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1、微生物实验技术微生物实验技术第六章第六章微生物控制技术微生物控制技术 微生物控制技术微生物控制技术微生物控制技术微生物控制技术 实验实验6-1 6-1 温度对微生物的影响温度对微生物的影响实验实验6-2 6-2 紫外线对微生物的影响紫外线对微生物的影响实验实验6-3 6-3 渗透压对微生物的影响渗透压对微生物的影响实验实验6-46-4氢离子浓度对微生物生长的影响氢离子浓度对微生物生长的影响实验实验6-5 6-5 化学药剂对微生物的影响化学药剂对微生物的影响 实验实验6-1 6-1 温度对微生物的影响温度对微生物的影响一、实验目的1.了解温度对不同类型微生物生长的影响；2.学习测定微生物最适生长
2、温度的方法。二、实验原理 温度能影响微生物的生长、繁殖和新陈代谢，每种微生物都有它的生长温度范围，每种微生物只能在一定的温度范围内生长，低温微生物最高生长温度不超过20，中温微生物的最高生长温度低于45，而高温微生物能在45以上的温度条件下正常生长。实验实验6-1 6-1 温度对微生物的影响温度对微生物的影响三、实验材料1.菌种 培养24小时的枯草杆菌和大肠杆菌，培养了72小时的黑曲霉或青霉。2.培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂斜面，马铃薯葡萄糖培养基斜面。3.器材 酒精灯，接种针，冰箱，恒温箱。四、实验方法1.接菌按无菌操作方法进行（1）在5支牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上都接种上枯草杆菌，接种时划直线或
3、曲线。实验实验6-1 6-1 温度对微生物的影响温度对微生物的影响（2）在另5支牛肉膏蛋白胨琼脂斜面上都接种上大肠杆菌，接种时划直线或曲线。（3）在5支马铃薯葡萄糖培养基斜面上接种曲霉或青霉，接种时用点接法。2.培养与观察（1）培养将上述接种好的菌种，分别放入0、15、30、37、50五种温度下培养。（2）观察48小时后观察，记录实验结果。五、实验报告记载实验结果，填入表6-1。实验实验6-1 6-1 温度对微生物的影响温度对微生物的影响表6-1 不同类型微生物在不同温度条件下培养的生长情况 菌种015303750枯草杆菌大肠杆菌黑曲霉/青霉注：用“”表示不生长，“+”表示生长一般，“+”表示
4、生长良好。返回 实验实验6-2 6-2 紫外线对微生物的影响紫外线对微生物的影响 一、实验目的1.了解紫外线的杀菌作用原理；2.学习紫外线杀菌试验方法。二、实验原理 紫外线对微生物有强烈的致死作用，波长260nm的紫外线杀菌力最强。其杀菌机制是短波的紫外线引起细胞核酸变性导致微生物死亡。微生物对紫外线的吸收与剂量有关，剂量高低取决于紫外灯的功率、照射距离与照射时间。在本试验中采用15W紫外灯在距灯30cm处通过改变照射时间来处理微生物。紫外线虽有较强的杀菌力，但其穿透力很弱，普通玻璃、薄纸、水层等均能阻止其透过。实验实验6-2 6-2 紫外线对微生物的影响紫外线对微生物的影响 三、实验材料1.
5、菌种 培养2448h的金黄色葡萄球菌，黏质沙雷氏菌。2.培养基 牛肉膏蛋白胨培养基。3.器材 无菌水，无菌平皿，1mL无菌吸管，玻璃刮铲、灭菌五角星形图案纸(牛皮纸或黑纸)，紫外灯箱。四、实验方法1.制平板 取无菌平皿6套，将已熔化并冷却至50左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中，使其冷凝成平板。实验实验6-2 6-2 紫外线对微生物的影响紫外线对微生物的影响 2.菌悬液制备 取试管无菌水2支，以无菌操作法分别取金黄色葡萄球菌和黏质沙雷氏菌各2环，接入无菌水中充分摇匀，制成菌悬液。3.接种 将已倒入培养基的平皿分为2组，每组3个，一组接金黄色葡萄球菌，一组接沙雷氏菌，用无菌吸管吸
6、取已制好的菌悬液各0.1mL，分别接种于二组平板上，用无菌玻璃刮铲均匀涂布，随即用无菌镊子夹取无菌图案纸一张，小心放在接种好的平皿中央(图6-1)。实验实验6-2 6-2 紫外线对微生物的影响紫外线对微生物的影响 图6-1 检查紫外线对微生物生长的影响试验方法 1.图案纸 2.细菌生长圈 3.无菌生长区 实验实验6-2 6-2 紫外线对微生物的影响紫外线对微生物的影响 4.分组 将接种的六个平皿分为三组，每组一个金黄色葡萄球菌，一个黏质沙雷氏菌。5.紫外线处理 将紫外灯先开灯预热23min。再将上述平皿置于紫外灯下，打开皿盖，在30cm距离处照射。一组照1min，1组照5min，l组照l0mi
7、n，小心地取下图案纸，盖上皿盖。用黑布或厚纸遮盖，送入培养室内。6.培养 将平皿于2830温度下培养48h。五、实验报告 取出平皿观察分析平板上细菌生长的状况，并绘图表示。返回 实验实验6-3 6-3 渗透压对微生物的影响渗透压对微生物的影响 一、实验目的了解渗透压对微生物生长的影响。二、实验原理 在等渗溶液中，微生物正常生长繁殖；在高渗溶液中，细胞失水收缩，而水分为微生物生理生化反应所必需，失水会抑制其生长繁殖；在低渗溶液中，细胞吸水膨胀，大多数微生物具有较为坚韧的细胞壁，而且个体较小，因而在低渗溶液中一般不会像无细胞壁的细胞那样容易发生裂解，具有细胞壁的微生物受低渗透压的影响不大。实验实验
8、6-3 6-3 渗透压对微生物的影响渗透压对微生物的影响 三、实验材料1.菌种 金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，盐沼盐杆菌。2.培养基 分别含0.85、5、10、15及25NaCl的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。3.仪器或 无菌平皿，接种环等。四、实验方法1.将含不同浓度NaCl的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化、倒平板。2.在已凝固的平板皿底用记号笔划成三部分，分别标记上述三种菌名。实验实验6-3 6-3 渗透压对微生物的影响渗透压对微生物的影响 3.将上述平板置于28温室中，4 d后观察并记录含不同浓度NaCl的平板上三种菌的生长状况。五、实验报告1.结果分析将实验结果填入表6-2。2.举例几个在日常生活中
9、人们利用渗透压来抑制微生物生长的例子。实验实验6-3 6-3 渗透压对微生物的影响渗透压对微生物的影响 表6-2 不同类型微生物在不同NaCl浓度中的生长情况 菌名NaCl浓度%0.855101525金黄色葡萄球菌大肠杆菌盐沼盐杆菌注：用“”表示不生长，“+”表示生长一般，“”表示生长良好。返回 实验实验6-46-4氢离子浓度对微生物生长的影响氢离子浓度对微生物生长的影响 一、实验目的1.了解氢离子浓度对微生物生长发育的影响。2.学习测定微生物生长最适pH的方法二、实验原理 微生物生长繁殖需要一定的酸碱度即pH环境，H浓度影响微生物对营养物质的吸收和生化反应。一般细菌适于中性环境，放线菌适于偏
10、碱性环境，酵母菌和霉菌则适于在微酸性环境中生长，若超出其适应的范围，微生物生长将受到抑制或不能生长。实验实验6-46-4氢离子浓度对微生物生长的影响氢离子浓度对微生物生长的影响 三、实验材料1.菌种 培养24h大肠杆菌斜面菌种，培养5d的吸水链霉菌5102斜面菌种，培养3d的黑曲霉斜面菌种。2.培养基和试剂 牛肉膏蛋白胨培养液，4.14%K2HP04，1.22%硼酸，0.8%NaOH，1.92%柠檬酸，见附录。3.其他材料 无菌水，无菌吸管(1mL)，接种环。实验实验6-46-4氢离子浓度对微生物生长的影响氢离子浓度对微生物生长的影响 四、实验方法1.培养基制备 分组按表6-3配方配制不同pH
11、的培养基，并用pH计校正pH，然后分装入试管中，每管装量56mL，0.1Mpa灭菌30min备用。2.接种培养 取pH不同的培养基三组用接种环按无菌操作法于试管中分别接入大肠杆菌、吸水链霉菌、黑曲霉，在37下培养48h。3.检查结果 取出培养物，观察并记录实验结果。实验实验6-46-4氢离子浓度对微生物生长的影响氢离子浓度对微生物生长的影响 表6-3 不同pH培养基配制表 试管序号K2HP04(mL)柠檬酸(mL)NaOH(mL)硼酸(mL)牛肉膏蛋白胨培养液(mL)总量(mL)PH(近似值)10.31.78102.820.91.18104.431.10.98105.241.30.78106.
12、051.50.58106.861.90.18107.670.31.78108.480.71.38109.291.01.081010.0 实验实验6-46-4氢离子浓度对微生物生长的影响氢离子浓度对微生物生长的影响 表6-4 不同类型微生物在不同pH中的生长情况 pH2.84.45.26.06.87.68.49.210吸水链霉素黑曲霉大肠杆菌注：用“”表示不生长，“+”表示生长一般，“”表示生长良好。五、实验报告 将实验结果填入表6-4中。返回 实验实验6-5 6-5 化学药剂对微生物的影响化学药剂对微生物的影响 一、实验目的 了解化学药剂的杀菌和消毒作用，掌握常用消毒剂的浓度和使用方法。二、实
13、验原理 一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用。因此，在实验室内和生产上常利用某些化学药剂进行杀菌或消毒。不同的药剂或同一药剂对不同微生物的杀菌能力不同。此外，药剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不一样。使用前需进行试验，灵活选择。实验实验6-5 6-5 化学药剂对微生物的影响化学药剂对微生物的影响 三、实验材料1.菌种 培养2448h的大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草杆菌斜面菌种。2.培养基和试剂 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，1g/L HgCl2，200g/L链霉素，200g/L青霉素，50g/L石炭酸。3.器材 无菌平皿，无菌水，无菌吸管(1mL)，直径0.6cm的无菌圆形滤纸片。实验
14、实验6-5 6-5 化学药剂对微生物的影响化学药剂对微生物的影响 四、实验方法1.制平板：取无菌平皿三套，将已熔化并冷却至50左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入平皿中，使冷凝成平板。2.制备菌悬液：取无菌水3支，用接种环分别取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌各12环接入无菌水中，充分混匀，制成菌悬液。3.接种：用无菌吸管分别吸取已制好的菌悬液0.1 mL接种于平板上，用无菌玻璃刮铲涂匀。注意做好标记。4.浸药：将灭菌滤纸片分别浸入四种供试药剂中。实验实验6-5 6-5 化学药剂对微生物的影响化学药剂对微生物的影响 5.加药剂：用无菌镊子夹取浸药滤纸片(注意把药液沥干)，分别平铺于同一含菌平板上，注意药剂之间勿互相沾染(图6-2)。并在平皿背面做好标记。6.培养：将平皿置于28下培养4872h后观察结果。图6-2 药剂抑制实验 1.滤纸片 2.抑菌圈 实验实验6-5 6-5 化学药剂对微生物的影响化学药剂对微生物的影响 五、实验报告 取出培养平皿，观察滤纸片周围有无抑菌圈产生，并测量抑菌圈的大小，将测量结果填入表6-5中。表6-5 不同化学药剂对细菌的抑制效果（抑菌圈直径cm）HgCl2(1g/L)链霉素（200）青霉素（200细菌 消毒剂 ）石碳酸(50g/L)大肠杆菌 金黄色葡萄球菌枯草杆菌