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1、 HIV检测的质量控制检测的质量控制 中国中国CDC性艾中心性艾中心 肖肖 瑶瑶 规范化的实验室检测规范化的实验室检测 全国艾滋病检测技术规范，全国艾滋病检测技术规范，全国艾滋病检测技术规范，全国艾滋病检测技术规范，2009 2009修订版修订版修订版修订版艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准实验室安全通用要求实验室安全通用要求实验室安全通用要求实验室安全通用要求临床基因扩增实验室管理暂行办法临床基因扩增实验室管理暂行办法临床基因扩增实验室管理暂行办法临床基因扩增实验室管理暂行办法检测和校准实验室能力认可准则检
2、测和校准实验室能力认可准则检测和校准实验室能力认可准则检测和校准实验室能力认可准则CD4+T CD4+T 淋巴细胞检测质量保证指南淋巴细胞检测质量保证指南淋巴细胞检测质量保证指南淋巴细胞检测质量保证指南HIVHIV1 1病毒载量检测及质量保证指南病毒载量检测及质量保证指南病毒载量检测及质量保证指南病毒载量检测及质量保证指南HCVHCV检测指南？检测指南？检测指南？检测指南？婴幼儿婴幼儿婴幼儿婴幼儿HIVHIV检测指南？检测指南？检测指南？检测指南？02年年 03年年04年年 05年年 06年年 07年年抗体抗体 CD4 病毒载量病毒载量 亚型亚型 BED 耐药耐药 2009 2006 2006
3、全国艾滋病检测实验室质控体系发展全国艾滋病检测实验室质控体系发展20062008质量控制质量控制 质量控制：是指为确保实验工作正常质量控制：是指为确保实验工作正常质量控制：是指为确保实验工作正常质量控制：是指为确保实验工作正常进行而在每一次实验过程中必须采取的各进行而在每一次实验过程中必须采取的各进行而在每一次实验过程中必须采取的各进行而在每一次实验过程中必须采取的各种措施。以保证检验结果达到允许的准确种措施。以保证检验结果达到允许的准确种措施。以保证检验结果达到允许的准确种措施。以保证检验结果达到允许的准确度。度。度。度。实验前质量控制 正确的标本采集和处理正确的标本采集和处理正确及时的运送
4、样品正确及时的运送样品实验前正确地处理和保存样品实验前正确地处理和保存样品实验中质量控制 选择正确的检测方法选择正确的检测方法 质控品的准备质控品的准备 开展质控图质控开展质控图质控Levey-Jennings Levey-Jennings（或（或“即刻法即刻法”质控）。质控）。实验后质量控制实验后准确填写检验结果；实验后准确填写检验结果；及时发出报告；及时发出报告；正确地解释检验结果的临床意义。正确地解释检验结果的临床意义。质量控制质量控制实验前质量控制实验前质量控制正确的标本采集和处理正确的标本采集和处理 检测目的（检测目的（抗体（抗体（BEDBED），），VL VL，CD4 CD4，DB
5、S DBS等）等）抗凝和不抗凝抗凝和不抗凝 数量数量正确及时的运送样品正确及时的运送样品 运输包装运输包装 检测目的检测目的 检测方法检测方法 实验前质量控制实验前质量控制运输采用运输采用WHOWHO提出的三级包装系统提出的三级包装系统 第一层容器：装样品，要求防渗漏第一层容器：装样品，要求防渗漏 第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。层容器。第三层容器：放在一个运输用外层包装内，第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒应易于消毒 观观察察窗窗温温度度计计实验前质量控制实验
6、前质量控制正确地保存样品正确地保存样品 长期长期 （血清，血清，血浆，血浆，全血），短期，不保存全血），短期，不保存 问题：问题：抗体：抗体：短期（短期（？）保存）保存2 28C 8C 。长期（长期（？）度保存）度保存 CD4CD4：全血最长时间（全血最长时间（？）处理好样品怎样保存处理好样品怎样保存？VLVL：（？）分离血浆分离血浆 长期长期 （？）中期（中期（？）短期（短期（？）保存时间保存时间 冻溶不能超过（冻溶不能超过（？）次次实验前质量控制实验前质量控制 选择正确的检测方法选择正确的检测方法 不同检测方法对样品有不同要求不同检测方法对样品有不同要求 检测方法提高准确性检测方法提高准确
7、性 质控品的准备质控品的准备 商用和自制商用和自制 开展质控图质控（开展质控图质控（Levey-Jennings Levey-Jennings，或，或“即刻法即刻法”质质 控）。控）。中部三省中部三省中部三省中部三省2727个个个个VCTVCT点点点点1031010310名咨询者样本检测结果名咨询者样本检测结果名咨询者样本检测结果名咨询者样本检测结果检测策略检测策略检测策略检测策略与与与与WB+WB+WB+WB+符合率符合率符合率符合率漏检（数）漏检（数）漏检（数）漏检（数）RT1RT192.57%92.57%1 1RT2RT291.94%91.94%3 3 RT1+RT2 RT1+RT298
8、.72%98.72%1 1 RT1+RT2+EIA RT1+RT2+EIA99.74%99.74%第四代第四代EIA试剂的使用试剂的使用现场调研时发现，在现场调研时发现，在CDC实验室工作中存在着实验室工作中存在着HIV漏检的潜在危险因素，应引起高度重视。漏检的潜在危险因素，应引起高度重视。许多血站开始开始使用第四代许多血站开始开始使用第四代EIA，CDC仍然用第仍然用第三代三代EIA复检，因此，有导致窗口期漏检的可能。复检，因此，有导致窗口期漏检的可能。建议：确证实验室对来自血站的筛查阳性的样品建议：确证实验室对来自血站的筛查阳性的样品使用第四代试剂进行复检。使用第四代试剂进行复检。HIV
9、发病率研究的方法BED计算发病率与队列观察发病率比较文献列表计算发病率与队列观察发病率比较文献列表 3.14.3155001092IDU中国中国8.88.24247534225IDU中国中国1.13.4447528267FSW中国中国1.76.1.39151乡村居民乡村居民非洲非洲917.3.113594IDUc泰国泰国3.43.5 d2349589123234VA试验试验非洲非洲4.612.219397.19FSW非洲非洲1.361.44.1113.入伍官兵入伍官兵泰国泰国0.5119482216FSW非洲非洲3.12.911271805101111MSMa FSWb北美荷兰北美荷兰队队列列
10、观观察察发发病病率率/100人年人年BED计计算算发发病病率率/100人年人年BED检检测样本测样本来源来源队列血队列血清阳转清阳转人数人数队列随队列随访人数访人数新感染新感染数数BED检检测的样测的样本量本量人群人群地区地区标注：队列中期和随访间隔；样本来自队列筛检人群；与队列目标人群相 同的横断面调查；a:男同性恋人群；b:商业女性工作者；c:静脉吸毒人群 d:该文献给出队列筛检人群由BED-CEIA计算的发病率6.0/100人年 “.”表示数据缺失 实验中质量控制实验中质量控制质控图质控图1、抗体检测、抗体检测 2、抗原检测、抗原检测3、病毒载量检测、病毒载量检测4、免疫表型（、免疫表型
11、（CD4T淋巴细胞）的检测淋巴细胞）的检测EIA检测质控检测质控室内质控室内质控 内部对照：试剂盒提供 外部对照：自己制备或购买 用质控图监测变化趋势试剂盒内部对照试剂盒内部对照试剂盒内部对照质控品阳性和阴性对照血清用于判断每次试剂盒内部对照质控品阳性和阴性对照血清用于判断每次实验的有效性，但不能作为室内质控品使用。每一次检测临实验的有效性，但不能作为室内质控品使用。每一次检测临床样品时，必须有试剂盒内部对照，而且只能在同批号的试床样品时，必须有试剂盒内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。内部对照结果无效，必须重新试验。剂盒中使用。内部对照结果无效，必须重新试验。室内质控品室内质控品为非试
12、剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（Cut-off）的）的23倍为宜。外部质控品的是判断该批临床样品检测的有效性，倍为宜。外部质控品的是判断该批临床样品检测的有效性，因此，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重因此，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。室内质控品可以是商品或实验室自行制备。新试验。室内质控品可以是商品或实验室自行制备。
13、EIA质控图算术平均值算术平均值算术平均值算术平均值X X：至少：至少：至少：至少2020天测得的外部对照血清天测得的外部对照血清天测得的外部对照血清天测得的外部对照血清S/CO S/CO 值结果的平均值值结果的平均值值结果的平均值值结果的平均值标准差标准差标准差标准差S S：是描述样品于均值之间离散程度的指标，：是描述样品于均值之间离散程度的指标，：是描述样品于均值之间离散程度的指标，：是描述样品于均值之间离散程度的指标，是与对照血清是与对照血清是与对照血清是与对照血清S/COS/CO值有关的预测范围。值有关的预测范围。值有关的预测范围。值有关的预测范围。变异系数变异系数变异系数变异系数CV
14、CV：是反映各次：是反映各次：是反映各次：是反映各次 S/CO S/CO值相对于均值离散程值相对于均值离散程值相对于均值离散程值相对于均值离散程 度度度度 的。可以用来衡量检测的重复性和的。可以用来衡量检测的重复性和的。可以用来衡量检测的重复性和的。可以用来衡量检测的重复性和 精密精密精密精密 性。性。性。性。实验中质量控制质控图实验中质量控制质控图XX+SX-SX-2SX-2SX+2SWestgard 标准多标准质控13S标准均值均值+1s+2s+3s-3s-2s-1s1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 22S 标准均值均值+1s+2s+3s-3s-2s-1s1 2 3 4 5 6 7
15、 8 9 10 41S标准均值均值+1s+2s+3s-3s-2s-1s1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 R4S标准均值均值+1s+2s+3s-3s-2s-1s1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CD4T淋巴细胞检测质控淋巴细胞检测质控室内质控：内部对照：厂家提供 外部对照：购买 用质控图监测变化 趋势流式细胞仪检测质控图流式细胞仪检测质控图质控图质控图VL 质控室内质控：每次实验需同时使用试剂盒内的质控品以及一个HIV-1 RNA为5000-15000拷贝/毫升的外部质控品 内部对照：厂家提供 外部对照：自制，个别实验室使用实验后质量控制实验后质量控制实验后准确填写检验结果；实验
16、后准确填写检验结果；及时发出报告；及时发出报告；正确地解释检验结果的临床意义。正确地解释检验结果的临床意义。抗体检测中的问题抗体检测中的问题初筛实验中的假阳性初筛实验中的假阳性血液恶性病变血液恶性病变自身免疫性疾病自身免疫性疾病多发性胆汁型肝硬化多发性胆汁型肝硬化酒精性肝炎酒精性肝炎疫苗接种（流感，乙肝）疫苗接种（流感，乙肝）多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤肾移植或慢性肾衰竭肾移植或慢性肾衰竭疟疾或丝虫病疟疾或丝虫病其他其他抗体检测中的问题抗体检测中的问题初筛实验中的假阴性初筛实验中的假阴性窗口期窗口期免疫移植免疫移植换血输血换血输血恶性肿瘤恶性肿瘤免疫功能丧失（免疫功能丧失（B B细胞功能缺损）细胞
17、功能缺损）其他（试剂或操作原因）其他（试剂或操作原因）影响影响CD4CD4细胞数的因素细胞数的因素1.1.季节性和昼夜差异：如每日最低水平在中午季节性和昼夜差异：如每日最低水平在中午1212点点3030分，峰值在下午分，峰值在下午8 8点点3030分（分（JAIDSJAIDS，19901990，3 3：144144）。）。2.2.肾上腺皮质激素对肾上腺皮质激素对CD4CD4细胞数有较大的影响，短细胞数有较大的影响，短期服用可能使期服用可能使CD4CD4从从900/ul900/ul下降到下降到300/ul.Clin 300/ul.Clin immunopath,1983,28:101).immu
18、nopath,1983,28:101).3.3.合并感染合并感染HTLV-1HTLV-1的病人可能造成的病人可能造成CD4CD4的假性升高的假性升高（Ann Intern Med,1993,119:55).Ann Intern Med,1993,119:55).4.4.急性改变可能由于淋巴细胞在外周循环和骨髓、急性改变可能由于淋巴细胞在外周循环和骨髓、脾及淋巴结中的再分布脾及淋巴结中的再分布(Clin Exp(Clin Exp immunol,1990,80:460)immunol,1990,80:460)。影响影响CD4CD4细胞数的因素细胞数的因素 免疫缺陷状况也可以有辅助性T-淋巴细胞数
19、量减少的结果:-丙球蛋白缺乏症-胸腺发育不全(DiGeorge氏综合症)-严重的联合免疫缺陷影响影响CD4CD4细胞数的因素细胞数的因素检测的仪器PTPT与室内质控与室内质控室内质控是对检验结果的即时性评价，通过对室内质室内质控是对检验结果的即时性评价，通过对室内质室内质控是对检验结果的即时性评价，通过对室内质室内质控是对检验结果的即时性评价，通过对室内质控结果的连续观察，监测实验室检验结果的可靠性。控结果的连续观察，监测实验室检验结果的可靠性。控结果的连续观察，监测实验室检验结果的可靠性。控结果的连续观察，监测实验室检验结果的可靠性。PTPT是对检验结果的回顾性评价，其主要目的是评价和是对检
20、验结果的回顾性评价，其主要目的是评价和是对检验结果的回顾性评价，其主要目的是评价和是对检验结果的回顾性评价，其主要目的是评价和修正实验室检验结果的准确性，并与各参评单位结果修正实验室检验结果的准确性，并与各参评单位结果修正实验室检验结果的准确性，并与各参评单位结果修正实验室检验结果的准确性，并与各参评单位结果比较，了解本室结果的偏倚程度，是发现实验室系统比较，了解本室结果的偏倚程度，是发现实验室系统比较，了解本室结果的偏倚程度，是发现实验室系统比较，了解本室结果的偏倚程度，是发现实验室系统误差的重要手段之一。误差的重要手段之一。误差的重要手段之一。误差的重要手段之一。HIV 抗体检测 诊断依据：金标准？谢 谢