别是与肿瘤性DNA病毒编码病毒编码产物结合，也可使细胞内产物结合，也可使细胞内p53蛋白集聚，含量增加，导致蛋白集聚，含量增加，导致其正常的负调节功能丧失。其正常的负调节功能丧失。P53基因对细胞内基因转录的调节基因对细胞内基因
26、转录的调节P53除可以与某些病毒癌蛋白结合外，还可以与细胞内的除可以与某些病毒癌蛋白结合外，还可以与细胞内的转录因子结合，起到活化和调节作用，目前已发现转录因子结合，起到活化和调节作用，目前已发现p53激激活转录的基因有活转录的基因有107种，抑制转录活性的基因有种，抑制转录活性的基因有54种，其种，其中关系较为密切且进行较深入研究的相关基因有十几种。中关系较为密切且进行较深入研究的相关基因有十几种。激活转录：激活转录：Bax、Fas/Apol、CyclinG、GADD45、GD-AIF、HIC1、MCK等。等。抑制转录活型：抑制转录活型：P21WAF1/CIP1、BcL2、C-myc、FGF
27、、C-fos、HSP70等。等。P53蛋白在调节细胞周期和基因稳定性方面的研究也有很蛋白在调节细胞周期和基因稳定性方面的研究也有很大进展。在细胞周期中，当大进展。在细胞周期中，当DNA受到损伤后，便停止受到损伤后，便停止DNA的修复，使细胞停留在的修复，使细胞停留在G1期，如损伤的期，如损伤的DNA被修复，则可被修复，则可进入进入S期，如果损伤严重而不能修复，则会出现程序性死亡期，如果损伤严重而不能修复，则会出现程序性死亡。野生型。野生型p53基因对控制细胞周期、维持细胞遗传稳定性具基因对控制细胞周期、维持细胞遗传稳定性具有重要作用，认为可能是通过有重要作用，认为可能是通过GADD45及及Md
28、m2行使调节作用。行使调节作用。因因为为P53的的突突变变与与缺缺失失几几乎乎发发生生于于人人类类绝绝大大多多数数肿肿瘤瘤中中。科科学学杂杂志志将将P53列列为为1993年年“年年度度分分子子”。对对其其它它一一些些肿肿瘤瘤抑抑癌癌基基因因的的研研究究仍在进一步发展中。仍在进一步发展中。（三）、肿瘤的发生（三）、肿瘤的发生单单基基因因引引发发的的肿肿瘤瘤(视视网网膜膜母母细细胞胞瘤瘤)只只占占人人类类肿肿瘤瘤的的少少数数。而而常常见见的的上上皮皮细细胞胞肿肿瘤瘤包包括括乳乳腺腺癌癌、肺肺癌癌及及结结肠肠癌癌则则可可能能起起因因于于多多种种基基因因突突变变的的长长期期积积累累效效应应，而而肿肿瘤
29、瘤的的发发病病率率随随年年龄龄增增加加而而增增加加，环环境境因因素素和和遗遗传传因因素素在在肿肿瘤瘤的的发发病病中中都都有有一一定定作作用用。一一系系列列突突变变的的积积累累影影响响了了细细胞胞正正常常的的监监控控调调节节机机制制，从从而而导导致致肿肿瘤瘤的的发发生生。这这些些突突变变的的不不断断积积累累造造成成从从癌癌前前病病变变至至癌癌症症，以以至至癌癌性性克克隆隆化化异异原原性性增增生生的的晚晚期期肿肿瘤瘤。正正常常结结肠肠上上皮皮细细胞胞逐逐步步转转化化为为恶恶性性转转移移性性结结肠肠癌癌的的过过程程可可能能是是突突变变积积累累系系统统性性研研究究的的范范例例之之一一。在在这这一一研研
30、究究中中发发现现将将结结肠肠癌癌变变的的组组织织学学发发展展过过程程与与癌癌基基因因及及肿肿瘤瘤抑抑癌癌基基因因的的突突变变有有机机地地结结合合起起来来。认认为为这这一一癌癌变变过过程程起起因因于于第第五五对对染染色色体体长长臂臂的的基基因因突突变变（遗遗传传或或散散发发性性的的的的）。从从而而导导致致上上皮皮细细胞胞的的高高增增殖殖状状态态。DNA的的进进一一步步去去甲甲基基化化可可能能导导致致某某个个肿肿瘤瘤细细胞胞抑抑癌癌基基因因的的复复活活，细细胞胞可可能能发发展展至至早早期期腺腺瘤瘤。早早期期腺腺瘤瘤中中的的某某个个细细胞胞随随后后可可能能获获得得RAS基基因因的的突突变变，从从而而
31、克克隆隆化化增增殖殖为为更更大大的的退退变变的的腺腺瘤瘤。进进一一步步丢丢失失第第18对对染染色色体体长长臂臂和和第第17对对染染色色短短臂臂（从从而而使使抑抑癌癌基基因因P53丢丢失失），导导致致癌癌症症的的进进一一步步发发生生及及进进展展。目目前前理理论论认认为为，这这一突变积累过程可能与大多数肿瘤发生有关。一突变积累过程可能与大多数肿瘤发生有关。基因转移与抗肿瘤化疗基因转移与抗肿瘤化疗抗抗肿肿瘤瘤化化疗疗是是有有效效地地控控制制肿肿瘤瘤生生长长的的治治疗疗方方法法之之一一，近近年年来来进进展展相相当当迅迅速速。但但是是，抗抗肿肿瘤瘤化化疗疗一一个个难难以以避避免免的的缺缺点点，是是抗抗肿
32、肿瘤瘤药药物物在在杀杀伤伤肿肿瘤瘤细细胞胞的的同同时时，也也杀杀伤伤了了某某些些正正常常细细胞胞，其其中中特特别别是是正正常常的的造造血血祖祖细细胞胞，导导致致患患者者机机体体免免疫疫力力更更为为低低下下。因因而而，增增加加正正常常造造血血祖祖细细胞胞对对化化疗疗药药物物的的抗抗性性，或或选择性使用特异性杀伤肿瘤细胞的药物，将大大提高抗肿瘤化疗的效果。选择性使用特异性杀伤肿瘤细胞的药物，将大大提高抗肿瘤化疗的效果。（一）、（一）、.基因转移促进成血器官对化疗的抗性基因转移促进成血器官对化疗的抗性增增加加正正常常血血原原细细胞胞对对化化疗疗药药物物的的抗抗性性，有有利利于于提提高高化化疗疗药药物
33、物的的剂剂量量，从从而而可可增增加加化化疗疗的的效效应应。但但是是，由由于于肿肿瘤瘤抗抗药药性性机机理理相相对对复复杂杂，并并且且种种类类多多，很很多多机机理理在在研研究究中中。目目前前研研究究较较多多的的是是多多药药抗抗性性原原理理（MDR）MDR的的基基因因产产物物是是一一个个跨跨膜膜的的蛋蛋白白分分子子，作作为为分分子子泵泵，它它可可以以将将某某些些化化疗疗药药物物泵泵出出细细胞胞外外，从从而而导导致致肿肿瘤瘤的的抗抗药药性性。MDR可可以以抗抗许许多多种种化化疗疗药药物物，利利用用MDR增增加加成成血血原原细细胞胞对对化化疗疗药药物物的的抗抗性性已已在在小小鼠鼠实实验验成成功功。化化疗
34、疗后后，含含MDR基基因因的的周周围围血血细细胞胞从从疗疗前前的的1%增增加加至至7%。临临床床初初步步实实验验已已开开始始。目目前前关关键键的的问问题题是是这这一一方方法法的的临临床床效效果果如如克克？是是不不是是比比自自身身骨骨髓髓移移植植合合并并成成血因子添加的技术更为有效？待进一步研究。血因子添加的技术更为有效？待进一步研究。（二）、原药激活疗法（二）、原药激活疗法（GPAT）选择性杀伤肿瘤细胞的药物的筛选与应用，是抗肿瘤化疗研究选择性杀伤肿瘤细胞的药物的筛选与应用，是抗肿瘤化疗研究的重要课题。利用肿瘤细胞区别与正常细胞的代谢特点，并结的重要课题。利用肿瘤细胞区别与正常细胞的代谢特点，
35、并结合化疗药物在体内代谢的特点。人们可以设计出特异性杀伤肿合化疗药物在体内代谢的特点。人们可以设计出特异性杀伤肿瘤细胞的化疗方案。近年来发展起来的原药激活疗法（瘤细胞的化疗方案。近年来发展起来的原药激活疗法（GPAT）就是利用上述原理并结合基因转移技术的一种化疗方法。就是利用上述原理并结合基因转移技术的一种化疗方法。原药激活疗法（原药激活疗法（GPAT）的理论基础如下：）的理论基础如下：1肿瘤细胞特异性抗原，肿瘤相关抗原，以及癌基因常常作肿瘤细胞特异性抗原，肿瘤相关抗原，以及癌基因常常作为鉴定肿瘤细胞的标志，其自身特异性的表达是涉及肿瘤靶向为鉴定肿瘤细胞的标志，其自身特异性的表达是涉及肿瘤靶向
36、治疗的重要依据；治疗的重要依据；2化疗药物在体内代谢可以产生不同的中间产物，因而根据化疗药物在体内代谢可以产生不同的中间产物，因而根据药物的代谢特点，可以设计肿瘤靶向治疗的方案；药物的代谢特点，可以设计肿瘤靶向治疗的方案；3化化疗疗药药在在体体内内的的代代谢谢常常常常需需要要一一些些酶酶的的残残余余，主主要要是是核核酸酸代代谢谢途途径径的的一一些些酶酶类类，随随着着基基因因转转移移技技术术的的不不断断的的成成熟熟和和应应用用，人人们们将将特特异异性性药药物物代代谢谢酶酶基基因因导导入入肿肿瘤瘤细细胞胞中中，这这种种原原药药激激活活酶酶的的表表达达与与分分泌泌决决定定着着化化疗疗药药（常常是原药
37、）的代谢途径；（常常是原药）的代谢途径；4利利用用正正常常与与肿肿瘤瘤细细胞胞转转录录控控制制的的差差异异，可可以以选选择择性性使使用用这这些些酶酶基基因因的的表达与分泌局限于肿瘤组织，从而减少对正常细胞的不利影响。表达与分泌局限于肿瘤组织，从而减少对正常细胞的不利影响。目目前前已已发发现现许许多多基基因因可可以以作作为为原原药药激激活活酶酶基基因因，其其中中三三个个酶酶被被认认定定是是GPAT方法的模型方法的模型(1)、单单纯纯疱疱疹疹病病毒毒胸胸腺腺嘧嘧啶啶核核苷苷激激酶酶（HSV-tK）其其终终产产物物作作用用是是抑抑制制DNA多聚酶多聚酶。(2)、水痘、水痘-带状疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激
38、酶（带状疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶（VZV-TK）(3)、胞嘧啶脱氨酶、胞嘧啶脱氨酶其终产物作用是抑制其终产物作用是抑制DNA和和RNA的合成的合成肿瘤抑癌基因肿瘤抑癌基因P53治疗肿瘤作用的检测方法治疗肿瘤作用的检测方法（一）、（一）、P53基因基因在在肿肿瘤瘤抑抑癌癌基基因因重重，P53基基因因是是被被最最广广泛泛研研究究的的。P53基基因因未未於於17P染染色色体体，它它的的突突变变或或等等位位丢丢失失在在人人体体恶恶性性肿肿瘤瘤中中最最常常见见。大大多多数数组组织织和和细细胞胞有有P53基基因因表表达达，正正常常人人P53可可以以控控制制细细胞胞循循环环周周期期，调调节节转转录录，DNA
39、复复制制和和诱诱导导细细胞胞程程序序化化死死亡亡。今今年年研研究究发发现现，由由逆逆转转录录病病毒毒携携带带的的P53基基因因转转移移到到人人肺肺癌癌细细胞胞后后，P53表表达达，抑抑制制癌癌细细胞胞生生长长。这这种种用用于于治治疗疗目目的的的的基基因因，必必须须高高效效率率的的传传送送并并转转移移到到瘤瘤细细胞胞，且且能能在在肿肿瘤瘤中中产产生生高高效效率率的的表表达达。经经过过多多种种载载体体的的比比较较，发发现现腺腺病病毒毒具具有有许许多多优优点点，容容易易操操作作，可可获获得得高高滴滴度度的的产产品品109-1012Pfu/ml，感感染染多多种种细细胞胞并并具具有有高高感感染染率率。近
40、近来来应应用用重重组组腺腺病病毒毒做做载载体体，在在气气管管滴滴注注，肌肌肉肉注注射射，周周围围静静脉脉注射和脑内种植等动物实验中，获得很大成功。注射和脑内种植等动物实验中，获得很大成功。（二）、（二）、P53基因抑制肺癌细胞生长的实验方法基因抑制肺癌细胞生长的实验方法1、基因转移效果和表达的检测基因转移效果和表达的检测（1）、感染性测定）、感染性测定（2）、细胞内腺病毒载体和）、细胞内腺病毒载体和P53基因的检测基因的检测-PCR测定法测定法（3）、）、P53基因表达分析基因表达分析-Western蛋白质印迹法蛋白质印迹法2、基因抑制肿瘤生长的检测基因抑制肿瘤生长的检测（1）、细胞生长测定）、细胞生长测定（2）、旁作用分析）、旁作用分析如感染如感染P53基因的细胞，可表达基因的细胞，可表达P53，并可抑制周围细胞，并可抑制周围细胞的生长，则无感染组与感染、的生长，则无感染组与感染、P53基因组混合培养的细胞基因组混合培养的细胞计数会明显低于其他组。计数会明显低于其他组。流式细胞仪流式细胞仪做细胞程序死亡做细胞程序死亡染色计数，观察实验组与对照组细胞死亡程序死亡数目染色计数，观察实验组与对照组细胞死亡程序死亡数目的增减。的增减。小小结结:1.简述癌基因的作用机制简述癌基因的作用机制?2.简述简述p53基因的作用机理基因的作用机理?