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1、微生物实验常识微生物实验常识1、取土样 选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取210cm处的土壤。盛土的容器应是无菌的。将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等。土样取回后应尽快投入实验，同时取10-15g，称重后经105oC烘干8h，置于干燥器中冷却后再次称重，计算含水量。四、土壤微生物的分离和计数二、菌落总数的测定 平板菌落计数法方法 稀释水样：无菌吸10ml混匀水样注入90ml灭菌水瓶中,混匀成1:10水样。取1:10水样1ml注入9ml灭菌试管中混匀成1:100水样。同法稀释成1:1000,1:10000水样。方法 倾注培养：
2、用1ml无菌吸管吸取23个适当浓度的稀释液1ml,分别注入无菌平皿中，每个稀释度应同时做2个平皿，另取一平皿作空白对照。再做倾注培养(方法同饮用水)。菌落计数：方法同饮用水。菌落总数测定结果分析与报告计算不同稀释度的平均菌落数：稀释度的选择和菌落总数报告方式：首先选择平均菌落在30300之间者进行计算。计算方法和报告方式如表1所示。由表2可判定水质被污染的程度。表2 一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系 水的类别水的类别最清洁水最清洁水清洁水清洁水不太清洁不太清洁水水不清洁水不清洁水极不清洁水极不清洁水菌落总数菌落总数 cfucfum11010010010001000100001000010
3、00001000001.9灭菌与消毒消毒：是指应用物理或化学方法杀死物体表面和内部的病原微生物，而对非病原微生物 及其芽孢并不严格要求全部杀死。用于消毒的化学物质，称为消毒剂。灭菌：是指杀死一切病原菌和非病原菌及其芽孢，使物体上无任何存活的微生物消毒与灭菌的区别 消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体.灭菌是指杀灭一切微生物的营养体,芽孢和孢子.干热灭菌法 灼烧灭菌法：利用火焰直接把微生物烧死。此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品灭菌。干热空气灭菌法：这是实验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160，
4、恒温1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。湿热灭菌法:在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性。另一方面高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡。图412 细菌菌落形态。（a）肉眼观察的细菌菌落形态的多变性。菌落总体形状和边缘状况可由菌落上方俯视观察。而菌落高度则由平板边缘水平观察。1 1、简单染色、简单染色(四）实验方法：四）实验方法：制片制片染色染色水洗水洗干燥干燥镜检镜检（1）制制片片：取取菌菌种种培培养养物物常常规规涂涂片片、自自然然干燥、加热固定；干燥、加热固定；注意无菌注意无菌操作操作 芽芽孢孢有有的的
5、长长在在中中央央或或近近中中央央，圆圆形形或或椭椭圆圆形形，芽芽孢孢的的大大小小，位位置置，在在分分类类鉴鉴定定上上有有一一定定的的意意义义，它它仅仅仅仅是是芽芽孢孢细细菌菌生生活活史史的的一一个个环环节节，它它还还是是检检验验培培养养基基灭灭菌菌彻彻底不彻底的依据。底不彻底的依据。中央芽孢中央芽孢偏端芽孢偏端芽孢游离芽孢游离芽孢末端芽孢末端芽孢荚荚膜膜是是包包围围在在细细菌菌细细胞胞外外的的一一层层粘粘液液状状或或胶胶状状物物质质，其其成成分分为为多多糖糖、糖糖蛋蛋白白或或多多肽肽。由由于于荚荚膜膜与与染染料料的的亲亲和和力力弱弱、不不易易着着色色；而而且且可以溶于水，易在用水冲洗时被除去。
6、可以溶于水，易在用水冲洗时被除去。荚荚膜膜虽虽不不是是细细胞胞的的主主要要结结构构，但但它它是是细细胞胞外外碳碳源源和和能能源源性性贮贮藏藏物物质质，并并能能保保护护细细胞胞免免受受干干燥燥的的影影响响，同同时时能能增增加加某某些些病病原原菌菌的的致致病病能能力力，使使之之抵抵御御宿宿主主吞吞噬噬细细胞胞的的吞噬吞噬。荚膜染色结果荚膜染色结果 背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即荚膜。圈即荚膜。（二）实验原理（二）实验原理 放放线线菌菌是是指指能能形形成成分分枝枝丝丝状状体体或或菌菌丝丝体体带一类革兰氏阳性细菌。带一类革兰氏阳性细菌。放线
7、菌菌落形态放线菌菌落形态（二）实验原理（二）实验原理 酵酵母母菌菌是是多多形形的的、不不运运动动的的单单细细胞胞真真核微生物。核微生物。无性繁殖主要是无性繁殖主要是出芽生殖出芽生殖。本实验通过用本实验通过用美蓝染色浸片美蓝染色浸片来观察来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝（氧化型）美蓝（氧化型）蓝色蓝色美蓝（还原型）美蓝（还原型）无色无色还原剂还原剂氧化剂氧化剂 美美蓝蓝是是一一种种无无毒毒性性染染料料，它它的的氧氧化化型型是是蓝蓝色色的的，而而还还原原型型是是无无色色的的，用用它它来来对对酵酵母母的的活细胞进行染色。活细胞进行染色。死活细胞鉴别原理死活细胞鉴
8、别原理美蓝（氧化型）美蓝（氧化型）蓝色蓝色美蓝（还原型）美蓝（还原型）无色无色酵母活细胞酵母活细胞新陈代谢新陈代谢还原能力还原能力（一）实验目的（一）实验目的（二）实验原理（二）实验原理（三）实验器材（三）实验器材（四）实验方法（四）实验方法（五）实验作业（五）实验作业培培 养养 基基 的的 制制 备备 与与 灭灭 菌菌实验五实验五（一）实验目的（一）实验目的1 1、明确培养基的配制原则；、明确培养基的配制原则；2 2、掌握配制培养基的一般方法和步骤；、掌握配制培养基的一般方法和步骤；3 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；4 4、掌握高压蒸汽灭菌
9、技术，了解几种常用灭菌、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。方法。（二）实验原理（二）实验原理 培养基培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要
10、，配制合适的培养基制合适的培养基.培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基体培养基常用加热灭菌法常用加热灭菌法：1 1、干热灭菌：、干热灭菌：用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌2 2、湿热灭菌、湿热灭菌 高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法 间歇灭菌法间歇灭菌法 煮沸消毒法煮沸消毒法 灭菌灭菌是指应用物理或化学的方法，杀灭物是指应用物理或化学的方法，杀
11、灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。射和化学药品法等。（三）实验器材（三）实验器材1.药品和试剂：药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、NaClNaCl、1010NaOHNaOH溶液、溶液、1010盐酸溶液。盐酸溶液。2.器材：器材：天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、PHPH试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、棉花、线绳、干燥箱、高压锅。棉花、线绳、干燥箱、高压锅。1.1.称量称量按
12、照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。配方：牛肉膏配方：牛肉膏5.0g,5.0g,蛋白胨蛋白胨10.0g10.0g，NaCl5.0g,NaCl5.0g,琼脂琼脂20.0g,20.0g,蒸馏水蒸馏水1000ml,pH7.01000ml,pH7.0。（四）实验方法（四）实验方法 培养基的制备过程培养基的制备过程称量称量-溶解溶解-调节调节pHpH值值-过滤过滤-分装及包扎分装及包扎-灭菌灭菌-灭菌后试管灭菌后试管摆放斜面摆放斜面2.2.溶解溶解向上述瓷缸中加入所需要的水量，搅拌，加热使向上述瓷缸中加入所需要的水量，搅拌，加热使其溶解。如是配制固体培养基，
13、在琼脂的熔化过其溶解。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。3.3.调节调节pHpH值值用玻璃棒沾少许液体，测量用玻璃棒沾少许液体，测量PHPH值。用氢氧化钠和值。用氢氧化钠和盐酸调节盐酸调节PHPH。4.4.过滤过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。去。5.5.分装及包扎分装及包扎根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管内（用分装漏斗）或三角瓶内，
14、管（瓶）口管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。6.6.灭菌：灭菌：高压蒸汽灭菌，高压蒸汽灭菌，1211210 0C C灭菌灭菌2020分钟。分钟。7.灭菌后试管摆放斜面灭菌后试管摆放斜面注注 意意 事事 项项1 1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；2 2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；2 2、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入
15、，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；4 4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的的1/51/5，液体培养基的装量约为管高的，液体培养基的装量约为管高的1/41/4，三角瓶的装量不超过瓶体，三角瓶的装量不超过瓶体的的1/2 1/2；5 5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。而引起污染。返
16、返 回回（一）实验目的（一）实验目的（二）实验原理（二）实验原理（三）实验器材（三）实验器材（四）实验方法（四）实验方法（五）实验作业（五）实验作业微微 生生 物物 的的 分分 离离 与与 纯纯 化化实验六实验六（四）实验方法（四）实验方法（一）、稀释混合平板法（一）、稀释混合平板法图图14-1 14-1 从土壤中分离微生物操作过程从土壤中分离微生物操作过程（三）平板划线分离法（三）平板划线分离法交叉划线法交叉划线法 连续划线法连续划线法（一）实验目的（一）实验目的（二）实验原理（二）实验原理（三）实验器材（三）实验器材（四）实验方法（四）实验方法（五）实验作业（五）实验作业微生物数量的测定微
17、生物数量的测定实验七实验七（二）实验原理（二）实验原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是微利用血球计数板在显微镜下直接计数，是微生物实验中一种十分重要的常用微生物计数方生物实验中一种十分重要的常用微生物计数方法。此法的优点是直观、快速，不论微生物的法。此法的优点是直观、快速，不论微生物的生理状况如何，都可以在显微镜下一一计数。生理状况如何，都可以在显微镜下一一计数。由于此法得到的是活菌和死菌的总和，故又称由于此法得到的是活菌和死菌的总和，故又称为总菌计数法。为总菌计数法。实验内容3（微生物的分离平板划线法）制平板。制平板。凝固后，用接种环取相应的菌液一环（凝固后，用接种环取相应的菌液一环（
18、10-1）在平板上划线。）在平板上划线。1.连续划线法：连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续划线。完毕后，倒置于连续划线。完毕后，倒置于28300C温室培养。温室培养。2.分区划线法：分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环，环，先在培养基的一边作第一次平行划线先在培养基的一边作第一次平行划线34条，再转动培养皿条，再转动培养皿约约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划线。划线部分作第二次
19、划线会，同法依次作第三次和第四次划线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，最后得到纯培养。最后得到纯培养。平板划线菌落分离效果图土壤里的微生物土壤里的微生物 土壤中的微生物主要有土壤中的微生物主要有细菌细菌、放线放线菌菌、真菌真菌等。等。它们能够它们能够分解分解植物的枯枝烂叶、动植物的枯枝烂叶、动物的遗骸等，物的遗骸等，使土壤使土壤变得更加肥沃。变得更加肥沃。阅读课本阅读课本P102P102，回答下列问，回答下列问题：题：1 1、土壤里的微生物主要有哪
20、些、土壤里的微生物主要有哪些种类种类？3 3、微生物的、微生物的作用作用有哪些？有哪些？认识细菌认识细菌细菌的三种形细菌的三种形态态球形、杆形、螺旋形球形、杆形、螺旋形细菌的基本结细菌的基本结构构观看动观看动画画动物细胞和植物细胞动物细胞和植物细胞讨论：讨论：细菌细菌细胞与细胞与植物植物细胞、细胞、动物动物细胞的异同处细胞的异同处 细菌细菌的细胞结构由细胞的细胞结构由细胞壁壁、细胞、细胞膜膜、细胞、细胞质质、没没有成形的细胞有成形的细胞核核、鞭毛鞭毛（有的细菌有）（有的细菌有）组成。组成。与植物细胞、动物细胞相比较，它们与植物细胞、动物细胞相比较，它们都都具具有细胞有细胞质质、细胞、细胞膜膜；
21、植物细胞和细菌细胞具有；植物细胞和细菌细胞具有细胞细胞壁壁，动物细胞没有；细菌细胞具有，动物细胞没有；细菌细胞具有没有成没有成形形的细胞核，植物细胞和动物细胞的细胞核，植物细胞和动物细胞有成形有成形的细的细胞核。胞核。认识放线菌认识放线菌 放线菌是一种具有放线菌是一种具有分枝分枝的的丝状丝状体体。由于菌丝内没有横隔，也。由于菌丝内没有横隔，也没有没有成形成形的细胞的细胞核核，所以一般认为放线，所以一般认为放线菌是一种特殊的菌是一种特殊的细菌细菌。放线菌的菌丝分为放线菌的菌丝分为营养菌丝、气生营养菌丝、气生菌丝和孢子丝菌丝和孢子丝。营养菌丝营养菌丝生长在营养物质内，吸收生长在营养物质内，吸收其中
22、的营养。其中的营养。气生菌丝气生菌丝生长在空气中。生长在空气中。当放线菌生长发育到一定阶段，气当放线菌生长发育到一定阶段，气生菌丝的顶端形成生菌丝的顶端形成孢子丝孢子丝。孢子丝生长到一定阶段就产生孢子丝生长到一定阶段就产生孢子孢子。孢子在适宜的条件下萌发，形成新的孢子在适宜的条件下萌发，形成新的菌菌丝体丝体。认识真认识真菌菌 酵母菌酵母菌、霉菌霉菌和和蘑菇蘑菇都是一都是一些常见的真菌。些常见的真菌。霉菌霉菌的种类很多，最常见的的种类很多，最常见的有有青霉青霉和和匍枝根霉匍枝根霉。观察青霉和匍枝根观察青霉和匍枝根霉霉橘皮上的青橘皮上的青霉霉青青霉霉的的形形态态 青霉青霉的种类很多，从有些青的种类
23、很多，从有些青霉中可以提取霉中可以提取青霉素青霉素。青霉素是一种常用的青霉素是一种常用的抗生素抗生素，对治疗对治疗肺炎、脑膜炎肺炎、脑膜炎等疾病具有等疾病具有显著效果。显著效果。阅读阅读P111资料资料“青霉素和弗莱青霉素和弗莱明明”馒头上的匍枝根霉馒头上的匍枝根霉匍匍枝枝根根霉霉的的形形态态P105P105讨论：讨论：青霉和匍枝根霉在形态上青霉和匍枝根霉在形态上呈丝状呈丝状，它们依靠它们依靠孢子孢子进行进行繁殖繁殖。青霉的直立菌丝内青霉的直立菌丝内有有横隔横隔，顶端呈，顶端呈扫帚扫帚状状，成熟的孢子呈，成熟的孢子呈青绿青绿色色；匍枝根霉的直立菌丝内匍枝根霉的直立菌丝内无无横隔，横隔，顶顶端呈
24、端呈球球状状，成熟的孢子呈，成熟的孢子呈黑黑色色。它们细胞内它们细胞内没有没有叶绿体。是通过叶绿体。是通过营营养菌丝养菌丝从营养物质内吸收水分和获得有从营养物质内吸收水分和获得有机养料，进行机养料，进行腐生腐生生活。生活。香香茹茹平平菇菇食用菌食用菌名贵中药名贵中药材材名贵食用名贵食用菌菌剧毒真剧毒真菌菌 真菌的主要特征真菌的主要特征 真菌的菌体真菌的菌体没有没有根、茎、叶，大根、茎、叶，大多数种类是多数种类是多细胞多细胞个体；细胞里个体；细胞里不含不含有有叶绿体，叶绿体，不能不能进行光合作用制造有进行光合作用制造有机物，只能进行机物，只能进行腐生或寄生腐生或寄生的生活，的生活，依靠依靠孢子孢
25、子进行进行繁殖繁殖。真菌是一类。真菌是一类低等低等的生物。的生物。寄生寄生腐生腐生 生活在一起的两种生物，一方获生活在一起的两种生物，一方获利利，而另，而另一方遭受损一方遭受损害害。寄居在别种生物上并获利的一。寄居在别种生物上并获利的一方称方称寄生物寄生物，被寄居并受害的一方被称为，被寄居并受害的一方被称为寄主寄主。如寄生在人体内如寄生在人体内血吸虫、蛔虫血吸虫、蛔虫。抗生抗生指一个物种通过分泌化学物质指一个物种通过分泌化学物质抑制抑制另一个物另一个物种的生长和生存。种的生长和生存。青霉青霉就是著名的一例。就是著名的一例。指动植物以指动植物以腐烂腐烂的动植物尸体为的动植物尸体为生生，如，如蛆蛆
26、。微微生生物物与与人人类类的的关关系系 作为作为分解者分解者参与自然界参与自然界物质循环物质循环，微生物能，微生物能将动植物的尸体将动植物的尸体分解分解，回归自然界，回归自然界，供植物供植物直接直接利用利用。用于用于酿酒、制作食品酿酒、制作食品等。如用等。如用乳酸杆菌乳酸杆菌制作酸奶、泡菜等，用制作酸奶、泡菜等，用酵母菌酵母菌酿酒、蒸馒头酿酒、蒸馒头等。等。用于用于制药制药。已发现的。已发现的抗生素抗生素中约中约85%85%来自来自放线放线菌菌。引起引起动植物动植物和和人人患病患病。如玉米的。如玉米的黑粉病等是由黑粉病等是由霉菌霉菌引起的。引起的。微生物与人类的关微生物与人类的关系系 在在食品加工食品加工、制药制药、农业病虫害防农业病虫害防治治以及以及环境污染的治理环境污染的治理等方面，微生物等方面，微生物有着有着重要重要的的作用作用。此外，有些微生物也会使此外，有些微生物也会使人体人体或或动动物物致病致病。1、菌落、菌落