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1、 1 1）学习和掌握用）学习和掌握用2,6-2,6-二氯酚靛酚滴定法二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中抗坏血酸含量的原理与方法。测定植物材料中抗坏血酸含量的原理与方法。2 2）学习和掌握滴定法的基本操作过程；）学习和掌握滴定法的基本操作过程；3 3）了解并掌握绿豆芽中维生素）了解并掌握绿豆芽中维生素C C的含量测定。的含量测定。实验目的实验目的第1页/共17页实验原理实验原理 VcVc是人类营养中最重要的维生素之一，它与是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。势和有关酶系统的活性。VcVc能促进细
2、胞间质的合能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏成，如果人体缺乏VcVc时则会出现坏血病，因而时则会出现坏血病，因而VcVc又称为又称为抗坏血酸抗坏血酸。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。及其加工工艺成效的重要指标。第2页/共17页VcVc具具有有很很强强的的还还原原性性。它它可可分分为为还还原原型型和
3、和脱脱氢氢型型。金金属属铜铜和和酶酶（抗抗坏坏血血酸酸氧氧化化酶酶）可可以以催催化化VcVc氧氧化化为为脱脱氢氢型型。根根据据它它具具有有的的还还原原性性质质可测定其含量。可测定其含量。2,6-2,6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚是是一一种种染染料料，在在碱碱性性溶溶液液中中呈呈蓝蓝色色，在在酸酸性性溶溶液液中中呈呈红红色色。抗抗坏坏血血酸酸具具有强还原性，能使有强还原性，能使2,6-2,6-二氯酚靛酚还原为无色。二氯酚靛酚还原为无色。第3页/共17页当当用用2,6-2,6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚滴滴定定含含有有抗抗坏坏血血酸酸的的酸酸性性溶溶液液时时，滴滴下下的的2,6-2,6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚被
4、被还还原原成成无无色色；当当溶溶液液中中的的抗抗坏坏血血酸酸全全部部被被氧氧化化成成脱脱氢氢抗抗坏坏血血酸酸时时，滴滴入入的的2,6-2,6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚立立即即使使溶溶液液呈呈现现红红色色。因因此此用用这这种种染染料料滴滴定定抗抗坏坏血血酸酸至至溶溶液液呈呈淡淡红红色色，即即为为滴滴定定终终点点（表表示示溶溶液液中中的的c c刚刚刚刚全全部部被被氧氧化化），如如无无其其它它杂杂质质干干扰扰，样样品品提提取取液液所所还还原原的的标标准准染染料料量量与与样样品品中中所所含含的的还还原原型型抗抗坏坏血血酸酸量量成成正正比比。根根据据染染料料消消耗耗量量即即可可计计算算出出样样品品中中还还原
5、原型型抗抗坏坏血酸的含量。血酸的含量。第4页/共17页还原还原型型氧氧化化型型第5页/共17页实验材料、主要仪器和试剂实验材料、主要仪器和试剂实验材料实验材料：柚子柚子仪器仪器：天平、研钵、容量瓶、吸管、天平、研钵、容量瓶、吸管、锥形瓶、微量滴定管、纱布锥形瓶、微量滴定管、纱布试剂试剂：2 2草酸、草酸、1 1草酸草酸标准抗坏血酸溶液（标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL0.1mg/mL）：）：用用1 1草酸溶液溶解。临用现配。草酸溶液溶解。临用现配。第6页/共17页0.0.的的2,6-2,6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚溶溶液液：50mg 50mg 2,6-2,6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚溶溶于于0mL0
6、mL含含mgmg碳碳酸酸氢氢钠钠的的热热水水中中，冷冷却却后后再再用用蒸蒸馏馏水水稀稀释释至至mLmL，滤滤去去不不溶溶物物，贮贮棕棕色色瓶瓶内内，44保保存一周有效。存一周有效。第7页/共17页一、提取一、提取称称取取新新鲜鲜柚柚子子20g20g，加加入入2 2草草酸酸溶溶液液500500mlml，研研磨磨成成匀匀浆浆，滤滤纸纸过过滤滤。滤滤渣渣用用2 2草草酸酸洗几次，合并滤液，记录滤液总体积。洗几次，合并滤液，记录滤液总体积。操作步骤操作步骤第8页/共17页二、标准液滴定二、标准液滴定准准确确吸吸取取.0mL抗抗坏坏血血酸酸标标准准液液（含含0.mg抗抗坏坏血血酸酸）于于100mL锥锥形
7、形瓶瓶中中，加加mL 1草草酸酸溶溶液液，用用2,6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚滴滴定定至至淡淡红红色色（15S内内不不褪褪色色即即为为终终点点）。记记录录所所用用染染料料溶溶液液的的体体积积V标标（mL），计计算算出出1mL染染料料相相当当于于多多少少mg抗抗坏坏血血酸酸的的量量（mg）（记记作作T）。取取ml 1草草酸酸作作空白对照，按以上方法滴定（空白对照，按以上方法滴定（）。）。第9页/共17页三、样品滴定三、样品滴定准准确确吸吸取取样样品品提提取取液液（上上清清液液或或滤滤液液）两两份份，每每份份0.0mL0.0mL，分分别别放放入入个个100mL100mL锥锥形形瓶瓶中中，按按上上面面的
8、的操操作作进进行行滴滴定定并并记记录录所所用用染染料料溶溶液液体体积积（mLmL）。记记作作第10页/共17页四、结果计算四、结果计算取取两两份份样样品品滴滴定定所所用用染染料料体体积积平平均均值值，代代入入下式计算下式计算100g100g样品中还原型抗坏血酸的含量：样品中还原型抗坏血酸的含量：含量（含量（mg/100 gmg/100 g样品）样品）W W（V V）T T100100第11页/共17页式中：式中：V 滴定样品提取液消耗染料平均值（滴定样品提取液消耗染料平均值（mL）滴定空白对照所耗用的染料的平均滴定空白对照所耗用的染料的平均ml数数T mL染料所能氧化抗坏血酸染料所能氧化抗坏血
9、酸mg数数 样品提取液的总样品提取液的总ml数数 滴定时所取的样品提取液滴定时所取的样品提取液ml数数W 样品重量（样品重量（g）W（V）T100含量（含量（mg/100 g样品）样品）第12页/共17页（1 1）样样品品提提取取液液定定容容时时若若泡泡沫沫过过多多，可可加加几滴辛醇或丁醇消泡。几滴辛醇或丁醇消泡。（）样样品品的的提提取取液液制制备备和和滴滴定定过过程程，要要避避免免阳阳光光照照射射和和与与铜铜、铁铁器器具具接接触触，以以免免抗坏血酸被破坏。抗坏血酸被破坏。（）滴滴定定过过程程宜宜迅迅速速，一一般般不不超超过过2min2min。样样品品滴滴定定消消耗耗染染料料1 14mL4mL
10、为为宜宜，如如果果超超出此范围，应增加或减少样品提取液用量。出此范围，应增加或减少样品提取液用量。附附 注注第13页/共17页（）草酸有抑制抗坏血酸氧化酶（）草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而草酸无此作用。的作用，而草酸无此作用。（）提取的浆状物如不易过滤，也可（）提取的浆状物如不易过滤，也可离心，留取上清液进行滴定。离心，留取上清液进行滴定。第14页/共17页、该法测定抗坏血酸有何不足？、该法测定抗坏血酸有何不足？、用、用2%2%草酸提取样品的目的是什么？草酸提取样品的目的是什么？思考题思考题第15页/共17页1 1用用本本法法测测定定抗抗坏坏血血酸酸含含量量虽虽简简便便易易行行，可可以以一
11、一次次测测定定大大量量的的样样品品。但但有有下下述述缺缺点点：第第一一，本本法法只只能能测测定定还还原原型型抗抗坏坏血血酸酸，不不能能测测出出具具有有同同样样生生理理功功能能的的氧氧化化型型抗抗坏坏血血酸酸和和结结合合型型抗抗坏坏血血酸酸。第第二二，样样品品中中的的色色素素经经常常干干扰扰对对终终点点的的判判断断，可可预预先先用用白白陶陶土土脱脱色色，或或加加入入2 23ml3ml二氯乙烷，以二氯乙烷层变红为终点。二氯乙烷，以二氯乙烷层变红为终点。2 2用用2 2草草酸酸制制备备样样品品提提取取液液，可可有有效效地地抑抑制制抗抗坏坏血血酸酸氧氧化化酶酶，以以免免抗抗坏坏血血酸酸为为氧氧化化型型而而无无法法滴滴定定。如如果果样样品品中中有有较较多多亚亚铁铁离离子子（FeFe2 2）时时，亦亦会会使使染染料料还还原原而影响测定，这时应改为而影响测定，这时应改为8 8乙酸制备样品提取液。乙酸制备样品提取液。参考答案参考答案第16页/共17页感谢您的观看。第17页/共17页