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1、微生物检验微生物检验7 7奈瑟菌属（Neisseria）布兰汉菌属（Branhamella）2培养特性n n需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏 感，在培养基中需加入可溶性淀粉。感，在培养基中需加入可溶性淀粉。感，在培养基中需加入可溶性淀粉。感，在培养基中需加入可溶性淀粉。n n需氧生长，初次分离需需氧生长，初次分离需需氧生长，初次分离需需氧生长，初次分离需5%7%5%7%COCO2 2和高湿度和高湿度和高湿度和高湿度n n最适生长温度为最适生长温度为最适
2、生长温度为最适生长温度为35373537，低于，低于，低于，低于3030不生长不生长不生长不生长n n血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、透明或半透明、直径透明或半透明、直径透明或半透明、直径透明或半透明、直径1212mmmm的不溶血、圆形、灰的不溶血、圆形、灰的不溶血、圆形、灰的不溶血、圆形、灰兰色菌落兰色菌落兰色菌落兰色菌落n n卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落卵黄琼
3、脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落n n在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜n n脑膜炎奈瑟菌于孵育脑膜炎奈瑟菌于孵育脑膜炎奈瑟菌于孵育脑膜炎奈瑟菌于孵育2424h h后在培养基上发生自溶后在培养基上发生自溶后在培养基上发生自溶后在培养基上发生自溶3生化特性n n氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外）氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外）n n对糖分解能力、硝酸盐还原能力和对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依据成酶不同，常作为菌
4、种间的鉴别依据n n奈瑟菌属奈瑟菌属DNA中中G+Cmol%为为46544抵抗力n n对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感毒剂敏感n n对青霉素敏感对青霉素敏感n n但近年来由质粒介导的但近年来由质粒介导的但近年来由质粒介导的但近年来由质粒介导的 内酰胺酶所致的耐内酰胺酶所致的耐内酰胺酶所致的耐内酰胺酶所致的耐 药在淋病奈瑟菌中产生较多药在淋病奈瑟菌中产生较多药在淋病奈瑟菌中产生较多药在淋病奈瑟菌中产生较多四、微生物检验脑膜炎奈瑟菌n n标本采集标本采集n n 无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿无菌方法抽
5、取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本刺液等标本刺液等标本刺液等标本n n采集后立即送往实验室采集后立即送往实验室采集后立即送往实验室采集后立即送往实验室n n用血平板进行床边接种后置用血平板进行床边接种后置用血平板进行床边接种后置用血平板进行床边接种后置3535孵育孵育孵育孵育n n血液标本接种在血液培养瓶中置血液标本接种在血液培养瓶中置血液标本接种在血液培养瓶中置血液标本接种在血液培养瓶中置3535孵育孵育孵育孵育n n标本运送时需要标本运送时需要标本运送时需要标本运送时需要3535保温保温保温保温标本直接检查n n直接涂片检查直接涂片检查直接涂片
6、检查直接涂片检查n n脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片n n皮肤瘀点渗出液涂片皮肤瘀点渗出液涂片皮肤瘀点渗出液涂片皮肤瘀点渗出液涂片n n革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告菌，可报告菌，可报告菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌瑟菌瑟菌瑟菌”。有助于流
7、行性脑脊髓膜炎早期诊断。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断n n抗原检查抗原检查抗原检查抗原检查n n通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验n n包括包括包括包括A A、C C、Y Y、W125W125血清型的多价抗体和血清型血清型的多价抗体和血清型血清型的多价抗体和血清型血清型的多价抗体和血清型B B抗体抗体抗体抗体n n检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检测阳性结检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检测阳性结检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检
8、测阳性结检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检测阳性结果可作出快速、推测性诊断果可作出快速、推测性诊断果可作出快速、推测性诊断果可作出快速、推测性诊断分离培养鉴定 n n脑脊液标本脑脊液标本脑脊液标本脑脊液标本n n接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板n n咽拭子或鼻咽拭子咽拭子或鼻咽拭子咽拭子或鼻咽拭子咽拭子或鼻咽拭子n n接种在选择性培养基上如改良的接种在选择性培养基上如改良的接种在选择性培养基上如改良的接种在选择性培养基上如改良的Thayer-Martin(MTM)Thayer-Martin(MTM)、GC
9、-LectGC-Lect、New York City(NCY)New York City(NCY)等培养基等培养基等培养基等培养基n n血液标本血液标本血液标本血液标本n n经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板上平板上平板上平板上n n置置置置5%7%5%7%COCO2 2 35 35孵育，每隔孵育，每隔孵育，每隔孵育，每隔2424h h观察平板观察平板观察平板观察平板鉴定n n初步确定为奈瑟菌属初步确定为奈瑟菌属初步确定为奈瑟
10、菌属初步确定为奈瑟菌属n n直径直径直径直径1212mmmm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落n n涂片革兰染色见阴性双球菌涂片革兰染色见阴性双球菌涂片革兰染色见阴性双球菌涂片革兰染色见阴性双球菌n n氧化酶试验阳性氧化酶试验阳性氧化酶试验阳性氧化酶试验阳性n n进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖 类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌类
11、发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌n n用分型血清确定血清型别用分型血清确定血清型别用分型血清确定血清型别用分型血清确定血清型别n n平板上没有发现菌落需继续观察平板上没有发现菌落需继续观察平板上没有发现菌落需继续观察平板上没有发现菌落需继续观察7272h h后无菌生长可报后无菌生长可报后无菌生长可报后无菌生长可报 告为阴性告为阴性告为阴性告为阴性（二）淋病奈瑟菌1检验程序检验程序2标本采集 n n阴道和宫颈分泌物阴道和宫颈分泌物阴道和宫颈分泌物阴道和宫颈分泌物n n用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内用无菌塑料棒涤纶
12、拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1 1cmcm处处处处 停留停留停留停留10151015秒时间，蘸取秒时间，蘸取秒时间，蘸取秒时间，蘸取n n采集尿道分泌物采集尿道分泌物采集尿道分泌物采集尿道分泌物n n弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本n n尿液尿液尿液尿液n n直肠肛拭标本直肠肛拭标本直肠肛拭标本直肠肛拭标本n n废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌
13、物废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物n n新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物3标本直接检查n n标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查n n男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多 革兰阴性双球菌，
14、有助于男性淋病早期诊断革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断n n女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革 兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄 居，故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可报告居，故对涂片所见结果
15、必须由培养结果得以证实方可报告居，故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可报告居，故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可报告n n新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎4分离培养与鉴定n n选择培养基如选择培养基如MTM，Martin-Lewis（ML），），或或NYCn n置于置于5%CO2气体条件下气体条件下3537孵育孵育n n
16、每隔每隔24h观察平板观察平板（1）形态和生化学鉴定n n可疑菌落可疑菌落n n直径直径直径直径0.510.51mmmm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴灰褐色、光滑、半透明呈露滴灰褐色、光滑、半透明呈露滴灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落状凸起的菌落状凸起的菌落状凸起的菌落n n确认确认n n将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌n n氧化酶和触酶试验阳性氧化酶和触酶试验阳性氧化酶和触酶试验阳性氧化酶和触酶试验阳性n n葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性葡萄糖
17、发酵试验阳性，其它糖类阴性葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性n n培养需观察培养需观察72h后无菌生长可报告为阴性。后无菌生长可报告为阴性。（2）免疫学鉴定n n直接荧光染色直接荧光染色n n凝集试验或免疫渗滤技术凝集试验或免疫渗滤技术（3）分子生物学鉴定n n检测靶片段的基因检测靶片段的基因n n隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌 胞嘧啶胞嘧啶胞嘧啶胞嘧啶DNA DNA 甲基转移酶基因、透明蛋白甲基转移酶基因、透明蛋白甲基转移酶基因、透明蛋白甲基转移酶基因、透明蛋白(o
18、pa)opa)基基基基 因、菌毛因、菌毛因、菌毛因、菌毛DNA DNA 探针、探针、探针、探针、rRNA rRNA 基因探针和基因探针和基因探针和基因探针和porporA A 假假假假 基因。基因。基因。基因。n n基因探针杂交、核酸扩增基因探针杂交、核酸扩增第二节 卡他莫拉菌n n卡他莫拉菌（卡他莫拉菌（M.catarrhalis）又称为卡他又称为卡他布兰汉菌（布兰汉菌（Branhamaceae catarrhalis）n n可存在于健康人群的上呼吸道可存在于健康人群的上呼吸道n n近十年来报道近十年来报道n n导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎导致中耳炎、
19、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎n n在免疫抑制和在免疫抑制和在免疫抑制和在免疫抑制和ICUICU的患者可导致菌血症的患者可导致菌血症的患者可导致菌血症的患者可导致菌血症n n是社区呼吸道感染的主要病原体之一。是社区呼吸道感染的主要病原体之一。是社区呼吸道感染的主要病原体之一。是社区呼吸道感染的主要病原体之一。临床分离n n从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本n n呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液呼吸道感染患者应采取合格痰标
20、本或支气管灌洗液呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液n n口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本n n痰液标本直接涂片革兰染色痰液标本直接涂片革兰染色痰液标本直接涂片革兰染色痰液标本直接涂片革兰染色n n如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为0.51.50.51.5mm革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染革兰阴性双球菌可怀疑
21、卡他莫拉菌感染革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染卡他莫拉菌培养及鉴定n n在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好n n3535 24 24h h孵育后菌落直径孵育后菌落直径孵育后菌落直径孵育后菌落直径1313mmmm，灰白色、光滑，用接灰白色、光滑，用接灰白色、光滑，用接灰白色、光滑，用接 种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动n n氧化酶和触酶阳性氧
22、化酶和触酶阳性氧化酶和触酶阳性氧化酶和触酶阳性n n不发酵葡萄糖和其它糖类产酸不发酵葡萄糖和其它糖类产酸不发酵葡萄糖和其它糖类产酸不发酵葡萄糖和其它糖类产酸n n大多数菌株还原硝酸盐和产生大多数菌株还原硝酸盐和产生大多数菌株还原硝酸盐和产生大多数菌株还原硝酸盐和产生DNaseDNase。n n三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈瑟三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈瑟三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈瑟三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈瑟菌属鉴别菌属鉴别菌属鉴别菌属鉴别n n可产生诱导型可产生诱导型可产生诱导型可产生诱导型 内酰胺酶内酰胺酶内酰胺酶内酰胺酶 奈瑟菌属和卡他布兰汉菌的鉴定结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！28