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1、微生物检验微生物检验11弧菌科n n一群菌体短小、弯曲成弧形或直杆状的革兰阴性细菌n n兼性厌氧，发酵葡萄糖，许多菌株生长需要2%3%氯化钠n n大多数菌株氧化酶阳性n n具有一端单一鞭毛、运动迅速n n弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见。其中有一些种对人类致病。致病机制n n正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍乱弧菌乱弧菌n n但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌时，但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌时，霍乱弧菌可以从胃进入肠道。霍乱弧菌可以从胃进入肠道。n n进入肠道的霍乱弧菌通过鞭毛运动穿过肠粘膜进入肠道的霍乱弧菌通过鞭毛运动穿过肠粘
2、膜表面的粘液层，通过菌毛定植于肠粘膜上皮细表面的粘液层，通过菌毛定植于肠粘膜上皮细胞表面繁殖胞表面繁殖n n产生由染色体介导的对热不稳定的霍乱毒素产生由染色体介导的对热不稳定的霍乱毒素（cholera toxin,CTcholera toxin,CT）而致病而致病n nO1O1群和群和O139O139群的致病机制和过程是一样的群的致病机制和过程是一样的CT(cholera toxin)(cholera toxin)n n结构基因是结构基因是ctxABctxAB操纵子操纵子n n由由A A和和B B两个蛋白质亚单位组成两个蛋白质亚单位组成n nA A亚单位分子量为亚单位分子量为21 81221
3、812DaDa，由由240240个氨基酸组成，在成熟过程个氨基酸组成，在成熟过程中由蛋白水解酶切割成中由蛋白水解酶切割成A1A1和和A2A2两部分，以二硫键相连两部分，以二硫键相连n nA1A1为毒素活性单位，通过为毒素活性单位，通过B B亚单位结合细胞膜上亚单位结合细胞膜上GM1GM1受体的通道受体的通道或或“内吞内吞”进入细胞内，激活腺苷酸环化酶（进入细胞内，激活腺苷酸环化酶（cAMPcAMP酶），使细酶），使细胞内胞内cAMPcAMP大量增加。快速向细胞外分泌水和电解质，使肠腔内大量增加。快速向细胞外分泌水和电解质，使肠腔内水、钠潴留，导致呕吐和腹泻，机体陷于缺水和电解质、酸碱水、钠潴留
4、，导致呕吐和腹泻，机体陷于缺水和电解质、酸碱平衡紊乱状态。平衡紊乱状态。n nB B亚单位分子量为亚单位分子量为11 67711 677DaDa，由由103103个氨基酸组成，为个氨基酸组成，为5 5个单体组成中个单体组成中空的寡聚体。与肠粘膜上皮细胞膜上的神经节苷脂空的寡聚体。与肠粘膜上皮细胞膜上的神经节苷脂GM1GM1受体结合受体结合 其他致病物质n nEl-Tor生物型能产生不耐热溶血素和血凝素n n不耐热溶血素n n具有溶血活性、细胞毒、心脏毒和致死毒性具有溶血活性、细胞毒、心脏毒和致死毒性n nEl-TorEl-Tor生物型的溶血特性可发生变异生物型的溶血特性可发生变异n n血凝素n
5、 n能凝集鸡红细胞能凝集鸡红细胞n n能被能被D-D-甘露糖抑制甘露糖抑制（二）生物学特性 1.形态 n n新从患者标本中分离出的细菌革兰染色阴性，新从患者标本中分离出的细菌革兰染色阴性，弧形或逗点状弧形或逗点状n n在患者在患者“米泔水米泔水”样便中，可呈头尾相接的样便中，可呈头尾相接的“鱼群鱼群”样排列样排列n n菌体一端有鞭毛，悬滴观察时呈菌体一端有鞭毛，悬滴观察时呈“穿梭穿梭”样运样运动动n n有普通菌毛和性菌毛有普通菌毛和性菌毛n nO139O139群有荚膜群有荚膜2.抗原成分n n不耐热的H抗原n n为共同抗原为共同抗原n n耐热的O抗原n n具有群特异性和型特异性，是霍乱弧菌分群
6、和具有群特异性和型特异性，是霍乱弧菌分群和分型的基础分型的基础分型n n根据根据根据根据OO抗原的不同，现有抗原的不同，现有抗原的不同，现有抗原的不同，现有155155个血清群个血清群个血清群个血清群n nO1O1群、群、群、群、O139O139群引起霍乱群引起霍乱群引起霍乱群引起霍乱n nO139O139血清群的抗原编码基因中出现了血清群的抗原编码基因中出现了3636kbkb的新基因的新基因n n缺少了缺少了O1O1群高分子量的群高分子量的OO抗原侧链抗原侧链n n与与O1O1群抗血清无交叉反应，但可与群抗血清无交叉反应，但可与O22O22血清群和血清群和O155O155血清群产生交叉反应，
7、遗传学特征和毒力基因血清群产生交叉反应，遗传学特征和毒力基因与与O1O1群相似。群相似。n nO2O2群群群群 O138O138群血清群群血清群群血清群群血清群n n可引起人类的胃肠炎，不引起霍乱流行，称之为非可引起人类的胃肠炎，不引起霍乱流行，称之为非O1O1群霍乱弧菌。群霍乱弧菌。n n以往也称不凝集弧菌或非霍乱弧菌以往也称不凝集弧菌或非霍乱弧菌O1群霍乱弧菌的O抗原n n由A、B、C三种抗原因子组成n n通过不同组合可形成三个型别n n由由ABAB组成小川型组成小川型(Ogawa)Ogawa)n nACAC组成稻叶型组成稻叶型(Inaba)Inaba)n nABCABC组成彦岛型组成彦岛
8、型(Hikojima)Hikojima)n n彦岛型的抗原性不稳定，各型之间可以相互转换。以小川型和稻叶型为常见流行型别3.培养特性n n营养要求不高，在普通琼脂上生长良好n n兼性厌氧。1644均可生长，以37为适宜n n具耐碱性，在pH6.810.2范围均可生长n n在在pH8.29.0pH8.29.0的碱性胨水或碱性平板上生长迅速，的碱性胨水或碱性平板上生长迅速，其他杂菌被抑制生长其他杂菌被抑制生长n n在在pH8.5pH8.5的碱性胨水中经的碱性胨水中经35354646h h增菌后可在液体增菌后可在液体表面大量繁殖形成菌膜表面大量繁殖形成菌膜常用的选择性培养基n n硫代硫酸盐硫代硫酸盐
9、-枸橼酸盐枸橼酸盐-胆盐胆盐-蔗糖蔗糖(Thiosufale-citrate-Thiosufale-citrate-salts-sucrose,TCBS)salts-sucrose,TCBS)琼脂平板琼脂平板n n霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色n n含亚碲酸钾的选择平板有含亚碲酸钾的选择平板有4 4号琼脂、庆大霉素琼脂号琼脂、庆大霉素琼脂n n生长并将培养基中的碲离子还原成元素碲生长并将培养基中的碲离子还原成元素碲,形成灰褐形成灰褐色菌落中心色菌落中心n n能在无盐培养基上生长能在无盐培养基上生长n n在血琼脂平板上菌落较大在血琼脂平板上菌落较大,El-Tor
10、El-Tor生物型可形成生物型可形成 溶血环溶血环n n在含明胶的培养基上在含明胶的培养基上O139O139群霍乱弧菌可形成不透明的浅群霍乱弧菌可形成不透明的浅灰色菌落，周围有一圈不透明带，此菌落涂片观察可发灰色菌落，周围有一圈不透明带，此菌落涂片观察可发现荚膜现荚膜4生化反应 n n氧化酶阳性氧化酶阳性n n发酵蔗糖，动力阳性发酵蔗糖，动力阳性n n赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性n n可以在无盐培养基上生长可以在无盐培养基上生长n n在含有高于在含有高于6%6%氯化钠的培养基上不能生长氯化钠的培养基上不能生长特特特特 征征征征 古典生
11、物型古典生物型古典生物型古典生物型 El-TorEl-Tor生物型生物型生物型生物型 羊红细胞溶血羊红细胞溶血羊红细胞溶血羊红细胞溶血 D D 鸡红细胞凝集鸡红细胞凝集鸡红细胞凝集鸡红细胞凝集 +V-P V-P V-P V-P 试验试验试验试验 +多粘菌素多粘菌素多粘菌素多粘菌素B B敏感试验敏感试验敏感试验敏感试验 +组噬菌体裂解组噬菌体裂解组噬菌体裂解组噬菌体裂解 +组噬菌体裂解组噬菌体裂解组噬菌体裂解组噬菌体裂解 +抵抗力n n可在河水、井水及海水中存活20天左右n n对热、干燥和光敏感；10012min即死亡n n怕酸耐碱，在正常胃酸中仅能生存4minn n对常用消毒剂敏感，0.5pp
12、m氯15min能杀死n n对庆大霉素耐药（三）微生物检验（三）微生物检验1检验程序2.标本采集和运送 n n霍乱是烈性传染病，凡在流行季节和地区有腹泻症状的患者均应快速霍乱是烈性传染病，凡在流行季节和地区有腹泻症状的患者均应快速霍乱是烈性传染病，凡在流行季节和地区有腹泻症状的患者均应快速霍乱是烈性传染病，凡在流行季节和地区有腹泻症状的患者均应快速准确作出病原学诊断准确作出病原学诊断准确作出病原学诊断准确作出病原学诊断n n在发病早期，尽量在使用抗菌药物之前采集标本在发病早期，尽量在使用抗菌药物之前采集标本在发病早期，尽量在使用抗菌药物之前采集标本在发病早期，尽量在使用抗菌药物之前采集标本n n
13、取患者取患者取患者取患者“米泔水米泔水米泔水米泔水”样便，亦可采取呕吐物或尸体肠内容物，或采取肛样便，亦可采取呕吐物或尸体肠内容物，或采取肛样便，亦可采取呕吐物或尸体肠内容物，或采取肛样便，亦可采取呕吐物或尸体肠内容物，或采取肛门拭子门拭子门拭子门拭子n n标本应避免接触消毒液标本应避免接触消毒液标本应避免接触消毒液标本应避免接触消毒液n n采取的标本最好就地接种碱性胨水增菌采取的标本最好就地接种碱性胨水增菌采取的标本最好就地接种碱性胨水增菌采取的标本最好就地接种碱性胨水增菌n n不能及时接种者可用棉签挑取标本或将肛门拭子直接插入卡布运送不能及时接种者可用棉签挑取标本或将肛门拭子直接插入卡布运
14、送不能及时接种者可用棉签挑取标本或将肛门拭子直接插入卡布运送不能及时接种者可用棉签挑取标本或将肛门拭子直接插入卡布运送培养基中培养基中培养基中培养基中n n送检标本装在密封，不易破碎的容器中，置室温由专人输送送检标本装在密封，不易破碎的容器中，置室温由专人输送送检标本装在密封，不易破碎的容器中，置室温由专人输送送检标本装在密封，不易破碎的容器中，置室温由专人输送n n甘油盐水保存液不适合于弧菌的运送甘油盐水保存液不适合于弧菌的运送甘油盐水保存液不适合于弧菌的运送甘油盐水保存液不适合于弧菌的运送3.标本直接检查n n涂片染色镜检涂片染色镜检涂片染色镜检涂片染色镜检n n取标本直接涂片，固定染色。
15、油镜观察有无取标本直接涂片，固定染色。油镜观察有无取标本直接涂片，固定染色。油镜观察有无取标本直接涂片，固定染色。油镜观察有无“鱼群鱼群鱼群鱼群”样排列的革兰阴样排列的革兰阴样排列的革兰阴样排列的革兰阴性弧菌性弧菌性弧菌性弧菌n n动力和制动试验动力和制动试验动力和制动试验动力和制动试验n n直接取直接取直接取直接取“米泔水米泔水米泔水米泔水”样便，制成悬滴样便，制成悬滴样便，制成悬滴样便，制成悬滴(或压滴或压滴或压滴或压滴)标本后，在暗视野或相差标本后，在暗视野或相差标本后，在暗视野或相差标本后，在暗视野或相差显微镜下直接观察呈穿梭样运动的细菌。显微镜下直接观察呈穿梭样运动的细菌。显微镜下直
16、接观察呈穿梭样运动的细菌。显微镜下直接观察呈穿梭样运动的细菌。n n同法重新制备另一标本涂片，在悬液中加入同法重新制备另一标本涂片，在悬液中加入同法重新制备另一标本涂片，在悬液中加入同法重新制备另一标本涂片，在悬液中加入1 1滴不含防腐剂的霍乱多滴不含防腐剂的霍乱多滴不含防腐剂的霍乱多滴不含防腐剂的霍乱多价诊断血清价诊断血清价诊断血清价诊断血清(效价效价效价效价11：64)64)。可见最初呈穿梭状运动的细菌停止运动并。可见最初呈穿梭状运动的细菌停止运动并。可见最初呈穿梭状运动的细菌停止运动并。可见最初呈穿梭状运动的细菌停止运动并发生凝集，则为制动试验阳性。可推定为霍乱弧菌存在发生凝集，则为制动
17、试验阳性。可推定为霍乱弧菌存在发生凝集，则为制动试验阳性。可推定为霍乱弧菌存在发生凝集，则为制动试验阳性。可推定为霍乱弧菌存在n n快速诊断快速诊断快速诊断快速诊断n n通过直接荧光抗体染色和抗通过直接荧光抗体染色和抗通过直接荧光抗体染色和抗通过直接荧光抗体染色和抗O1O1群抗原的单克隆抗体凝集试验，能够快群抗原的单克隆抗体凝集试验，能够快群抗原的单克隆抗体凝集试验，能够快群抗原的单克隆抗体凝集试验，能够快速诊断霍乱弧菌感染速诊断霍乱弧菌感染速诊断霍乱弧菌感染速诊断霍乱弧菌感染n n霍乱毒素的测定霍乱毒素的测定霍乱毒素的测定霍乱毒素的测定n n用改良的用改良的用改良的用改良的ELISAELIS
18、A法，将纯化的法，将纯化的法，将纯化的法，将纯化的GM1GM1包被，以俘获标本中的包被，以俘获标本中的包被，以俘获标本中的包被，以俘获标本中的CTCT。或采或采或采或采用乳胶凝集测定用乳胶凝集测定用乳胶凝集测定用乳胶凝集测定CTCT，有较高的灵敏度和特异性有较高的灵敏度和特异性有较高的灵敏度和特异性有较高的灵敏度和特异性4.分离、培养与鉴定n n将标本直接接种于碱性胨水，或将运送培养基的将标本直接接种于碱性胨水，或将运送培养基的将标本直接接种于碱性胨水，或将运送培养基的将标本直接接种于碱性胨水，或将运送培养基的表层接种于碱性胨水中表层接种于碱性胨水中表层接种于碱性胨水中表层接种于碱性胨水中35
19、3568 68 h h后，转种后，转种后，转种后，转种TCBSTCBS琼脂平板、琼脂平板、琼脂平板、琼脂平板、4 4号琼脂平板或庆大霉素琼脂平板，号琼脂平板或庆大霉素琼脂平板，号琼脂平板或庆大霉素琼脂平板，号琼脂平板或庆大霉素琼脂平板，353512181218h h观察菌落形态观察菌落形态观察菌落形态观察菌落形态n n在在在在TCBSTCBS上形成黄色，上形成黄色，上形成黄色，上形成黄色，4 4号琼脂或庆大霉素琼脂平号琼脂或庆大霉素琼脂平号琼脂或庆大霉素琼脂平号琼脂或庆大霉素琼脂平板上呈灰褐色中心的菌落，均为可疑菌落板上呈灰褐色中心的菌落，均为可疑菌落板上呈灰褐色中心的菌落，均为可疑菌落板上呈
20、灰褐色中心的菌落，均为可疑菌落n n用用用用O1O1群和群和群和群和O139O139群霍乱弧菌多价和单价抗血清进行群霍乱弧菌多价和单价抗血清进行群霍乱弧菌多价和单价抗血清进行群霍乱弧菌多价和单价抗血清进行凝集凝集凝集凝集n n结合菌落特征和菌体形态，作出初步报告结合菌落特征和菌体形态，作出初步报告结合菌落特征和菌体形态，作出初步报告结合菌落特征和菌体形态，作出初步报告鉴定n n将血清凝集确定的菌落进一步纯培养，依据全面将血清凝集确定的菌落进一步纯培养，依据全面将血清凝集确定的菌落进一步纯培养，依据全面将血清凝集确定的菌落进一步纯培养，依据全面生化反应，血清学分群及分型进行最后鉴定生化反应，血清
21、学分群及分型进行最后鉴定生化反应，血清学分群及分型进行最后鉴定生化反应，血清学分群及分型进行最后鉴定n n符合霍乱弧菌的菌株尚需区分古典生物型和符合霍乱弧菌的菌株尚需区分古典生物型和符合霍乱弧菌的菌株尚需区分古典生物型和符合霍乱弧菌的菌株尚需区分古典生物型和El-El-TorTor生物型生物型生物型生物型n n对病原性弧菌的主要鉴定试验为赖氨酸脱羧酶、对病原性弧菌的主要鉴定试验为赖氨酸脱羧酶、对病原性弧菌的主要鉴定试验为赖氨酸脱羧酶、对病原性弧菌的主要鉴定试验为赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶n n霍
22、乱弧菌和拟态弧菌可在无盐普通肉汤和普通琼霍乱弧菌和拟态弧菌可在无盐普通肉汤和普通琼霍乱弧菌和拟态弧菌可在无盐普通肉汤和普通琼霍乱弧菌和拟态弧菌可在无盐普通肉汤和普通琼脂平板上生长，而其他弧菌则不能脂平板上生长，而其他弧菌则不能脂平板上生长，而其他弧菌则不能脂平板上生长，而其他弧菌则不能 用于霍乱弧菌的鉴别试验n n霍乱红试验霍乱红试验n n霍乱弧菌有色氨酸酶和硝酸盐还原能力。霍乱弧菌有色氨酸酶和硝酸盐还原能力。n n霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应n n粘丝试验（粘丝试验（String TestString Test）n n弧菌属细菌除副溶血性弧菌部分菌株外，均有此
23、反应弧菌属细菌除副溶血性弧菌部分菌株外，均有此反应n nO/129O/129敏感试验敏感试验 n nO/129O/129n n（2 2，4 4DiaminoDiamino6 6，7 7DiisopropylpteridineDiisopropylpteridine，2 2，4 4二氨基二氨基6 6，7 7二异丙基喋啶）二异丙基喋啶）n n1010gg及及150150gg纸片周围出现任何大小的抑菌环均为敏感。纸片周围出现任何大小的抑菌环均为敏感。n nO1O1群和非群和非O1O1群霍乱弧菌均敏感。群霍乱弧菌均敏感。n n但已有对但已有对O/129O/129耐药的菌株出现。用此试验作鉴定时，需特别
24、谨耐药的菌株出现。用此试验作鉴定时，需特别谨慎。需结合其他试验结果如耐盐生长试验等综合考虑慎。需结合其他试验结果如耐盐生长试验等综合考虑5.抗体检测抗体检测n n可用于霍乱的回顾性诊断和培养不能确定的霍乱病例的辅助诊断n n在感染发生后的10天内，特异性的杀菌抗体和抗毒素抗体升高二、副溶血性弧菌Vibrio parahaemolyticus（一）临床意义（一）临床意义n n具有嗜盐性（具有嗜盐性（halophilichalophilic）n n存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼虾类和贝存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼虾类和贝壳及盐渍加工的海产品中壳及盐渍加工的海产品中n n主要引起食物中毒和
25、急性腹泻主要引起食物中毒和急性腹泻n n是我国沿海地区及海岛食物中毒的最常见病原菌是我国沿海地区及海岛食物中毒的最常见病原菌n n胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、寒战胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、寒战等。腹泻呈水样便，偶尔血性，恢复较快，病程等。腹泻呈水样便，偶尔血性，恢复较快，病程2323天，天，通常为自限性通常为自限性n n还可引起伤口感染和菌血症还可引起伤口感染和菌血症致病物质n n通过菌毛的粘附通过菌毛的粘附通过菌毛的粘附通过菌毛的粘附n n毒素毒素毒素毒素n n耐热直接溶血素（耐热直接溶血素（Thermostable direct hemolysin,TDHTh
26、ermostable direct hemolysin,TDH）n n分子量为分子量为21 00021 000，有，有2 2个亚单位组成，能耐受个亚单位组成，能耐受1001001010minmin不被破坏不被破坏n n溶血毒性，溶血毒性，TDHTDH对人和兔红细胞的溶血性较高，对马红细对人和兔红细胞的溶血性较高，对马红细胞不溶血胞不溶血n n细胞毒性，对多种培养细胞如细胞毒性，对多种培养细胞如HelaHela细胞、细胞、FLFL细胞、细胞、L L细胞细胞及鼠心肌细胞有细胞毒性及鼠心肌细胞有细胞毒性n n心脏毒性，可导致心电图异常表现如心脏毒性，可导致心电图异常表现如ST-TST-T改变、房室传
27、导改变、房室传导阻滞、室颤或心跳骤停及心肌损伤阻滞、室颤或心跳骤停及心肌损伤n n肠毒性，使肠粘膜的毛细血管通透性增高，向肠腔分泌亢肠毒性，使肠粘膜的毛细血管通透性增高，向肠腔分泌亢进进n n其结构基因其结构基因tdhtdh也存在于其他致病性弧菌当中也存在于其他致病性弧菌当中n n耐热直接溶血素相关溶血素（耐热直接溶血素相关溶血素（Thermostable direct hemolysin Thermostable direct hemolysin related hemolysin,TRHrelated hemolysin,TRH），），生物学特性与生物学特性与TDHTDH相似相似（二）生物
28、学特性1.形态形态n n革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜，革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜，革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜，革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜，无芽胞无芽胞无芽胞无芽胞2.抗原结构抗原结构 n n耐热的菌体（耐热的菌体（耐热的菌体（耐热的菌体（OO）抗原，具有群特征性，副溶抗原，具有群特征性，副溶抗原，具有群特征性，副溶抗原，具有群特征性，副溶血性弧菌的血性弧菌的血性弧菌的血性弧菌的OO抗原有抗原有抗原有抗原有1313种种种种n n鞭毛抗原，不耐热，无型特异性鞭毛抗原，不耐热，无型特异性鞭毛抗原，不耐热，无型特异性鞭毛抗原，不耐热，无型特异性3培养特性n
29、 n 营养要求不高营养要求不高n n在无盐培养基上不能生长，最适合生长的在无盐培养基上不能生长，最适合生长的氯化钠浓度为氯化钠浓度为3.5%，超过，超过8%不能生长不能生长n n最适最适pH为为7.78.0，但，但pH9.5时仍能生长，时仍能生长，最适生长温度为最适生长温度为3037n n在碱性胨水中经在碱性胨水中经69h增菌可形成菌膜增菌可形成菌膜培养特性n nTCBSTCBS琼脂平板琼脂平板琼脂平板琼脂平板:0.52.00.52.0mmmm大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色菌落大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色菌落n n普通血平板普通血平板普通血平板普通血平板:不溶血或只产生不溶血或只产生 溶血溶血n n
30、从腹泻患者中分离到的菌株从腹泻患者中分离到的菌株从腹泻患者中分离到的菌株从腹泻患者中分离到的菌株95%95%以上在我妻（以上在我妻（以上在我妻（以上在我妻（wagatsumawagatsuma）琼脂上产生琼脂上产生琼脂上产生琼脂上产生 溶血现象，称为神奈川现象（溶血现象，称为神奈川现象（溶血现象，称为神奈川现象（溶血现象，称为神奈川现象（Kanagawa phenomenon,KPKanagawa phenomenon,KP）n n嗜盐性选择平板嗜盐性选择平板嗜盐性选择平板嗜盐性选择平板:较大，圆形，隆起，稍浑浊，半透明或不透较大，圆形，隆起，稍浑浊，半透明或不透 明，无粘性明，无粘性n nS
31、SSS平板平板平板平板:扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有辛辣味，不易扁平，无色半透明，蜡滴状菌落，有辛辣味，不易 刮下，刮下，4848h h后牢固粘着培养基上，部分菌株不能生长后牢固粘着培养基上，部分菌株不能生长n n麦康凯平板麦康凯平板麦康凯平板麦康凯平板:部分菌株不生长部分菌株不生长n n伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本菌的初次分离伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本菌的初次分离伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本菌的初次分离伊红美兰琼脂和中国兰琼脂培养基不能用于本菌的初次分离抵抗力n n抵抗力弱抵抗力弱n n不耐热，不耐热，90 1min即被杀死即被杀死n n淡水中不超过
32、淡水中不超过2日，但海水中能存活日，但海水中能存活47天以上天以上n n耐碱怕酸，耐碱怕酸，1%醋酸或醋酸或50%食醋中食醋中1min死亡死亡（三）微生物检验（三）微生物检验1.检验程序检验程序 微生物检验微生物检验 2.标本采集标本采集:可采集患者的粪便，肛门拭子可采集患者的粪便，肛门拭子和可疑食物。应及时接种，或置碱性胨水和可疑食物。应及时接种，或置碱性胨水或卡或卡-布运送培养基中送检布运送培养基中送检3.分离培养与鉴定(1)增菌培养增菌培养n n标本接种标本接种标本接种标本接种1%1%NaClNaCl碱性胨水或碱性胨水或碱性胨水或碱性胨水或4%4%NaClNaCl蛋白胨水蛋白胨水蛋白胨水
33、蛋白胨水 中进行选择性增菌中进行选择性增菌中进行选择性增菌中进行选择性增菌(2)分离培养分离培养n n标本直接接种或增菌后接种标本直接接种或增菌后接种标本直接接种或增菌后接种标本直接接种或增菌后接种TCBSTCBS平板或嗜盐菌平板或嗜盐菌平板或嗜盐菌平板或嗜盐菌 选择平板选择平板选择平板选择平板n nTCBSTCBS平板：绿色或蓝绿色菌落，不透明，直径平板：绿色或蓝绿色菌落，不透明，直径平板：绿色或蓝绿色菌落，不透明，直径平板：绿色或蓝绿色菌落，不透明，直径 12 12mmmm微突起菌落微突起菌落微突起菌落微突起菌落n n嗜盐菌选择性平板：较大、圆形、隆起，稍混嗜盐菌选择性平板：较大、圆形、隆
34、起，稍混嗜盐菌选择性平板：较大、圆形、隆起，稍混嗜盐菌选择性平板：较大、圆形、隆起，稍混 浊、半透明或不透明、无粘性菌落浊、半透明或不透明、无粘性菌落浊、半透明或不透明、无粘性菌落浊、半透明或不透明、无粘性菌落（3）鉴定n n氧化酶阳性，氧化酶阳性，氧化酶阳性，氧化酶阳性，O/129O/129（150g150g）敏感敏感敏感敏感n n发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸，不发酵蔗糖、乳糖。发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸，不发酵蔗糖、乳糖。发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸，不发酵蔗糖、乳糖。发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸，不发酵蔗糖、乳糖。n n吲哚试验阳性吲哚试验阳性吲哚试验阳性吲哚试验阳性n n大部
35、分菌株脲酶阴性，大部分菌株脲酶阴性，大部分菌株脲酶阴性，大部分菌株脲酶阴性，V-PV-P阴性阴性阴性阴性n nNaClNaCl生长试验生长试验生长试验生长试验n n在不含在不含在不含在不含NaClNaCl和含和含和含和含10%10%的蛋白胨水中不生长，在的蛋白胨水中不生长，在的蛋白胨水中不生长，在的蛋白胨水中不生长，在3%3%和和和和7%7%NaCl NaCl 蛋白胨水中生长蛋白胨水中生长蛋白胨水中生长蛋白胨水中生长n n赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧
36、酶阳性，精氨酸双水解酶阴性n n神奈川现象阳性神奈川现象阳性神奈川现象阳性神奈川现象阳性n n毒素测定毒素测定毒素测定毒素测定n n用免疫学方法测定用免疫学方法测定用免疫学方法测定用免疫学方法测定TDHTDH和和和和TRHTRH。n n用基因探针和用基因探针和用基因探针和用基因探针和PCRPCR方法直接测定毒素基因方法直接测定毒素基因方法直接测定毒素基因方法直接测定毒素基因tdhtdh或或或或trhtrh三、其他弧菌三、其他弧菌 除霍乱弧菌和副溶血弧菌外，以下弧菌也对人类致病。1.拟态弧菌（V.minicus）n n过去认为是蔗糖不发酵的霍乱弧菌过去认为是蔗糖不发酵的霍乱弧菌n n与非与非O1
37、群霍乱弧菌相似群霍乱弧菌相似n n与几种非与几种非O1群霍乱弧菌群霍乱弧菌O抗原有交叉反应抗原有交叉反应n n常引起胃肠炎，偶尔可见伤口感染或菌血症常引起胃肠炎，偶尔可见伤口感染或菌血症n n少数菌株可产生少数菌株可产生CT、TDH等毒素。但不引等毒素。但不引起暴发流行起暴发流行2.创伤弧菌（V.vulnificus）n n19761976年首次被认识。在致病性弧菌中，该菌引起的疾病最为严年首次被认识。在致病性弧菌中，该菌引起的疾病最为严重，引起的菌血症和伤口感染的病程进展非常快而致命。重，引起的菌血症和伤口感染的病程进展非常快而致命。n n发酵水杨酸和发酵水杨酸和ONPGONPG阳性阳性n
38、n感染通常发生在气温较高季节，通过生食牡蛎等海产品，侵感染通常发生在气温较高季节，通过生食牡蛎等海产品，侵入肠粘膜淋巴结和门静脉，侵入血流导致菌血症，死亡率入肠粘膜淋巴结和门静脉，侵入血流导致菌血症，死亡率50%50%n n青年人好发，特别是酒精性肝功能损伤或免疫缺陷人，与转青年人好发，特别是酒精性肝功能损伤或免疫缺陷人，与转铁蛋白有关铁蛋白有关n n引起创口感染，导致蜂窝织炎，偶尔可侵入血流导致菌血症引起创口感染，导致蜂窝织炎，偶尔可侵入血流导致菌血症而死亡。而死亡。n n致病机理尚不明确，但产生的胶原酶、蛋白酶和细胞毒素可致病机理尚不明确，但产生的胶原酶、蛋白酶和细胞毒素可造成组织严重损害
39、造成组织严重损害3.溶藻弧菌（V.alginolyticus）n n最常见于外耳、中耳感染患者，也常见最常见于外耳、中耳感染患者，也常见 于伤口感染于伤口感染n n是弧菌属细菌中耐盐性最强的致病菌是弧菌属细菌中耐盐性最强的致病菌4.河弧菌（V.fluvialis）n n最早从腹泻患者中分离到，全世界均有引最早从腹泻患者中分离到，全世界均有引起腹泻的报道起腹泻的报道n n1981年被命名，之前被归类为年被命名，之前被归类为F群霍乱弧菌群霍乱弧菌 或或CDC EF6群群5.弗尼斯弧菌（V.furnissii）n n该菌很少从粪便中分离到，致病性？该菌很少从粪便中分离到，致病性？n n最近报告从腹泻
40、患者中分离到，提示有一最近报告从腹泻患者中分离到，提示有一定临床意义定临床意义6.霍利斯弧菌（V.hollisae）n n可引起腹泻、创口感染及菌血症可引起腹泻、创口感染及菌血症n n通过食用海产品和接触海水而感染通过食用海产品和接触海水而感染n n通常所有的霍利斯弧菌均携带通常所有的霍利斯弧菌均携带TDH基因基因7.其他弧菌n n麦氏弧菌（麦氏弧菌（V.metschnikovii）n n氧化酶阴性，引起个别患者菌血症和霍乱样肠炎氧化酶阴性，引起个别患者菌血症和霍乱样肠炎氧化酶阴性，引起个别患者菌血症和霍乱样肠炎氧化酶阴性，引起个别患者菌血症和霍乱样肠炎n n可从海产品、鸟类、河水以及污水中分
41、离到可从海产品、鸟类、河水以及污水中分离到可从海产品、鸟类、河水以及污水中分离到可从海产品、鸟类、河水以及污水中分离到n n只需微量的钠盐即可生长只需微量的钠盐即可生长只需微量的钠盐即可生长只需微量的钠盐即可生长n n辛辛那提弧菌（辛辛那提弧菌（V.cincinnatinesis）n n有引起菌血症和脑膜炎的报告有引起菌血症和脑膜炎的报告有引起菌血症和脑膜炎的报告有引起菌血症和脑膜炎的报告n n卡佳丽弧菌（卡佳丽弧菌（V.carchariae）n n有引起伤口感染的报告有引起伤口感染的报告有引起伤口感染的报告有引起伤口感染的报告临床意义n n临床标本中分离的病原性弧菌都应认为有临床意义临床标本
42、中分离的病原性弧菌都应认为有临床意义临床标本中分离的病原性弧菌都应认为有临床意义临床标本中分离的病原性弧菌都应认为有临床意义n n特别是从粪便标本中分离到霍乱弧菌特别是从粪便标本中分离到霍乱弧菌特别是从粪便标本中分离到霍乱弧菌特别是从粪便标本中分离到霍乱弧菌O1O1群、群、群、群、O139O139群群群群和副溶血性弧菌和副溶血性弧菌和副溶血性弧菌和副溶血性弧菌n n从任何临床标本分离到创伤弧菌，均应通知临床医从任何临床标本分离到创伤弧菌，均应通知临床医从任何临床标本分离到创伤弧菌，均应通知临床医从任何临床标本分离到创伤弧菌，均应通知临床医师，并根据我国传染病防治法有关规定及时作师，并根据我国传
43、染病防治法有关规定及时作师，并根据我国传染病防治法有关规定及时作师，并根据我国传染病防治法有关规定及时作传染病报告，并将报告和菌种一起报送到各级法定传染病报告，并将报告和菌种一起报送到各级法定传染病报告，并将报告和菌种一起报送到各级法定传染病报告，并将报告和菌种一起报送到各级法定部门。部门。部门。部门。返回返回气单胞菌属和邻单胞菌属气单胞菌属和邻单胞菌属n n氧化酶阳性，端鞭毛、革兰阴性杆菌、兼性厌氧氧化酶阳性，端鞭毛、革兰阴性杆菌、兼性厌氧氧化酶阳性，端鞭毛、革兰阴性杆菌、兼性厌氧氧化酶阳性，端鞭毛、革兰阴性杆菌、兼性厌氧n n根据表型特征，伯杰系统细菌学手册（第一版）将根据表型特征，伯杰系
44、统细菌学手册（第一版）将根据表型特征，伯杰系统细菌学手册（第一版）将根据表型特征，伯杰系统细菌学手册（第一版）将 其归为弧菌科。其归为弧菌科。其归为弧菌科。其归为弧菌科。n n根据基因特征，根据基因特征，根据基因特征，根据基因特征，MacDonellMacDonell和和和和ColwellColwell建议设立气单建议设立气单建议设立气单建议设立气单胞菌科，而邻单胞菌与肠杆菌科中的变形杆菌属有胞菌科，而邻单胞菌与肠杆菌科中的变形杆菌属有胞菌科，而邻单胞菌与肠杆菌科中的变形杆菌属有胞菌科，而邻单胞菌与肠杆菌科中的变形杆菌属有 更密切的关系。更密切的关系。更密切的关系。更密切的关系。一、气单胞菌属
45、一、气单胞菌属（一）分类与命名n n气单胞菌属原有四个种：气单胞菌属原有四个种：气单胞菌属原有四个种：气单胞菌属原有四个种：n n亲水气单胞菌（亲水气单胞菌（亲水气单胞菌（亲水气单胞菌（A.hydropilaA.hydropila）n n豚鼠气单胞菌（豚鼠气单胞菌（豚鼠气单胞菌（豚鼠气单胞菌（A.caviacA.caviac）n n温和气单胞菌（温和气单胞菌（温和气单胞菌（温和气单胞菌（A.sobriaA.sobria）n n杀鲑气单胞菌（杀鲑气单胞菌（杀鲑气单胞菌（杀鲑气单胞菌（A.salnonicidaA.salnonicida）n n杀鲑亚种（杀鲑亚种（杀鲑亚种（杀鲑亚种（A.salno
46、nicida subsp.salnomicidaA.salnonicida subsp.salnomicida）n n不产色亚种（不产色亚种（不产色亚种（不产色亚种（A.salnonicida subsp.achroniogenesA.salnonicida subsp.achroniogenes）n n杀日本鲑亚种（杀日本鲑亚种（杀日本鲑亚种（杀日本鲑亚种（A.salnomicida subsp.masoucidaA.salnomicida subsp.masoucida）分类与命名n n根据根据DNA杂交结果杂交结果n n分分分分1414个基因种或个基因种或个基因种或个基因种或DNADNA
47、杂交群杂交群杂交群杂交群(DNA hybridiyation(DNA hybridiyation groups,HGs)groups,HGs)，有几个新种名被提出，但很多有几个新种名被提出，但很多有几个新种名被提出，但很多有几个新种名被提出，但很多DNADNA杂交群尚未命名杂交群尚未命名杂交群尚未命名杂交群尚未命名n n杀鲑气单胞菌为嗜冷菌，存在于海水中引起杀鲑气单胞菌为嗜冷菌，存在于海水中引起鱼类等感染，不引起人类感染。鱼类等感染，不引起人类感染。临床意义n n引起肠道内感染引起肠道内感染引起肠道内感染引起肠道内感染n n常见常见常见常见5 5岁以下儿童和成人，夏季腹泻的第二、三位病原菌岁以
48、下儿童和成人，夏季腹泻的第二、三位病原菌岁以下儿童和成人，夏季腹泻的第二、三位病原菌岁以下儿童和成人，夏季腹泻的第二、三位病原菌n n临床症状从温和腹泻到严重痢疾样腹泻，成人呈慢性化临床症状从温和腹泻到严重痢疾样腹泻，成人呈慢性化临床症状从温和腹泻到严重痢疾样腹泻，成人呈慢性化临床症状从温和腹泻到严重痢疾样腹泻，成人呈慢性化n n主要致病物质为溶血毒素和细胞毒素等主要致病物质为溶血毒素和细胞毒素等主要致病物质为溶血毒素和细胞毒素等主要致病物质为溶血毒素和细胞毒素等n n肠道外感染肠道外感染肠道外感染肠道外感染n n主要皮肤和软组织感染，主要由亲水气单胞菌和维隆气单主要皮肤和软组织感染，主要由亲
49、水气单胞菌和维隆气单主要皮肤和软组织感染，主要由亲水气单胞菌和维隆气单主要皮肤和软组织感染，主要由亲水气单胞菌和维隆气单 胞菌引起胞菌引起胞菌引起胞菌引起n n90%90%以上菌血症由亲水气单胞菌和维隆气单胞菌引起，通以上菌血症由亲水气单胞菌和维隆气单胞菌引起，通以上菌血症由亲水气单胞菌和维隆气单胞菌引起，通以上菌血症由亲水气单胞菌和维隆气单胞菌引起，通 常发生在免疫低下人群常发生在免疫低下人群常发生在免疫低下人群常发生在免疫低下人群n n引起眼部感染、脑膜炎、肺炎、胸膜炎、骨髓炎、关节炎、引起眼部感染、脑膜炎、肺炎、胸膜炎、骨髓炎、关节炎、引起眼部感染、脑膜炎、肺炎、胸膜炎、骨髓炎、关节炎、
50、引起眼部感染、脑膜炎、肺炎、胸膜炎、骨髓炎、关节炎、腹膜炎、胆囊炎、下腔性静脉炎和尿道感染腹膜炎、胆囊炎、下腔性静脉炎和尿道感染腹膜炎、胆囊炎、下腔性静脉炎和尿道感染腹膜炎、胆囊炎、下腔性静脉炎和尿道感染生物学特征n n形态形态形态形态n n革兰阴性直杆菌，有时呈球杆状；除杀鲑气单胞菌外均有革兰阴性直杆菌，有时呈球杆状；除杀鲑气单胞菌外均有动力动力n n培养特性培养特性培养特性培养特性 n n营养要求不高，普通培养基上可生长营养要求不高，普通培养基上可生长n nTCBSTCBS培养基不生长，在培养基不生长，在045045范围内均可生长范围内均可生长n n根据生长温度不同可分为根据生长温度不同可