《维生素C的定量测定.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《维生素C的定量测定.ppt（20页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、维生素C的定量测定 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望定量测定维生素C的方法l一一.氧化还原法氧化还原法l1.直接碘量法直接碘量法l2.2,6-二氯酚靛酚滴定法二氯酚靛酚滴定法l二二.分光光度法分光光度法l1.紫外快速测定法紫外快速测定法l2.2,4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法l3.高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸l三三.光电比浊法光电比浊法l四四.电化学法电化学法l五五.荧光分析法荧光分析法l1.抗坏铁酸的微量荧光测定法抗坏
2、铁酸的微量荧光测定法l2.抗坏铁酸总量的荧光测定抗坏铁酸总量的荧光测定l直接碘量法定量测定维生素直接碘量法定量测定维生素C的原理的原理l维生素维生素c分子中含有烯二醇基，易被分子中含有烯二醇基，易被I2定量氧化成含二定量氧化成含二酮基的脱氢维生酮基的脱氢维生c，故可用直接碘量法测定定含量。，故可用直接碘量法测定定含量。l从上式可以看出，在碱性条件下有利于反应向右进行，从上式可以看出，在碱性条件下有利于反应向右进行，但维生素但维生素c的还原性很强，在碱性环境中易被空气中的还原性很强，在碱性环境中易被空气中的的O2氧化，故滴定时加一些氧化，故滴定时加一些HAc使滴定在弱酸性溶液使滴定在弱酸性溶液中
3、进行，以减少维被空气氧化所造成的误差。中进行，以减少维被空气氧化所造成的误差。2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C的原理 维生素维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型，还原型抗坏血酸能还原染料脱氢型，还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，），本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。一旦溶液。一旦溶液中的维生素中的维生素C已全部被氧化时，则滴下的染料立即使已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从
4、无色变成微红色时溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。滴定终点。CCCCCCHOHHOHOOHOHO2NOHClClO+CCCCCCOHOHOOHOHO2NOHClClO还原型抗坏血酸还原型抗坏血酸氧化型脱氢抗坏血酸氧化型脱氢抗坏血酸2 2，6 6二氯酚靛酚（红色）二氯酚靛酚（红色）还原型还原型2 2，6 6二氯酚靛酚（无色）二氯酚靛酚（无色）O蓝色)OH+NClClOHH 维生素C的2，6二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定
5、法，是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量。紫外快速测定法紫外快速测定法定量测定维生素C的原理光电比浊法的原理l在酸性介质中,抗坏铁酸与亚硒酸(H2SeO3)能定量地进行氧化还原反应.1mol的抗铁酸能将2mol的亚硒酸还原成硒.在一定条件下,生成的元素硒在溶液中形成稳定的悬浊液.当抗铁酸的浓度在0-4mg/25-50ml的范围内,该溶液生成的浊度与抗坏铁酸的含量成正比.将试液置分光光度计上测其浊度可以定量地测定抗坏铁酸.荧光分析法的原理 用酸洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式脱氢抗坏用酸
6、洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式脱氢抗坏铁酸铁酸,然后与邻苯二胺缩合成一种荧光性化合然后与邻苯二胺缩合成一种荧光性化合物物.样品中其它荧光杂质的干扰可以通过向氧样品中其它荧光杂质的干扰可以通过向氧化后的样品中加入硼酸化后的样品中加入硼酸,使脱氢抗坏铁酸形成使脱氢抗坏铁酸形成硼酸脱氢抗坏铁酸的络合物硼酸脱氢抗坏铁酸的络合物,它不与邻二苯胺它不与邻二苯胺生成荧光化合物生成荧光化合物.这样可以测定其它荧光杂质这样可以测定其它荧光杂质的空白荧光强度而加以校正的空白荧光强度而加以校正.碘量法定量测定维生素Cl（1）配制）配制0.05moll-1I2标准溶液标准溶液称取称取6.5gI2和和12.5gkI,l置
7、于小研钵中置于小研钵中,加水少许加水少许,研磨至全部溶解后移入棕色瓶研磨至全部溶解后移入棕色瓶中中,加水加水500ml,摇匀后避光阴凉处放置过夜。摇匀后避光阴凉处放置过夜。l（2）标定）标定I2溶液浓度溶液浓度吸取吸取25.00mlI2溶液置于溶液置于250ml锥锥形瓶中形瓶中,加水加水50ml,用标定过的用标定过的Na2S2O3标准溶液滴定标准溶液滴定至浅黄色后至浅黄色后,加入加入0.2%淀粉溶液淀粉溶液2-4滴滴,继续用继续用Na2S2O3溶液滴定至蓝色恰好退去溶液滴定至蓝色恰好退去,根据下式计算根据下式计算I2溶液的浓度。溶液的浓度。（3）维生素）维生素c含量的测定含量的测定准确称取约准
8、确称取约0.2g维生维生素素c,放入锥形瓶中放入锥形瓶中,加入新蒸过的蒸馏水加入新蒸过的蒸馏水50ml2moll-1HAc使其溶解使其溶解,加淀粉指示剂加淀粉指示剂1ml,立即用立即用I2标准溶液滴定至浅蓝色标准溶液滴定至浅蓝色,按下式计算维生素按下式计算维生素c的的含量含量 l维生素C含量=c(I2)*V(I2)*M(维生素C)/S样二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素Cl一、试剂一、试剂l2%草酸溶液草酸溶液:草酸草酸2g溶于溶于100ml蒸馏水中。蒸馏水中。l1%草酸溶液草酸溶液:草酸草酸1g溶于溶于100ml蒸馏水中。蒸馏水中。l标准抗坏血酸溶液（标准抗坏血酸溶
9、液（1mg/ml）:准确称取准确称取100mg纯抗坏血酸纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并草酸溶液中，并稀释至稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。l0.1%2,6-二氯酚靛酚溶液二氯酚靛酚溶液:250mg2,6-二氯酚靛酚溶于二氯酚靛酚溶于150ml含有含有52mgNaHCO3的热水中，冷却后加水稀释至的热水中，冷却后加水稀释至250ml，贮于棕色瓶中冷藏（，贮于棕色瓶中冷藏（4）约可保存一周。每次临用时，以标）约可保存一周。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。准抗坏血
10、酸溶液标定。l二、材料二、材料l苹果、卷心菜等。苹果、卷心菜等。l三、器材三、器材l锥形瓶（锥形瓶（100ml），组织捣碎器，吸量管（），组织捣碎器，吸量管（10ml），漏斗，滤纸，），漏斗，滤纸，微量滴定管（微量滴定管（5ml），容量瓶（），容量瓶（100ml，250ml）。）。l四、提取四、提取l水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取面水分。然后称取20g，加入，加入20ml2%草酸，用研钵研磨，四层纱布草酸，用研钵研磨，四层纱布过滤，滤液备用。纱布可用少量过滤，滤液备用。纱布可用少量2%草酸洗几次，
11、合并滤液，滤液总草酸洗几次，合并滤液，滤液总体积定容至体积定容至50ml。l五、标准液滴定五、标准液滴定l准确吸取标准抗坏血酸溶液准确吸取标准抗坏血酸溶液1ml置置100ml锥形瓶中，加锥形瓶中，加9ml1%草酸，草酸，用微量滴定管以用微量滴定管以0.1%2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫染料相当于多少毫克抗坏血酸（取克抗坏血酸（取10ml1%草酸作空白对照，按以上方法滴定）。草酸作空白对照，按以上方法滴定）。l六、样品滴定六、样品滴定l准确吸取
12、滤液两份，每份准确吸取滤液两份，每份10ml,分别放入分别放入2个锥形瓶内，个锥形瓶内，滴定方法同前。另取滴定方法同前。另取10ml1%草酸作空白对照滴定。草酸作空白对照滴定。ll七、计算七、计算l式中：式中：VA为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数；为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数；lVB为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数；为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数；lC为样品提取液的总毫升数；为样品提取液的总毫升数；lD为滴定时所取的样品提取液毫升数；为滴定时所取的样品提取液毫升数；lT为为1ml染料能氧化抗坏血酸毫克数染料能氧化抗坏血酸毫克数;lW为待测样品的重量（为待测样品的重量（g）
13、。）。紫外快速测定法定量测定维生素紫外快速测定法定量测定维生素Cl一、材料、仪器与试剂一、材料、仪器与试剂l（一）材料：各种水果蔬菜、果汁及饮料。（一）材料：各种水果蔬菜、果汁及饮料。l（二）仪器：紫外分光光度计、离心机、分析天平、容量瓶（二）仪器：紫外分光光度计、离心机、分析天平、容量瓶（10ml,25ml）、移液管（）、移液管（0.5ml，1.0ml）、吸管、研钵。）、吸管、研钵。l（三）试剂（三）试剂l110%盐酸：取浓盐酸盐酸：取浓盐酸133ml，加水稀释至，加水稀释至500ml。l21%盐酸：取浓盐酸盐酸：取浓盐酸22ml，加水稀释至，加水稀释至100ml。l31mol/L氢氧化钠溶
14、液：称取氢氧化钠溶液：称取40gNaOH，加蒸馏水，不断，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至搅拌至溶解，然后定容至1000ml。l二、操作步骤二、操作步骤l（一）标准曲线的制作（一）标准曲线的制作l1抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸抗坏血酸10mg，加，加2ml10%盐酸，加蒸馏水定容至盐酸，加蒸馏水定容至100ml，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100ug/ml。l2.标准曲线的绘制标准曲线的绘制12345678标准抗坏血酸溶液标准抗坏血酸溶液加入体积（加入体积（ml）0.10.20.30.40.50.
15、60.81.09.99.89.79.69.59.49.29.0总体积（总体积（ml）10.010.010.010.010.010.010.010.0抗坏血酸溶液浓度抗坏血酸溶液浓度（ug/ml）1.02.03.04.05.06.08.010.0l3消光值的测定：以蒸馏水为空的，在消光值的测定：以蒸馏水为空的，在243nm处处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（的含量（ug）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。作标准曲线。ll二）样品的测定二）样品的测定1样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、
16、样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取混匀。称取5.00g于研体中，加入于研体中，加入2-5ml1%盐酸，匀盐酸，匀浆，转移到浆，转移到25ml容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄l清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（离心（10000g,10min）来消除。）来消除。l2样品的测定：取样品的测定：取0.1-0.2ml提取液，放入盛有提取液，放入盛有0.2-0.4ml10%盐酸的盐酸的10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在度后摇匀。以蒸馏水为空白
17、，在243nm处测定其消光处测定其消光值。值。l3待测碱处理液的制备：分别吸取待测碱处理液的制备：分别吸取0.1-0.2ml提取提取液，液，2ml蒸馏水和蒸馏水和0.6-0.8ml1mol/L氢氧化钠溶液依次氢氧化钠溶液依次放入放入10ml容量瓶中，混匀，容量瓶中，混匀，15min后加入后加入0.6-0.8ml10%盐酸，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。盐酸，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在在243nm处测定其消光值。处测定其消光值。l4由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中维生素算出样品中维生素C的
18、含量。的含量。l5也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，计算出样品的维生素查标准曲线，计算出样品的维生素C的含量。的含量。l四、计算四、计算lV总总lVc的含量（的含量（g/g）=lV1W总总l式中：式中：从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（g）lV1测消光值时吸取样品溶液的体积（测消光值时吸取样品溶液的体积（ml）lV总总样品定容体积（样品定容体积（ml）lW总总称样重量（称样重量（g）关于维生素C的常识l 维生素维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少是人类营养中最重要的维
19、生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbicacid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。学致癌物的阻断作用。l维生素维生素C是具有是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。l 补补维维生生素素C!要要不不就就这这样样了了!谢谢欣赏主要参考资料主要参考资料维生素及其分析方法维生素及其分析方法聂洪勇等著聂洪勇等著上海：上海科学技术文献出版社上海：上海科学技术文献出版社维生素手册维生素手册英英)J.玛克斯著；郑昌学等译玛克斯著；郑昌学等译北京：科学普及出版社北京：科学普及出版社癌与维生素癌与维生素C(美美)鲍林鲍林,(美美)卡梅伦著；王艳茹卡梅伦著；王艳茹,王文仲译王文仲译北京：科学普及出版社北京：科学普及出版社http:/