《最新微生物实验四PPT课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《最新微生物实验四PPT课件.ppt（21页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、微生物实验四微生物实验四【目的要求】学习并了解简单染色法的原理，并掌握其操作方法。掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。了解革兰氏染色法的原理，并掌握其操作方法。了解革兰氏染色法在细菌分类鉴定中的重要性。学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。巩固显微镜(油镜)的使用方法。【实验用品】3）吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液 A液：美蓝(methylene blue)0.6g 95%酒精 30mlB液：KOH 0.01g 蒸馏水 100ml分别配制A液和B液，配好后混合即可。【方法步骤】一、细菌的涂片及简单染色法涂片涂片固定固定染色染色水洗水洗干燥干燥镜检镜检 清理清理干燥
2、干燥【方法步骤】图1 涂片、干燥和热固定【方法步骤】二、革兰氏染色法（经典法）1、涂片 在洁净无油腻的玻片滴两小滴蒸馏水，用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，两种细菌要混合的地方。2、固定 将制成的涂片自然干燥，冷却后固定，固定时通过火焰1-2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。【方法步骤】3、染色初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色1-2min。倾去染色液，用自来水小心地冲洗。媒染 滴加(Lugol)碘液，染1-2min，水洗。脱色 滴加95%乙醇2-3次，脱色20-25s立即水洗，以终止脱色。（此步至关重要）。复染
3、滴加0.5%沙黄，染色2-3min，水洗。最后用吸水纸轻轻吸干。【方法步骤】4、镜检 干燥后，置油镜观察。被染成紫色者即为革兰氏阳性菌(G)；被染成红色者是革兰氏阴性菌(G-)。右图为革兰氏染色法显示的炭疽和金黄色葡萄球菌【方法步骤】【注意事项】难以严格规定。一般可用已知革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌作练习，以掌握脱色时间。当要确证一个未知菌的革兰氏反应时，应同时做一张已知革兰氏阳性菌和阴性菌的混合涂片，以资对照。染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。选用对数生长期的细菌为宜。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。涂片不宜过
4、厚，以免脱色不完全造成假阳性。【实验报告】1结果1）绘出油镜下观察的菌体图像 革兰氏染色效果 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 混合菌【注意事项】玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。挑菌量宜少，涂片宜薄，过厚则不易观察。制片要完全干燥后才能用油镜观察。革兰氏染色成败的关键是脱色时间。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被认为是革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄、脱色时玻片晃动的快慢及乙醇用量多少等因素的影响，2）填表 表1 细菌形态的描述【实验报告】【实验报告】2思考题（1）涂片为什么要固定，固定时应注意什么问题？（2）你在涂片染色过程中遇到了什么问题？试分析其中原因？（3）革兰氏染色中哪一步是关键，为什么？你如何控制这一步。（4）不经复染这一步，能否区别革兰氏阳性菌和阴性菌？