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1、ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 1248.12-2016 玉米抗病虫性鉴定技术规范第12部分:瘤黑粉病Technical specification on evaluation of maize resistance to pests一Part 12 Common smut 2016-0-26发布2017-04-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T 1248.12-2016 目U吕学叫毕T3na 业农国中所L院中所以M棚旷础术割据M1叶，业业分农农部国省个fu晓所Hd李为究所3分草研究阳起护研酌加则保护1相比L物保呜棚。阳五植物晓分山山荆院括王政部
2、卸出学院i鉴口提恻悻世蛐际际际晰-低。附却明加时孙，.，病病;腐腐腐叶病粉病8J管省农洁抗脯病穗叶螺茎茎在瞒抱斑黑缩江1子吼叫归石忙景斑黑花米霉抱抱丰弯灰瘤粗1T种、川丰人主/大小丝矮玉腐镰镰纹、阳分A川A川A川A川A川八怔八如丛川喃喃喃喃川WM靴阮醉部部部部部部部部部01231照农草究要1123456789Ill-为按由起研主T第第第第第第第第第第第第第分分分分学分盯一一一一一一一一一一一一一部部部部科部一一一一一一一一一一一一一本本本本物本作院I 1 范围玉米抗病虫性鉴定技术规范第12部分:瘤黑粉病本部分规定了玉米抗瘤黑粉病鉴定技术方法和抗性评价标准。NY/T 1248.12-2016 本
3、部分仅适用于栽培玉米(Zeamays L.)自交系、杂交种、群体、开放授粉品种以及野生玉米和玉米近缘种对瘤黑粉病抗性的田间鉴定和评价。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1 瘤黑粉病common smut 由玉蜀泰黑粉菌Ust山gomaydis(DC.)CordaJ侵染、引起植株叶片、叶鞠、苞叶、气生根、茎轩、雄穗、雌穗等幼嫩部位产生大小不等的菌瘦为特征的玉米病害。3 瘤黑粉菌接种体制备3.1 病原物分离对发病植株的菌瘦中的病菌进行形态学鉴定，确认为黑粉菌后，采集冬抱子，通过表面消毒后，置于PDA平板培养基中进行分离，并对分离物进行纯化培养和致病性测定。3.2 病原物鉴定3.2.1
4、病原物种的鉴定对用作抗病性鉴定接种体的病原物应进行种的鉴定，依据形态学特征确定病原物的种级分类地位(参见附录A)。3.2.2 病原物遗传交配型的鉴定采用不同的2个菌株在马铃薯荒糖琼脂(Potatosucrose agar,PSA)培养基平板上混合培养，可产生双核菌丝体的成对菌株视为不同遗传交配型。3.3 接种体繁殖接种体繁殖方法为:将保存的菌株转至马铃薯煎糖液体培养基中，在270C、180r/min条件下振荡培养3d，即产生大量担抱子，可用于接种。4 抗病性鉴定圃4.1 鉴定圃设置鉴定圃具备良好的自然发病环境，能够进行田间灌溉和排涝，或具备叶面喷雾设施。4.2 鉴定设计鉴定材料随机排列或顺序排
5、列。鉴定选育品种时，每份材料种植2行，每15份品种设1组已知高抗、高感对照材料(见附录B);鉴定种质资源时，每份材料种植l行，每50份种质设l组己知高抗、高感对照材料。鉴定小区两端应种植不少于2行的保护行。4.3 种植要求鉴定材料播种时间与大田生产相同。鉴定小区行长5m，行距与植株密度根据各区域品种试验要求确定，条播或穴播。对选育品种进行抗性鉴定时，双行留苗二三50株;对种质资源等材料进行抗性鉴定NY/T 1248.12-2016 时，单行留苗二三25株。土壤肥力水平和耕作管理与大田生产相同。5 接种5.1 接种时期接种时期为玉米6叶7叶期。接种选择在上午或阴天时进行，同批次鉴定材料应在同一天
6、完成。5.2 接种方法采用注射法接种。将不同地点来源的2组不同遗传交配型的菌株分别繁殖后等体积混合，经过滤后将担抱子悬浮液稀释至浓度为1.0 X 106个扣血7曲坊种悬浮液，加入0.01%的吐温20(V/V)。用连动注射器从幼苗茎侧方刺人5.3 接种时的田间管理接种后进行灌溉，操作应在同一天内完成6 病情调查7 抗性评价7.1 鉴定有效性判别当设置的高感对照材7.2 抗性评价标准依据鉴定材料群体发病程度(表2病情级别l 高度抗病HighlyrcsiSlanl(高抗HR)3 抗病Resislant(抗R)3 中度抗病Moderalelyresistanl(中抗MR)7 感病Susceptiblc
7、(感S)9 高度感病Highlysusceptible(高感HS)7.3 重复鉴定抗性若鉴定材料初次鉴定时表现为高度抗病、抗病、中度抗病，应在第二年进行重复鉴定。2 NY/T 1248.12-2016 7.4 抗性评价对初次鉴定结果和重复鉴定结果进行比较，以记载的最高病情级别为最终鉴定结果，并依此对鉴定材料进行抗性评价(见附录B)。3 NY/T 1248.12-2016 附录A(资料性附录)玉米瘤黑粉病病原菌A.1 学名和形态描述玉蜀泰黑粉菌Ust山gomaydis(OC.)CordaJ。玉蜀泰黑粉菌:冬子包子为二倍体细胞，球形或椭圆形，暗褐色，壁厚，壁表面有细刺状凸起，直径为8m12m。冬子
8、包子萌发时，伴随减数分裂形成具有4个细胞的担子(又名先菌丝)，随后每个细胞顶生或侧生形成梭形、无色的担子包子。担子包子侵染玉米幼苗或老植株的生长组织，萌发后形成侵入丝或以芽殖的方式生出次生担子包子，次生担子包子也能萌发形成侵人丝侵入寄主。担子、担子包子、侵入丝均为单倍体。单倍体在PSA培养基上培养时形成酵母状菌落，白色、乳白色或褐色，表面有榴皱，边缘光滑，长时间培养后，菌落表面出现纤细的绒毛状白色稀疏菌丝，为担子包子萌发后形成。玉蜀泰黑粉菌为异宗配合真菌，不同遗传型的单倍体细胞融合形成双核菌丝，能在寄主体内迅速发育，刺激寄主组织形成不规则肿瘤状菌瘦，然后通过细胞核融合，产生二倍体的冬袍子。黑粉
9、菌形态分类学论著见参考文献。A.2 瘤黑粉菌的培养和保存马铃薯庶糖琼脂培养基(Potatosucrose agar，PSA):马铃薯200 g，照糖20g，琼脂18g20 g，蒸馆水1000mL,121.C高压灭菌30min后待用。i亥培养基用于瘤黑粉菌的培养，培养温度为25.C30.C;保存采用斜面试管，保存温度为一20.C，也可以加人10%甘油保存液后置于一80.C超低温冰箱中保存。4 NY/T 1248.12-2016 附录B(规范性附录)鉴定结果汇总和对照用自交系B.1 鉴定结果汇总表格玉米抗瘤黑粉病鉴定结果整理后填人鉴定结果表格，见表B.1。表B.l一一一年玉米抗瘤黑粉病鉴定结果表编
10、号品种/种质名称来源发病率%)抗性评价注1:鉴定地点。注2.接种病原菌分离物编号。注3:接种日期。调查日期。鉴定技术负责人(签字):B.2 抗病对照自交系齐319，对瘤黑粉病表现稳定的高度抗病(Highlyresistant,H邸，选自美国玉米杂交种P78599。B.3 感病对照自交系掖478，对瘤黑粉病表现稳定的高度感病(Highlysusceptible,HS)，选自玉米自交系U8112和沈5003的组配后代。D NY/T 1248.12-2016 参考文献lJ郭林，2000.中国真菌志:第12卷黑粉菌科M.北京:科学出版社2JBanuell F.Hcrskowitz 1,1996.Dis
11、cretc developmcntal stages during leliospore forrnation in the corn smut fungus.Uslago maydisJ.Development(l22):296S-2976 3JReid L.M.,Zhu X.y,2005.Scrccning corn for rcsistancc 10 common discascs in CanadaR.Agricuture and Agri Food Cananda 4JNuberg 1.,Allen R.N.Colless j.M,1986.Ficld reactions of ma
12、ize varieties commonly grown in Australia to boil smut caused by Ustilago zaea j.Auslralia journal of Experimental Agriculture(26):481-488 SJdu Toit L.j.Pataky j.K,1999.Variation associated with silk channcl inoculation for common smut of sweel corn J.Plant Disease(83):727-732 6JPataky j.K.Nankam C.Kerns M.R.199S.Evaluation of a silk-inoculation techniquc 10 diffcrentiate reactions of sweet corn hybrids to common smutJ.Phy1Opathology(8曰:1323-1328 6